HPLC法測定新傷止痛顆粒中鹽酸小檗堿含量

程培秀鄭萬景李 建周小力魏銀貴張 彬

（1.四川省雅安市食品藥品檢驗所，四川 雅安 625000；2.四川省雅安市名山區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，四川 雅安 625000；3.雅安三九藥業(yè)有限公司，四川 雅安 625000）

HPLC法測定新傷止痛顆粒中鹽酸小檗堿含量

程培秀1鄭萬景2李 建1周小力1魏銀貴1張 彬3

（1.四川省雅安市食品藥品檢驗所，四川 雅安 625000；2.四川省雅安市名山區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，四川 雅安 625000；3.雅安三九藥業(yè)有限公司，四川 雅安 625000）

目的 建立高效液相色譜（HPLC）法測定新傷止痛顆粒中鹽酸小檗堿含量。方法 采用反相HPLC法，色譜柱為phenomenex Gamini-C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈-0.033moL/L磷酸氫二鉀溶液（38∶62），檢測波長為345 nm，流速1.0mL/min，柱溫35℃。結(jié)果 鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.01184～0.1776μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.99996），平均加樣回收率為98.01%，RSD=1.83%（n=6）。結(jié)論 該方法操作簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于新傷止痛顆粒中鹽酸小檗堿的含量測定。

新傷止痛顆粒 鹽酸小檗堿 HPLC法

新傷止痛顆粒為雅安市名山區(qū)中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，由黃柏、當(dāng)歸、川芎、赤芍等多味中藥組成。臨床上有活血化瘀、舒筋活絡(luò)、理氣消腫止痛功效。臨床用于治療骨折、脫位和急性軟組織損傷所致的腫脹、疼痛、功能障礙等疾病。新傷止痛顆粒主藥為黃柏，其中鹽酸小檗堿為黃柏主要有效成分，為確保療效和安全性，結(jié)合該制劑的組分特點［1］，筆者參照有關(guān)文獻(xiàn)［2-11］，建立了高效液相色譜法測定鹽酸小檗堿的含量。現(xiàn)報告如下。

1 儀器與試藥

美國Agilent1260型高效液相色譜儀，DAD檢測器；AS5150A型超聲波清洗器 （天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；BP211D電子天平 （德國賽多利斯公司）；UPT-Ⅱ-10T超純水機（成都超純科技有限公司）。

鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110713-200208）；新傷止痛顆粒樣品及陰性對照樣品由名山區(qū)中醫(yī)醫(yī)院（樣品批號為101018、110209、110214）提供。甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：phenomenex Gemini-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.033mol/L磷酸氫二鉀（38∶62）；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；檢測波長：345 nm；進(jìn)樣量：10μL；理論塔板數(shù)：按鹽酸小檗堿峰計不低于3000。

2.2 對照品溶液制備 精密稱取鹽酸小檗堿29.60mg，置100mL容量瓶中，加鹽酸-甲醇（1∶100）溶解并稀釋至刻度。再從中精密量取2～50mL容量瓶中，加鹽酸-甲醇（1∶100）至刻度，即制成11.84μg/mL的對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 取樣品約1g，精密稱定，置25mL容量瓶中，加入鹽酸-甲醇（1∶100）溶液適量，超聲處理40min，放冷，滴加鹽酸-甲醇（1∶100）溶液至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，得供試品溶液。按處方比例制備不含黃柏的陰性對照樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液（由雅安市名山區(qū)中醫(yī)醫(yī)院提供）。

2.4 專屬性試驗 取2.2、2.3項下的3種溶液，按擬定的色譜條件分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。從圖中可見，供試品溶液色譜在與鹽酸小檗堿對照品相應(yīng)保留時間有一致的色譜峰，陰性對照品溶液無干擾。

圖1高效液相色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取鹽酸小檗堿對照品（11.84μg/mL）溶液1、2、5、8、10、15μL，依次進(jìn)樣，記錄峰面積。以進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=3.5165×103X-1.84037，r=0.99996（n=6）。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.01184～0.1776μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗 精密吸取鹽酸小檗堿對照品（11.84μg/mL）溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定，峰面積的RSD為0.3%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性考察 取同一供試品溶液，室溫下放置，精密吸取10μL，每隔2 h測定1次，24 h內(nèi)共測12次，測定其峰面積，RSD為0.8%。結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.8 重復(fù)性試驗 取同一批樣品6份，制備供試品溶液，進(jìn)樣，分析，結(jié)果樣品峰面積的RSD為0.9%，表明本試驗條件下重現(xiàn)性較好。

2.9 回收率試驗 取已知含量供樣品（含量為0.365mg/g）6份，分別精密加入對照品溶液（0.2960mg/mL）3mL，再按2.3項下方法制備溶液。見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

2.10 樣品含量測定 取樣品3批，測定其含量。結(jié)果含量分別為0.365、0.414、0.409mg/g。

3 討 論

根據(jù)文獻(xiàn)［2-3］，分別考察265、345 nm波長處測得的色譜峰，結(jié)果發(fā)現(xiàn)345 nm處峰形好，與雜質(zhì)峰分離完全。

對流動相乙腈-0.033moL/L磷酸氫二鉀的不同比例進(jìn)行了考察，結(jié)果以乙腈-0.033moL/L磷酸氫二鉀（38∶62）為最佳，基線平穩(wěn)，鹽酸小檗堿的色譜峰分離最好，峰形最好。

分別考察了超聲20、30、40、60min的提取效率，結(jié)果超聲40min提取完全，故確定其超聲40min。

本文建立了對新傷止痛顆粒中鹽酸小檗堿的HPLC法，該方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于提高該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

［1］曾永瓊.新傷止痛顆粒配制工藝探討［J］.北方藥學(xué)，2014，11（4）：59.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：438，465，923.

［3］余志剛，程培秀.金雞顆粒中藥材的鑒別與鹽酸小檗堿的測定［J］.華西藥學(xué)雜志，2010，25（1）：90-91.

［4］高詠，孫征剛，許珊.反相液相色譜法測定乳癖安消片中鹽酸小檗堿的含量［J］.中國藥業(yè)，2010，19（18）：37.

［5］陳進(jìn)，王國凱，劉勁松.HPLC法測定炎可寧片中鹽酸小檗堿的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2007，11（9）：790-791.［6］樂輝.HPLC法測定鹽酸黃連素溶液中鹽酸小檗堿的含量［J］.中國藥師，2009，12（4）：541-542.

［7］李小燕.HPLC法測定三黃片中鹽酸小檗堿的含量［J］.中成藥，2002，24（9）：678-680.

［8］張前珍，吳增寶.高效液相色譜法測定三黃片中鹽酸小檗堿的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2006，10（11）：841-842.

［9］高鵬，王曉南，韋霞.高效液相色譜法測定一清顆粒中鹽酸小檗堿的含量［J］.白求恩軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008，6（3）：179-180.

［10］彭宣灝，吳和珍，馮海清，等.高效液相色譜法測定痛風(fēng)舒寧片中鹽酸小檗堿的含量［J］.湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2013，15（2）：31-32.

［11］唐春發(fā).高效液相色譜法測定胃康寧片中鹽酸小檗堿的含量［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2005，24（8）：731-732.

D etermination of Berberine Hydrochloride Content in Xinshangzhitong Granule by HPLC

CHENG Peixiu1，ZHENG WanJing2，LI Jian1，et al. 1 Ya′an Institute for Food and Drug Control，SiChuan Province，Sichuan，Ya′an 625000，China；2 Mingshan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Ya′an City，Sichuan Province，Sichuan，Ya′an 625000，China

【Abstrac】Objective：To establish a method for determining berberine hydrochloride content in Xinshangzhitong Granule by HPLC.Methods：Berberine hydrochloride was analyzed by using Phenomenex Gamini-C18column（250mm×4.6mm，5μm）with the mobile phase of acetonitrile-0.033mol/L dipotassium hydrogen phosphate（38∶62）at the flow rate was 1.0mL/min.The detection wavelength was 345 nm and the column temperature was 35℃.Results：The linear of berberine hydrochloride was in the range of 0.01184～0.1776μg（r=0.99996）.The average recoveries were 98.01%with RSD of 1.83%（n=6）.Conclusion：The method is simple，reliable and accurate.It can be used for the determination of berberine hydrochloride content in Xinshangzhitong Granule.

Xinshangzhitong Granule；Berberine hydrochloride；HPLC

R289.5

A

1004-745X（2015）05-0803-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.05.018

2015-01-05）

四川省雅安市中醫(yī)重點建設(shè)?？?/p>