楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的穩(wěn)定性研究

張一帆，王　　強(qiáng)，王　　偉，吳莉宇，張　　玉，章程輝

（1.海南大學(xué)食品學(xué)院，海南?？?70228；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)研究所，農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（杭州），浙江省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江省植物有害生物防控省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，浙江杭州310021）

楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的穩(wěn)定性研究

張一帆1，2，王強(qiáng)1，2，王偉2，吳莉宇2，張玉2，章程輝1，*

（1.海南大學(xué)食品學(xué)院，海南?？?70228；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)研究所，農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（杭州），浙江省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江省植物有害生物防控省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，浙江杭州310021）

以楊梅蛋白酶解肽為研究對(duì)象，考察其相對(duì)分子量分布范圍，并以DPPH自由基清除活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性為指標(biāo)，分別研究了溫度、pH、糖、防腐劑和金屬離子等5個(gè)因素對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響。結(jié)果表明，楊梅蛋白酶解肽分子量范圍在118.9～4552.2u，且楊梅蛋白酶解肽有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性及耐酸性，而在堿性條件下，抗氧化活性喪失較快而降血糖活性略微上升；糖類能顯著增加其抗氧化活性，增加順序?yàn)椋浩咸烟牵救樘牵菊崽?；苯甲酸和NaCl對(duì)其抗氧化活性影響及苯甲酸對(duì)其降血糖活性影響都不顯著（p＞0.05），而NaCl在1.5%～2%范圍內(nèi)促進(jìn)了降血糖活性；Cu2+和Zn2+均能降低抗氧化及降血糖活性，而Mg2+和K+對(duì)抗氧化活性影響不顯著（p＞0.05），但Mg2+對(duì)降血糖活性有較小增強(qiáng)作用，K+影響不顯著（p＞0.05）。

楊梅，楊梅蛋白酶解肽，抗氧化，降血糖，穩(wěn)定性

楊梅（Myrica rubra Sieb.et Zucc）是楊梅科楊梅屬的亞熱帶多年生常綠喬木果實(shí)，水分含量87.1%～ 90.9%，總糖含量為9.1%，蛋白質(zhì)含量在0.14%～0.34%［1-3］?！侗静菥V目》中記載：“楊梅味酸甜、性溫、無毒，能止渴、和五臟、滌腸胃、除煩潰惡氣”。目前針對(duì)楊梅功能活性的研究集中于其酚類化合物［4-5］，而楊梅蛋白組分酶解肽的活性研究較為少見。生物酶解肽通常用蛋白酶解法來制備［6］，其主要由大量的不同α-氨基酸和肽鍵組成，在220nm處有最大光吸收。因其特有的分子結(jié)構(gòu)而極易在加工制備和貯藏過程中的不利因素影響下，發(fā)生消旋化、脫?；㈡溋呀饧爸嘏诺?，而發(fā)生降解［7］。因此研究加工和貯藏過程外在因素對(duì)酶解肽穩(wěn)定性的影響是十分必要的。目前已有大量酶解肽抗氧化活性的穩(wěn)定性研究，Chao-Zhi Zhu等［8］研究得出金華火腿酶解肽在NaCl添加量小于6%，溫度低于60℃時(shí)具備穩(wěn)定的抗氧化活性。Shiyuan Dong等［9］研究得出β-乳球蛋白酶解肽和葡萄糖發(fā)生美拉德反應(yīng)后能提高DPPH自由基清除活性、總抗氧化活性和鐵離子的螯合能力。但有關(guān)蛋白酶解肽在降血糖活性穩(wěn)定性方面的研究少見報(bào)道。

本文采用堿溶酸沉法提取楊梅中蛋白組分，先后采用胃蛋白酶和胰蛋白酶獲取楊梅蛋白酶解肽，并考察其相對(duì)分子量分布范圍，選用溫度、pH、糖、防腐劑和金屬離子5個(gè)影響因素，以清除DPPH自由基活性保持率和抑制α-葡萄糖苷酶活性保持率為指標(biāo)，對(duì)楊梅蛋白酶解肽的抗氧化及降血糖活性的穩(wěn)定性進(jìn)行研究。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

楊梅購于杭州文輝大橋水果批發(fā)市場(chǎng)并選用新鮮成熟的“東魁楊梅”品種；胃蛋白酶（3000U/g）、胰蛋白酶（10000U/g） 中國醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，＞97%）、4-硝基苯基-α-D-呋喃葡萄糖苷（PNPG，＞99%）、α-葡萄糖苷酶（Intestinal acetone powders from rat）美國sigma公司；K2SO4、MgSO4、ZnSO4、CuSO4、Na2CO3、無水乙醇（≥99.7%）分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司；HCl、NaOH分析純，西隴化工股份有限公司；桿菌酶、乙氨酸-乙氨酸-酪氨酸-精氨酸德國Serva公司；細(xì)胞色素C、抑肽酶、乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸上海源葉生物科技有限公司。

1500型全波長酶標(biāo)儀美國Thermo公司；210 Plus雙光束紫外可見分光光度計(jì)德國Analylik Jena公司；pH計(jì)梅特勒-托利多儀器有限公司；MW＜5ku分子量截留管Thermo Fisher Scientific公司；EZ-2真空濃縮工作站美國Genevac公司；B-260型恒溫水浴鍋上海亞榮生化儀器廠；2690高效液相色譜儀、2996二極陣列檢測(cè)器美國Waters公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1楊梅粗蛋白的提取及酶解肽的制備楊梅果實(shí)→去核打漿→按料液比1∶10加入蒸餾水→調(diào)pH為10，37℃搖床4h→濃縮過濾→調(diào)pH為2→離心得楊梅粗蛋白。并準(zhǔn)確稱取10g楊梅粗蛋白，參照錢方等［10］和龔麗芬等［11］的酶解工藝條件，按料液比1∶10加入蒸餾水→調(diào)pH為2，加5%胃蛋白酶→37℃搖床4h→調(diào)pH為8，加5%胰蛋白酶→37℃搖床4h→沸水浴10min→離心取上清液→用5ku截留管截留，濾液為實(shí)驗(yàn)樣品（以下簡稱楊梅蛋白酶解肽），備用。

1.2.2楊梅蛋白酶解肽分子量的測(cè)定方法參照GB/T 22729-2008海洋魚低聚肽粉附錄A（高效凝膠過濾色譜法）［12］和陳季旺等［13］的測(cè)定方法，測(cè)定楊梅蛋白酶解肽的分子量。高效液相色譜儀：Waters 2690，檢測(cè)器：Waters 2996二極陣列檢測(cè)器；色譜柱：TSKge G2000 SWXL 300mm×7.8mm；流動(dòng)相：乙腈-水-三氟乙酸（45∶55∶0.1，V/V）；檢測(cè)波長：220nm；柱溫：30℃；流速：0.5mL/min。選取細(xì)胞色素C（MW=12500u）、抑肽酶（MW=6500u）、桿菌酶（MW=1450u）、乙氨酸-乙氨酸-酪氨酸-精氨酸（MW=451u）、乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸（MW=189u）為相對(duì)分子量校正曲線所用標(biāo)準(zhǔn)品，以出峰時(shí)間為橫坐標(biāo)，以分子量的對(duì)數(shù)值（lg）為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，并測(cè)取楊梅蛋白酶解肽的分子量范圍。

1.2.3楊梅蛋白酶解肽對(duì)DPPH自由基清除活性的測(cè)定參照Xican Li等［14］的測(cè)定方法，取2mL DPPH溶液（1×10-4mol/L，用無水乙醇配制）和0.1mL不同處理后的楊梅蛋白酶解肽溶液，加入同一試管中，漩渦混勻室溫避光30min后，于517nm下測(cè)吸光值A(chǔ)樣品，并以等體積無水乙醇代替DPPH溶液做空白組測(cè)吸光值A(chǔ)空白，以等體積蒸餾水代替樣品溶液做對(duì)照組測(cè)吸光值A(chǔ)對(duì)照，用等體積無水乙醇和蒸餾水混合液空白調(diào)零。平行測(cè)定三次取平均值，計(jì)算處理組清除率S1。

同時(shí)計(jì)算楊梅蛋白酶解肽未處理組對(duì)DPPH自由基的清除率S2，蒸餾水替代楊梅蛋白酶解肽做不同處理后對(duì)DPPH自由基的清除率S對(duì)照D，計(jì)算DPPH自由基活性保持率ηD：

1.2.4楊梅蛋白酶解肽對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性的測(cè)定參照Raju等［15］和Ashley等［16］的測(cè)定方法，取50μL不同處理后的楊梅蛋白酶解肽溶液，對(duì)照組用緩沖液代替。加入100μL 5mg/mL的α-葡糖糖苷酶溶液于37℃水浴10min后，加入50μL 5mmol/L的pNPG溶液，樣品空白組和對(duì)照空白組用緩沖液代替，于37℃水浴30min，加入50μL 0.67mol/L的Na2CO3溶液終止反應(yīng)。利用酶標(biāo)儀測(cè)定405nm處吸光值，計(jì)算處理組抑制率S3。

同時(shí)計(jì)算楊梅蛋白酶解肽未處理組對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制率S4，蒸餾水替代楊梅蛋白酶解肽做不同處理后對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制率S對(duì)照α，計(jì)算抑制α-葡萄糖苷酶活性保持率ηα：

1.2.5溫度對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響分別取楊梅蛋白酶解肽5mL，并在25、40、60、80、100℃水浴中加熱處理1h，冷卻至室溫后定容至5mL，測(cè)其對(duì)DPPH自由基清除活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性保持率。

1.2.6pH對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響用1mol/L的HCl和NaOH將楊梅蛋白酶解肽分別調(diào)pH至3～10，室溫靜置1h，同時(shí)用蒸餾水替代樣品做對(duì)照。然后再將各組pH調(diào)回至7，測(cè)對(duì)DPPH自由基清除活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的保持率。

1.2.7不同糖對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響用楊梅蛋白酶解肽分別配制不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)（2%、4%、6%、8%、10%）的葡萄糖、蔗糖和乳糖溶液，同時(shí)用蒸餾水替代樣品做對(duì)照。將處理好的楊梅蛋白酶解肽溶液在100℃加熱處理60min后，快速冷卻至25℃，測(cè)DPPH自由基清除活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的保持率。

1.2.8防腐劑對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響用楊梅蛋白酶解肽分別配制不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)（0.004%、0.008%、0.012%、0.016%和0.020%）的苯甲酸溶液和（0.5%、1.0%、1.5%和2.0%）NaCl溶液，同時(shí)用蒸餾水替代樣品做對(duì)照。室溫靜置1h后，測(cè)DPPH自由基清除活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的保持率。

1.2.9不同金屬離子對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響用楊梅蛋白酶解肽分別配制不同濃度（1、2、3、4、5mmol/L）的K2SO4、MgSO4、ZnSO4和CuSO4溶液，同時(shí)用蒸餾水替代樣品做對(duì)照。靜置2h后，測(cè)DPPH自由基清除活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性的保持率。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均進(jìn)行三次重復(fù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）表示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 16.0軟件分析，通過One-way ANOVA檢驗(yàn)中的鄧肯多重范圍檢驗(yàn)來比較其組間差異顯著性，顯著性水平設(shè)置為p＜0.05。

2　結(jié)果與分析

2.1楊梅蛋白酶解肽的相對(duì)分子量分布

5種標(biāo)準(zhǔn)樣品的相對(duì)分子量分布液相色譜圖如圖1所示，以出峰時(shí)間為橫坐標(biāo)，以分子量的對(duì)數(shù)值（lg）為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=-0.1804X+6.9425，R2=0.9442，并測(cè)得楊梅蛋白酶解肽的分子量分布范圍為118.9～4552.2u。

圖1　5種標(biāo)準(zhǔn)樣品的相對(duì)分子量分布液相色譜圖Fig.1　The HPLC of relative molecular mass distribution of five standard sample

圖2　相對(duì)分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2　The standard curve of relative molecular mass

2.2溫度對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響

由圖3所示，在25～100℃范圍內(nèi)，溫度對(duì)楊梅蛋白酶解肽的抗氧化及降血糖活性影響均不顯著（p＞0.05），活性保持率都基本維持在100%左右，表明楊梅蛋白酶解肽有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性。

圖3　溫度對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響Fig.3　The influence of temperature on antioxidant and hypoglycemic activity of Myrica rubra peptide

2.3pH對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響

如圖4所示，楊梅蛋白酶解肽隨著pH的升高，清除DPPH自由基活性保持率總體呈現(xiàn)出先升后降的趨勢(shì)，在pH3～5的酸性環(huán)境中，楊梅蛋白酶解肽可能部分變性導(dǎo)致抗氧化活性降低，但酸性環(huán)境為水解后肽段提供了大量氫供體，使得楊梅蛋白酶解肽DPPH自由基清除活性保持率仍在95%以上；在pH6～7時(shí)，DPPH自由基清除能力最強(qiáng)；當(dāng)隨著pH的繼續(xù)升高，堿性條件使得楊梅蛋白酶解肽上的氨基等酸性基團(tuán)解離出質(zhì)子［17］，與環(huán)境中羥基結(jié)合生成水，從而減少了提供氫供體能力，使得DPPH自由基清除活性保持率呈下降趨勢(shì)。游麗君等［18］還認(rèn)為這與堿性條件下楊梅蛋白酶解肽發(fā)生脫酰胺和消旋等作用有關(guān)，當(dāng)pH=10時(shí)，DPPH自由基清除活性保持率為88%。而楊梅蛋白酶解肽隨著pH的升高，對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制能力呈現(xiàn)出先穩(wěn)定后上升的趨勢(shì)，可以看出當(dāng)pH＞7時(shí)，楊梅蛋白酶解肽在堿性條件下，肽鏈末端的α-氨基和其他側(cè)鏈基團(tuán)發(fā)生解離，使得蛋白質(zhì)帶負(fù)電，從而具備更優(yōu)的抑制α-葡萄糖苷酶活性抑制能力［19］。

圖4　pH對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響Fig.4　The influence of pH values on antioxidant and hypoglycemic activity of Myrica rubra peptide

2.4不同糖對(duì)楊梅蛋白酶解肽的抗氧化及降血糖活性影響

如圖5所示，三種糖均對(duì)楊梅蛋白酶解肽清除DPPH自由基能力有所加強(qiáng)，加強(qiáng)順序?yàn)槠咸烟牵救樘牵菊崽牵?%～10%濃度范圍內(nèi)，不同糖對(duì)抗氧化活性保持率影響差異顯著（p＜0.05），當(dāng)葡萄糖、乳糖和蔗糖濃度達(dá)到10%時(shí)，DPPH自由基清除活性保持率分別達(dá)到空白樣品的1.34、1.30和1.09倍，這一結(jié)果與楊梅蛋白酶解肽和糖發(fā)生美拉德反應(yīng)密切相關(guān)，羰氨反應(yīng)消耗楊梅蛋白酶解肽上的氨基，使得大量H+處于游離態(tài)，增加了自由基的氫供體，還有一系列中間體還原酮的生成，也提高了對(duì)DPPH自由基的捕獲，從而增加了楊梅蛋白酶解肽的抗氧化活性［20］。在清除DPPH自由基能力中，葡萄糖＞乳糖＞蔗糖的影響結(jié)果也符合糖類影響美拉德反應(yīng)速度的規(guī)律，即單糖＞雙糖，還原性糖＞非還原性糖。

圖5　不同糖對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化活性的影響Fig.5　The influence of different saccharides on antioxidant activity of Myrica rubra peptide

圖6表示了楊梅蛋白酶解肽經(jīng)葡萄糖和蔗糖處理，及葡萄糖和蔗糖本底溶液對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率的比較?？梢钥闯鲈诮笛欠磻?yīng)體系中：

對(duì)硝基苯-α-D-葡萄糖苷（PNPG）α-葡萄糖苷——→酶對(duì)硝基苯酚（PNP）+葡萄糖

楊梅蛋白酶解肽經(jīng)葡萄糖和蔗糖（水解產(chǎn)生葡萄糖）的處理，增加了反應(yīng)產(chǎn)物的量，抑制了上述反應(yīng)體系的進(jìn)行，導(dǎo)致對(duì)硝基苯酚（PNP）的量減少，從而使得吸光值降低，表現(xiàn)出了葡萄糖和蔗糖本底溶液的降血糖活性。因此，這并不能直觀表現(xiàn)出葡萄糖和蔗糖對(duì)楊梅蛋白酶解肽降血糖活性的影響；而楊梅蛋白酶解肽中乳糖的添加對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制能力并未有顯著影響，隨著濃度的升高，抑制率保持在57.2%～59.8%，而乳糖本底溶液未體現(xiàn)出降血糖活性。

圖6　不同糖對(duì)楊梅蛋白酶解肽降血糖活性的影響Fig.6　The influence of different saccharides on hypoglycemic activity of Myrica rubra peptide

2.5防腐劑對(duì)楊梅蛋白酶解肽的抗氧化及降血糖活性影響

NaCl和苯甲酸對(duì)楊梅蛋白酶解肽的抗氧化及降血糖活性影響分別如圖7和圖8所示，可以看出，隨著NaCl和苯甲酸濃度的升高，對(duì)DPPH自由基的清除能力都無顯著性差異（p＞0.05）。但當(dāng)NaCl濃度大于1.5%時(shí)，楊梅蛋白酶解肽對(duì)抑制α-葡萄糖苷酶活性保持率略微升高，且各濃度苯甲酸的添加對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制能力影響不顯著（p＞0.05），而NaCl對(duì)人體安全無毒、代謝無殘留，因此，在楊梅蛋白酶解肽的儲(chǔ)藏運(yùn)輸中，加入低劑量的NaCl作為防腐劑是可行的。

圖7　NaCl對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響Fig.7　The influence of NaCl on antioxidant and hypoglycemic activity of Myrica rubra peptide

圖8　苯甲酸對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響Fig.8　The influence of benzoic acid on antioxidant and hypoglycemic activity of Myrica rubra peptide

2.6不同金屬離子對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的影響

如圖9、圖10所示，不同金屬離子對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖的活性影響均有不同，對(duì)清除DPPH自由基的活性保持率和α-葡萄糖苷酶抑制活性保持率由高到低都依次為Mg2+＞K+＞Zn2+＞Cu2+。就清除DPPH自由基的活性而言，隨著Mg2+和K+濃度的升高，活性保持率趨于平穩(wěn)，分別達(dá)到98.1%和97.1%以上；而Zn2+和Cu2+對(duì)活性保持率有明顯降低趨勢(shì)，當(dāng)濃度達(dá)到5mmol/L時(shí)，Zn2+和Cu2+使楊梅蛋白酶解肽清除DPPH自由基的活性保持率下降至80.9%和78.7%。

圖9　金屬離子對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化活性的影響Fig.9　The influence of different metal ions on antioxidant activity of Myrica rubra peptide

而對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性保持率而言，隨著金屬離子濃度的升高，K+對(duì)其影響均不顯著，而Mg2+的添加使得活性保持率略微上升，這表明楊梅蛋白酶解肽與Mg2+可能發(fā)生螯合作用，Mg2+起到橋梁作用，增加了對(duì)α-葡萄糖苷酶的結(jié)合位點(diǎn)，使得活性保持率有較小的增強(qiáng)作用［21］。但隨其濃度升高會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害作用，因此其安全劑量還需進(jìn)一步考慮；而Zn2+和Cu2+對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性明顯降低，并具有顯著性差異（p＜0.05），當(dāng)Zn2+和Cu2+添加濃度為5mmol/L時(shí)，活性保持率分別降至86.4%和68.0%，這與Zn2+和Cu2+使楊梅蛋白酶解肽的非極性共價(jià)鍵發(fā)生破壞密切相關(guān)，進(jìn)一步導(dǎo)致溶解度降低、疏水基團(tuán)外露等理化性質(zhì)改變，從而使其生物學(xué)活性下降。綜上表明，楊梅蛋白酶解肽在加工和保存過程中盡量不要用鋅、銅等材料制作的容器，以免喪失生物活性和對(duì)人體產(chǎn)生毒害作用。

圖10　金屬離子對(duì)楊梅蛋白酶解肽降血糖活性的影響Fig.10　The influence of different metal ions on hypoglycemic activity of Myrica rubra peptide

3　結(jié)論

楊梅蛋白酶解肽分子量范圍在118.9～4552.2u，其抗氧化及降血糖活性有良好的耐熱性和耐酸性，而在堿性條件下，抗氧化活性喪失較快而降血糖活性略微上升。葡萄糖、乳糖、蔗糖均能增強(qiáng)楊梅蛋白酶解肽的抗氧化活性且增強(qiáng)程度依次為葡萄糖＞乳糖＞蔗糖，而葡萄糖和蔗糖并不能直觀描述出對(duì)楊梅蛋白酶解肽降血糖活性的影響，但乳糖對(duì)楊梅蛋白酶解肽降血糖活性影響不明顯。苯甲酸和NaCl對(duì)楊梅蛋白酶解肽抗氧化活性影響都不顯著，低劑量NaCl能促進(jìn)降血糖活性，因此推薦使用低劑量NaCl作為防腐劑；Zn2+和Cu2+均能降低楊梅蛋白酶解肽的抗氧化及降血糖活性，Mg2+和K+對(duì)抗氧化活性影響不顯著，Mg2+對(duì)降血糖活性有較小增強(qiáng)作用，K+無明顯影響。因此，在加工和保存過程中盡量不要使用Cu2+、Zn2+等材料制作的器皿。本實(shí)驗(yàn)主要探索研究了通過胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解楊梅蛋白制備所得的楊梅蛋白酶解肽，但不同的酶對(duì)蛋白質(zhì)的酶切位點(diǎn)不同，可能導(dǎo)致所得多肽含量和組成也會(huì)不同，也會(huì)影響其活性的測(cè)定，因此在后續(xù)研究中，楊梅蛋白在不同酶的酶解條件下的活性測(cè)定有待深入研究。

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Study on antioxidant and hypoglycemic activity stability from Myrica rubra peptide

ZHANG Yi-fan1，2，WANG Qiang1，2，WANG Wei2，WU Li-yu2，ZHANG Yu2，ZHANG Cheng-hui1，*
（1.College of Food Science and Technology，Hainan University，Haikou 570228，China；2.Institute of Quality and Standard for Agriculture Products，Zhejiang Academy of Agricultural ScienceLaboratory for Risk Assessment of Agricultural Product Quality and Safety，Ministry of Agriculture，Zhejiang Key Laboratory of Food Safety，State Key Laboratory Breeding Base for Zhejiang Sustainable Pest and Disease Control，Hangzhou 310021，China）

The stability of antioxidant and hypoglycemic activity from Myrica rubra peptide were determined with the effects of temperature，pH，saccharides，antiseptics and metal ions on the DPPH radicals scavenging activity and α-glucosidase inhibition activity assessed，but also investigated its relative molecular mass distribution.The result showed that the relative molecular mass distribution of Myrica rubra peptide range from 118.9～4552.2u with an excellent heat-resistant and heat-resistant ability.But antioxidant activity lost and hypoglycemic activity rose slightly in the alkali environment.Saccharides could increase the antioxidant activity significantly in the order of glucose＞lactose＞sucrose.Both benzoic acid and NaCl had no effects on antioxidant activity.Benzoic acid had no significant effects on hypoglycemic activity（p＞0.05），but NaCl improved the hypoglycemic activity from 1.5%to 2%.Both Cu2+and Zn2+reduced the antioxidant and hypoglycemic activity.Mg2+and K+had no significant effects on antioxidant activity（p＞0.05），but hypoglycemic activity was slightly enhanced by Mg2+and K+had no significant effects on hypoglycemic activity（p＞0.05）.

Myrica rubra；peptide；antioxidant；hypoglycemic；stability

TS255.1

A

1002-0306（2015）14-0086-06

10.13386/j.issn1002-0306.2015.14.008

2014-10-20

張一帆（1989-），男，在讀碩士研究生，研究方向：功能性食品。

章程輝（1967-），男，博士，研究員，研究方向：熱帶農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與無損檢測(cè)技術(shù)研究。

農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（杭州）開放課題；國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金（31101390）；浙江省自然科學(xué)基金（LY13C200015）。