三七總皂苷對動(dòng)脈粥樣硬化患者血管炎癥因子及頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度和斑塊的影響*

江小萍曾凡鵬劉首明林小鴛馮素蓮沈祖泓

（廣東省清遠(yuǎn)市中醫(yī)院，廣東清遠(yuǎn)511500）

·研究報(bào)告·

三七總皂苷對動(dòng)脈粥樣硬化患者血管炎癥因子及頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度和斑塊的影響*

江小萍曾凡鵬劉首明林小鴛馮素蓮沈祖泓

（廣東省清遠(yuǎn)市中醫(yī)院，廣東清遠(yuǎn)511500）

目的觀察三七總皂苷對高脂血癥的動(dòng)脈粥樣硬化（AS）患者血清炎癥因子和頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度（CIMT）及斑塊的影響。方法將71例CIMT≥0.9 mm和（或）有頸AS斑塊的高脂血癥患者按隨機(jī)數(shù)字表法分為三七總皂苷組和阿托伐他汀組，采用酶聯(lián)免疫法及彩色超聲顯像儀，觀察兩組患者用藥前后超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、低密度脂蛋白（LDL-C）、人可溶性CD40配體（sCD40L）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）表達(dá)及CIMT和斑塊以及實(shí)驗(yàn)室生化指標(biāo)的變化。結(jié)果兩組患者服藥前hs-CRP、MMP-9、sCD40L、IL-6、TNF-α水平、CIMT和斑塊積分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；兩組患者服藥12周hs-CRP、MMP-9、sCD40L、IL-6、TNF-α水平較各自服藥前明顯降低（P＜0.05），CIMT和斑塊積分較服藥前明顯降低（P＜0.05），兩組服藥前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組患者用藥過程中出現(xiàn)的不良反應(yīng)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論三七總皂苷能保護(hù)高脂血癥的AS患者血管內(nèi)皮功能，抑制頸動(dòng)脈內(nèi)膜增厚及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊增大，延緩AS的進(jìn)展，其機(jī)制與其降低血清hs-CRP、LDLC、sCD40L、MMPs、IL-6、TNF-α水平有關(guān)。

動(dòng)脈粥樣硬化三七總皂苷可溶性CD40配體

動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是一種與炎癥和免疫反應(yīng)密切相關(guān)的疾病，炎癥可致血管內(nèi)皮損傷、動(dòng)脈中膜平滑肌細(xì)胞增生，最終導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)膜脂紋、纖維斑塊和（或）粥樣斑塊形成［1］。sCD40L作為一種新的炎癥標(biāo)志物，與CD40結(jié)合后介導(dǎo)免疫應(yīng)答，參與AS的形成、引發(fā)內(nèi)皮功能障礙，在AS的發(fā)生和發(fā)展起重要作用［2］?；|(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是AS斑塊中炎癥細(xì)胞的產(chǎn)物，亦與AS的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［3］。因此，控制炎癥反應(yīng)、保護(hù)血管內(nèi)皮功能有可能成為治療AS的新途徑。三七總皂苷（tPNS）作為臨床的常用處方藥廣泛應(yīng)用于AS、高脂血癥及冠心病等血管性疾病的治療中，具有良好的調(diào)脂、抗氧化、抑制炎癥反應(yīng)、抗血小板聚集作用［4］。本研究旨在觀察tPNS對高脂血癥的頸AS患者血管內(nèi)皮的保護(hù)及血管炎癥的抑制作用，探討中醫(yī)藥治療早期AS的方法，分析其抗AS的可能機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1病例選擇符合《中國成人血脂異常防治指南》［5］的診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：血脂異常、頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度≥0.9 mm和（或）有頸AS的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：已知或在隨訪期間發(fā)生患嚴(yán)重肝腎疾病、內(nèi)分泌代謝疾病、結(jié)締組織疾病和腫瘤的患者。

1.2臨床資料選取2012年10月至2013年12月在本院住院的血脂異?；颊?5例，其中4例患者失訪，剩余71例。將入選的71例患者按隨機(jī)數(shù)字表法分為三七總皂苷組36例，男性21例，女性15例；平均年齡（64.81±12.41）歲；體質(zhì)量指數(shù)（24.52±4.12）kg/m2；吸煙指數(shù)（313.55±298.15）；高血壓22例，糖尿病6例。阿托伐他汀組35例，男性20例，女性15例；平均年齡（64.29±13.46）歲；體質(zhì)量指數(shù)（25.11±3.18）kg/m2；吸煙指數(shù)（325.13±273.80）；高血壓23例，糖尿病6例。兩組患者臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.3治療方法71例患者均予飲食治療和改善生活方式等處理，對高血壓、糖尿病患者予降壓、降糖治療。三七總皂苷組予三七總皂苷100 mg，口服，每日3次；阿托伐他汀組予阿托伐他汀20 mg，口服，每日1次。兩組療程均為12周。停用阿托伐他汀警戒值［5］：血清總膽固醇（TC）＜2.6 mmol/L；服藥期間出現(xiàn)肌痛同時(shí)肌酸激酶（CK）正常高限5倍、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）正常高限3倍、肌酐221 mmol/L等嚴(yán)重副作用需停藥。

1.4觀察指標(biāo)記錄入選患者服藥前、服藥12周后血常規(guī)、肝腎功能、CK、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、三酰甘油（TG）、血清總膽固醇（TC）和血糖（GLU）、糖化血紅蛋白（HbA1C），采血前72 h禁酒及高脂飲食，空腹12 h取靜脈血。觀察用藥后反應(yīng)：胃腸道反應(yīng)、肝腎功能、出血情況及其他副作用。超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）檢測：采用免疫透射比濁法檢測，全自動(dòng)生化分析儀測定超敏C反應(yīng)蛋白。入選患者均在人院后48 h內(nèi)抽取空腹靜脈血5 mL，3000 r/min離心10 min分離血清，置于-20℃冰箱內(nèi)保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測氧化修飾低密度脂蛋白（ox-LDL）、人可溶性CD40配體（sCD40L）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）。ELISA試劑盒購自生工生物工程（上海）股份有限公司，操作步驟和反應(yīng)條件均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行和設(shè)定。檢測患者頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度（CIMT）：由經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)生對所有患者進(jìn)行頸動(dòng)脈超聲檢查。采用美國通用彩色多普勒超聲診斷儀（GE Vivid7），周圍血管探頭頻率為7.5～10 MHz，于采血前后24 h內(nèi)測量雙側(cè)頸總脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸動(dòng)脈分叉處IMT及動(dòng)脈硬化斑塊。CIMT＜0.9 mm定義為內(nèi)膜中層厚度正常，0.9 mm≤CIMT＜1.3 mm為內(nèi)膜中層增厚，以內(nèi)膜局限性突出管腔、內(nèi)膜厚度≥1.3 mm為斑塊形成指標(biāo)。頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分方法：測定雙側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸動(dòng)脈分叉處斑塊面積，將斑塊面積相加即為其斑塊總積分。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組患者治療前后血清hs-CRP、MMP-9、sCD40L、IL-6、TNF-α水平、CIMT和斑塊總積分以及生化指標(biāo)比較見表1。結(jié)果示兩組患者服藥前、服藥12周hs-CRP、MMP-9、sCD40L、IL-6、TNF-α水平、CIMT和斑塊積分比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；兩組患者服藥12周HDL-C、CK、GLU、HbA1C較本組服藥前無明顯變化（P＞0.05）；LDL-C、TG、TC和hs-CRP、MMP-9、sCD40L、IL-6、TNF-α水平均較本組服藥前明顯降低（P＜0.05），CIMT和斑塊積分較服藥前明顯降低（P＜0.05），兩組服藥后比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2兩組患者不良反應(yīng)情況比較結(jié)果為三七總皂苷組無不良反應(yīng)出現(xiàn)，阿托伐他汀組出現(xiàn)谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高1例、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高1例。

表1　兩組治療前后血脂、血糖、CK、hs-CRP、MMP-9、sCD40L、IL-6、TNF-α水平及CIMT和斑塊積分比較（±s）

表1　兩組治療前后血脂、血糖、CK、hs-CRP、MMP-9、sCD40L、IL-6、TNF-α水平及CIMT和斑塊積分比較（±s）

與本組治療前比較，*P＜0.05；與對照組同時(shí)段比較，△P＜0.05。下同。

斑塊積分（mm2）三七總皂苷組服藥前154.31±52.18 0.94±0.38 3.34±0.785.84±1.383.9±0.885.04±1.18 5.65±0.58 21.36±5.65561.06±72.15561.06±72.15 336.35±62.783.35±0.5843.39±11.611.05±0.242.34±0.89（n=36）服藥后131.90±48.52 1.15±0.32 2.91±0.62*△4.91±0.52*△2.91±0.92*△4.81±1.52 5.37±0.425.19±3.35*△206.8±51.02*△206.80±51.02*158.9±58.82*△1.71±0.52*△19.85±10.39*△0.81±0.12*△1.61±0.92*△阿托伐他汀組服藥前149.73±63.51 0.99±0.41 3.41±0.815.91±1.114.21±0.915.11±1.22 5.59±0.62 23.58±6.59530.71±69.52550.71±69.52 341.95±71.183.21±0.6142.78±10.531.01±0.272.57±1.01（n=35）服藥后155.79±58.67 1.09±0.47 2.79±0.67*4.79±1.27*2.79±0.87*4.79±1.27 5.29±0.475.91±2.99*218.79±48.27*215.79±48.27*159.82±61.61*1.79±0.67*20.11±11.29*0.79±0.17*1.59±0.87*組別時(shí)間CK（U/L）HDL-C（mmol/L）LDL-C（mmol/L）TG（mmol/L）TC（mmol/L）GLU（mmol/L）HbA1C（%）hs-CRP（mg/L）oxLDL（μg/L）sCD40L（pg/mL）MMP-9（ng/mL）IL-6（pg/mL）TNF-α（ng/L）CIMT（mm）

3　討論

炎癥反應(yīng)貫穿于AS斑塊形成、發(fā)展和破裂的全過程，hs-CRP是全身性炎癥反應(yīng)的非特異性的標(biāo)志，可直接參與AS病變的形成、斑塊破裂及血栓形成［6］。CD40屬于腫瘤壞死因子受體超家族，CD40L屬于TNF超家族。CD40L、CD40的相互作用貫穿AS發(fā)生發(fā)展的全過程，CD40L和CD40主要表達(dá)在AS損傷部位的巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、T細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞上［7］。當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷后CD40表達(dá)增加，與CD40L結(jié)合，可激活炎癥反應(yīng)、活化血小板、引發(fā)內(nèi)皮功能障礙［8］，同時(shí)也促進(jìn)MMP-9的產(chǎn)生，MMP-9可降解細(xì)胞外基質(zhì)，最終加速AS的發(fā)生和發(fā)展。研究表明［9］：抑制sCD40L表達(dá)，可保護(hù)血管內(nèi)皮功能、防止AS斑塊的形成和發(fā)展、促進(jìn)斑快的穩(wěn)定。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：外周血清sCD40L、MMPs水平在兩組用藥后明顯低于用藥前、CIMT及斑塊積分明顯低于用藥前，提示三七總皂苷、阿托伐他汀均可有效降低sCD40L、MMPs的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，保護(hù)血管內(nèi)皮功能，抑制頸動(dòng)脈內(nèi)膜增厚及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊增大。

oxLDL易沉積于動(dòng)脈內(nèi)膜，引起血管內(nèi)皮損傷、內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加、巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和動(dòng)脈中膜平滑肌細(xì)胞增生，最終導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)膜脂紋、纖維斑塊和（或）粥樣斑塊形成［10］。同時(shí)，oxLDL可刺激多種炎癥因子如TNF-α、IL-6的表達(dá)，炎癥介質(zhì)共同介導(dǎo)單核-巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，促進(jìn)它們向血管壁的遷移，造成早期血管壁內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，加速AS炎癥反應(yīng)［11］。因此改善血管內(nèi)皮功能及降低炎癥標(biāo)志物水平是預(yù)防AS的關(guān)鍵。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組用藥后外周血清hs-CRP、IL-6、TNF-α水平、CIMI及斑塊積分明顯低于用藥前，提示三七總皂苷可有效降低hs-CRP、IL-6、TNF-α的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)，抑制頸動(dòng)脈內(nèi)膜增厚及AS斑塊增大。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，長期服用三七總皂苷能有效降低AS患者血清炎癥因子的表達(dá)，并能通過抑制CD40/CD40L活化，減少炎癥因子的釋放，從而減輕炎癥反應(yīng)，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，抑制頸動(dòng)脈內(nèi)膜增厚及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊增大，延緩AS的進(jìn)展。

［1］宋蕊，李婉秋，竇健霖，等.白藜蘆醇可通過抑制核因子κB和絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路抗兔動(dòng)脈粥樣硬化［J］.中華心血管病雜志，2013，41（10）：866-869.

［2］Tone A，Shikata K，Nakagawa K，et al.Renoprotecfive effects of elarithromycin via reduction of urinary MCP-1 levels in type 2 diabetic patients［J］.Clin Exp Nephrol，2011，15：79-85.

［3］張曉云，魏萬林，田國祥，等.芪參益氣滴丸對冠狀動(dòng)脈介入術(shù)后炎癥因子及心臟不良事件的影響［J］.中國循證心血管醫(yī)學(xué)雜志，2013，5（2）：167-169.

［4］郭鈺琪，齊冬梅，郝鈺，等.三七皂苷R1調(diào)節(jié)炎性T細(xì)胞亞群保護(hù)血管內(nèi)皮的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（2）：240-244.

［5］中國成人血脂異常防治指南制訂聯(lián)合委員會(huì).中國成人血脂異常防治指南［J］.中華心血管雜志，2007，35（5）：390-419.

［6］彭隆，羅艷婷，劉金來，等.C反應(yīng)蛋白對人外周血CD14+單核細(xì)胞TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響［J］.中國病理生理雜志，2011，27（1）：56-61.

［7］Durakoglugil ME，Kocaman SA，Cetin M，et al.Increased circulating soluble CD40 levels in patients with slow coronary flow phenomenon：an observational study［J］.Anadolu Kardiyol Derg，2013，13（1）：39-44.

［8］閆琰，趙革新，陳北冬，等.銀杏內(nèi)酯B抑制血小板CD40 Ligand表達(dá)的分子機(jī)制研究［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（2）：245-249.

［9］張曉云，魏萬林，田國祥，等.芪參益氣滴丸對冠狀動(dòng)脈介入術(shù)后炎癥因子及心臟不良事件的影響［J］.中國循證心血管醫(yī)學(xué)雜志，2013，5（2）：167-169.

［10］劉桂林，竇迎春，喬云，等.三七總皂苷對動(dòng)脈粥樣硬化血管內(nèi)皮的保護(hù)作用［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2013，11（9）：1094-1096.

［11］Zhang B，Wu T，Chen M.The CD40/CD40L system：a new therapeutic target for disease［J］.Immunol Lett，2013，153（1-2）：58-61.

The Effect of Total Panax Notoginseng Saponins（tPNS）on Inflammatory Factor，Carotid Artery Intimal Medial Thickness（CIMT）and Atherosclerotic Plaque of Hyperlipidemia Patients with Atherosclerosis

JIANG Xiaoping，ZENG Fanpeng，LIU Shouming，et al.
Qingyuan Hospital of TCM，Guangdong Province，Guangdong，Qingyuan 511500，China

Objective：To study the effect of total panax notoginseng saponins（tPNS）on Inflammatory factor，carotid artery intimal medial thickness（CIMT）and Atherosclerotic plaque of hyperlipidemia patients with atherosclerosis.Methods：71 patients were divided random into 2 groups：TPNS group and atorvastatin group. Before and after medication，the levels of Serum hsCRP，oxLDL，sCD40L，MMPs，IL-6，TNF-α，CIMT and Atherosclerotic plaque were measured in 71 patients.Results：Before medication，the levels of Serum hsCRP，oxLDL，sCD40L，MMPs，IL-6，TNF-α，CIMT and Atherosclerotic plaque of both groups were not statistically significant.After 12 weeks′medication，the levels of Serum hsCRP，oxLDL，sCD40L，MMPs，IL-6，TNF-α，CIMT and Atherosclerotic plaque of both groups were significantly lower than those before medication.The side effects of medicine of both groups were not statistically significant.Conclusions：TPNS has a protective effect on vascular endothelium in hyperlipidemia patients with atherosclerosis.This effect is related to downregulation of serum hs-CRP，oxLDL level and the decrease of sCD40L，MMPs，IL-6，TNF-αexpression in hyperlipidemia patients with atherosclerosis.

Atherosclerosis；Total pannax notoginseng saponin（tPNT）；Soluble CD40 ligand

R543.5

A

1004-745X（2015）10-1753-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.10.020

2015-05-11）

廣東省中醫(yī)藥局建設(shè)中醫(yī)藥強(qiáng)省科研基金資助項(xiàng)目（20121098）