兔眼藍(lán)莓粉藍(lán)增殖培養(yǎng)基的篩選

姜放軍，朱敏，李淑媛

（湖南生物機(jī)電職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410127）

兔眼藍(lán)莓粉藍(lán)增殖培養(yǎng)基的篩選

姜放軍，朱敏，李淑媛

（湖南生物機(jī)電職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙410127）

［目的］篩選出藍(lán)莓最佳增殖培養(yǎng)基。［方法］以兔眼藍(lán)莓粉藍(lán)無根試管苗為試材，采用正交試驗(yàn)的方法，對(duì)增殖培養(yǎng)中玉米素、萘乙酸及糖3個(gè)因素的影響進(jìn)行研究。［結(jié)果］結(jié)果表明，不同激素組合以及不同蔗糖濃度對(duì)兔眼藍(lán)莓粉藍(lán)單芽莖段增殖效果有顯著影響，其影響由高到低分別是ZT濃度、IBA濃度、蔗糖濃度。［結(jié)論］繼代增殖培養(yǎng)基最佳配方為：WPM+ZT 0.6 mg/L+IBA 0.3 mg/L+2%糖+0.7%瓊脂，增殖系數(shù)達(dá)5.67。

兔眼藍(lán)莓；增殖培養(yǎng)基；篩選

藍(lán)莓又名越橘，屬杜鵑花科（Ericaeae）越橘屬（Vaccinium）植物，為多年生落葉常綠灌木或小灌木植物［1］。因其含有多種生理活性成分和豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有極高的營(yíng)養(yǎng)與保健價(jià)值，聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織將其列為人類五大健康食品之一［2］。我國(guó)人工栽培藍(lán)莓起步較晚，但因市場(chǎng)需求旺盛，發(fā)展迅速。湖南省是農(nóng)業(yè)大省，引種兔眼藍(lán)莓與高叢藍(lán)莓栽種條件比較符合，目前，在湖南省婁底、長(zhǎng)沙縣、衡陽等地均試種成功，因此，加速發(fā)展藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)在該省勢(shì)在必行［3］。

藍(lán)莓繁殖常用方式有綠枝扦插法、種子繁殖法、嫁接法等，因其繁殖速度慢，幼苗長(zhǎng)勢(shì)弱，不能滿足大量苗木的市場(chǎng)需求。植物組織培養(yǎng)技術(shù)育苗可以在短期內(nèi)大大提高繁殖系數(shù)，縮短繁殖時(shí)間，并且可以保持品種的優(yōu)良特性，已成為藍(lán)莓育苗的一大趨勢(shì)。藍(lán)莓組培育苗研究已取得了一定進(jìn)展，但培養(yǎng)過程中易污染，增殖系數(shù)低以及生根難等問題依然存在［4］。該研究利用正交試驗(yàn)法［5］，旨在篩選出兔眼藍(lán)莓粉藍(lán)最佳增殖培養(yǎng)基，解決繁殖系數(shù)低的問題，優(yōu)化藍(lán)莓苗木工廠化生產(chǎn)技術(shù)體系，滿足湖南藍(lán)莓商品基地建設(shè)的需要。

1　材料與方法

1.1材料

供試材料為兔眼藍(lán)莓粉藍(lán)無根試管苗，由湖南省星城明月生態(tài)農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司提供。

1.2方法

1.2.1繼代培養(yǎng)基的選擇與配制。基本培養(yǎng)基選用改良WPM培養(yǎng)基［6］，即以水合硝酸鈣［Ca（NO3）2· 4H2O］684 mg/L、硝酸鉀（KNO3）190 mg/L、乙二胺四乙酸鐵鈉（C10H12FeN2NaO8·3H2O）14.7 mg/L代替原WPM培養(yǎng)基中的CaCl2、K2SO4、FeSO4和乙二胺四乙酸二鈉（Na2-EDTA）。

利用正交試驗(yàn)，按表1在基本培養(yǎng)基中添加不同濃度的玉米素ZT（0.6、1.0、1.5 mg/L）、吲哚丁酸IBA（0.1、0.3、0.5 mg/L）、蔗糖（10、20、30 g/L）配制9個(gè)處理增殖培養(yǎng)基。

表1　增殖正交試驗(yàn)L9（34）因素水平

1.2.2材料的選擇與處理、接種與繼代培養(yǎng)。在無菌超凈工作臺(tái)上，將60 d苗齡的長(zhǎng)勢(shì)良好的粉藍(lán)無根試管苗剪成1.0～1.5 cm長(zhǎng)帶單芽的莖段，接入上述增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每個(gè)處理接種5瓶，每瓶接種1個(gè)莖段，重復(fù)3次。培養(yǎng)條件為溫度25℃，相對(duì)濕度70%，光照強(qiáng)度3 000 lx，光照時(shí)間16 h/d。30 d后，調(diào)查增殖系數(shù)（增殖系數(shù)=總叢生芽數(shù)/總接種芽個(gè)數(shù)）、增殖芽的生長(zhǎng)狀況（莖高度及質(zhì)量、葉色）。

1.2.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。用Excel應(yīng)用軟件制作圖表，用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行方差分析。

2　結(jié)果與分析

2.1ZT濃度對(duì)藍(lán)莓單芽莖段增殖系數(shù)的影響

試管苗的單芽莖段在不同培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 d后，不同ZT濃度處理粉藍(lán)的增殖系數(shù)見表2。隨著ZT濃度的增加，藍(lán)莓莖段增殖系數(shù)逐漸降低。當(dāng)ZT濃度為0.6 mg/L時(shí)，增殖系數(shù)為4.62，顯著高于1.0 mg/L和1.5 mg/L。

表2　ZT濃度對(duì)藍(lán)莓單芽莖段增殖系數(shù)的影響

2.2IBA濃度對(duì)藍(lán)莓單芽莖段增殖系數(shù)的影響

試管苗的單芽莖段在不同培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 d后，不同IBA濃度處理粉藍(lán)的增殖系數(shù)見表3。隨著IBA濃度的增加，藍(lán)莓單芽莖段增殖系數(shù)呈先增高后降低趨勢(shì)。當(dāng)IBA濃度為0.3 mg/L時(shí)，增殖系數(shù)為3.69，顯著高于0.5 mg/L，但與0.1 mg/L差異不顯著。

表3　IBA濃度對(duì)藍(lán)莓單芽莖段增殖系數(shù)的影響

2.3蔗糖濃度對(duì)藍(lán)莓單芽莖段增殖系數(shù)的影響

試管苗的單芽莖段在不同培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 d后，不同蔗糖濃度處理粉藍(lán)的增殖系數(shù)見表4。隨著蔗糖濃度的增加，藍(lán)莓單芽莖段增殖系數(shù)呈先增高后降低趨勢(shì)。當(dāng)蔗糖濃度為20 g/L時(shí)，增殖系數(shù)為3.73，顯著高于10 g/L和30 g/L。

表4　蔗糖濃度對(duì)藍(lán)莓單芽莖段增殖系數(shù)的影響

2.4不同處理對(duì)藍(lán)莓單芽莖段增殖效果的影響［7］

試管苗在不同培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 d后，9組試驗(yàn)處理粉藍(lán)的增殖系數(shù)及生長(zhǎng)情況見表5。不同激素組合以及不同蔗糖濃度對(duì)兔眼藍(lán)莓粉藍(lán)單芽莖段增殖效果有顯著影響。在9個(gè)試驗(yàn)組培養(yǎng)基中培養(yǎng)30 d時(shí)，均呈現(xiàn)不同程度的芽苗增殖，但苗的莖和葉的生長(zhǎng)狀況出現(xiàn)了較大差異。表5顯示，ZT濃度為0.6 mg/L時(shí)，增殖芽莖葉為綠色，而在1.0和1.5 mg/L時(shí)，增殖芽莖葉出現(xiàn)不同程度的發(fā)紅現(xiàn)象，且隨著ZT濃度的升高，增殖系數(shù)降低，此現(xiàn)象說明ZT濃度過高對(duì)芽苗增殖有抑制作用；蔗糖濃度為20 g/L，IBA濃度為0.3 mg/L時(shí)增殖系數(shù)最高，結(jié)合表5中其他蔗糖濃度和IBA濃度配比培養(yǎng)基中芽苗增殖情況，說明低或高濃度蔗糖和IBA對(duì)芽苗的增殖均有抑制作用，而適當(dāng)?shù)恼崽?、IBA濃度配比能促進(jìn)兔眼藍(lán)莓粉藍(lán)叢芽增生。由以上結(jié)論得出，培養(yǎng)基配方為：WPM+0.6 mg/L ZT+0.3 mg/L IBA+20 g/L蔗糖+ 0.7%瓊脂，叢芽誘導(dǎo)增殖效果最好，增殖率達(dá)5.67，莖綠且粗壯，葉片綠。由表5還可知，RZT＞RIBA＞R蔗糖，說明在3個(gè)因素中，ZT濃度對(duì)藍(lán)莓單芽莖段增殖效果影響最大，其次是IBA濃度，再次是蔗糖濃度。

表5　正交試驗(yàn)增殖結(jié)果

3　結(jié)論與討論

（1）增殖培養(yǎng)是植物組培育苗技術(shù)的關(guān)鍵技術(shù)之一，它影響苗的生產(chǎn)量。在藍(lán)莓組培工廠化生產(chǎn)過程中，增殖培養(yǎng)決定其生產(chǎn)量，也是最重要的一環(huán)。已有研究表明，藍(lán)莓快繁的培養(yǎng)基以改良WPM的效果最好，且在增殖中激素以及糖的作用至關(guān)重要。因此，筆者主要采用了改良WPM培養(yǎng)基，重點(diǎn)探討玉米素、萘乙酸及糖的效應(yīng)。該研究表明，利用0.6 mg/L ZT、0.3 mg/L IBA、20 g/L蔗糖進(jìn)行增殖培養(yǎng)，增殖倍數(shù)達(dá)到5.7倍以上，且叢生芽生長(zhǎng)健壯，生長(zhǎng)速度快，遠(yuǎn)高于前人在兔眼藍(lán)莓增殖研究中的結(jié)果［8-9］。

（2）在增殖培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的莖葉發(fā)紅、苗細(xì)、易污染等現(xiàn)象也是我們?cè)谏a(chǎn)過程需著力解決的問題。ZT在增殖培養(yǎng)過程中起關(guān)鍵作用，因其價(jià)格較貴，在實(shí)際生產(chǎn)中用量較大，必然導(dǎo)致生產(chǎn)成本增高，尋求一種替代物解決生產(chǎn)成本過高問題值得進(jìn)一步研究。

［1］顧姻，賀美安.藍(lán)漿果與蔓越桔［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.2001.

［2］烏鳳章，王賀新，陳英敏.我國(guó)兔眼藍(lán)莓生理生態(tài)研究進(jìn)展［J］.北方園藝，2006（3）：48-49.

［3］吳思政，聶東伶，陳國(guó)華.藍(lán)莓主要栽培技術(shù)及其在湖南的發(fā)展前景［J］.湖南林業(yè)科技，2012（5）：135-138.

［4］廖優(yōu)江，范夢(mèng)婕，何腱，等．藍(lán)莓綠枝扦插育苗技術(shù)［J］．中國(guó)南方果樹，2008（2）：26-28.

［5］李志西、杜雙奎．試驗(yàn)優(yōu)化設(shè)計(jì)與統(tǒng)計(jì)分析［M］.北京：科學(xué)出版社，2010.

［6］粱文衛(wèi).藍(lán)莓最佳繼代培養(yǎng)基的篩選試驗(yàn)［J］．黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（8）：32-34.

［7］張長(zhǎng)青，李廣平，朱士農(nóng)，等．兔眼越橘莖段快繁高效技術(shù)研究［J］．果樹學(xué)報(bào)，2007，24（6）：837-840.

［8］劉樹英，安偉，孔令學(xué)，等．兔眼越橘芽的誘導(dǎo)及再生［J］．吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004.26（6）：632-635.

［9］劉捷，吳小鋒，劉學(xué)平，等．藍(lán)漿果的組織培養(yǎng)及離體微繁技術(shù)研究［J］．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（5）：101-103．

（責(zé)任編輯張楊林）

Selection on Proliferation Medium of Vaccinium ashei Reade Powderblue

JIANG Fang-junet al.（Hunan Biological and Electromechanical Polytechnic，Changsha，Hunan 410127）

［Objective］The aim was to screen out the best proliferation medium of Vaccinium ashei Reade.［Method］Taking rootless plantlets of Vaccinium ashei Reade Powderblue as materials，using the method of orthogonal experiment，the effect of three factors ZT，NAA and sugar in proliferation were studied.［Result］The results showed that different hormone combinations and different sucrose concentrations had significant influence on the effect of the proliferation of Vaccinium ashei Reade powderblue single bud stem section.The effects from high to low were ZT concentration，IBA conncentration and sucrose concentration.［Conclusion］The best formula of subculture medium was WPM+ZT 0.6 mg/L+IBA 0.3 mg/L+2%sugar+0.7%agar，and the multiplication coefficient was 5.67.

Vaccinium ashei Reade；Proliferation medium；Selection

S663

A

2095-0896（2015）12-035-03

湖南生物機(jī)電職業(yè)技術(shù)學(xué)院院級(jí)課題“藍(lán)莓組培快繁技術(shù)研究與應(yīng)用”（14YX01）。

姜放軍（1977-），女，湖南長(zhǎng)沙人，講師，碩士，從事植物育苗與天然產(chǎn)物開發(fā)等方面研究。

2015-11-18