• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定紫蘇籽油中11種酚類(lèi)化合物

    2015-11-03 07:54吳嬈等
    分析化學(xué) 2015年10期
    關(guān)鍵詞:串聯(lián)質(zhì)譜高效液相色譜

    吳嬈等

    摘 要 基于新型富集材料磁性羧基化多壁碳納米管與高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜,建立了紫蘇籽油中11種酚類(lèi)化合物同時(shí)分離與檢測(cè)的方法。對(duì)影響富集分離效果的重要因素,如流動(dòng)相、流動(dòng)相中酸的添加量、流速、進(jìn)樣量及碰撞能量等條件進(jìn)行了詳細(xì)優(yōu)化。在優(yōu)化條件下,11種酚類(lèi)化合物線(xiàn)性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)為0.993~0.999,檢出限(LOD, S/N=3)和定量限(LOQ,S/N=10)分別在0.02~0.70 ng/mL,0.06~2.0 ng/mL范圍內(nèi),以50和500 ng/mL添加濃度水平進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證,回收率為79.6%~121.5%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.06%~13.2%。將本方法應(yīng)用于紫蘇籽油樣品的分析,其含量在7.32~68.6 ng/g之間。結(jié)果表明,本方法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確可靠,適用于紫蘇籽油等植物油中酚類(lèi)化合物定量分析。

    關(guān)鍵詞 紫蘇籽油; 酚類(lèi)化合物; 磁固相萃取法; 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜

    1 引 言

    紫蘇(Perillafrutescen(L)Brit.)又名赤蘇、香蘇等,為唇形科一年生草本植物,是我國(guó)傳統(tǒng)的藥食兩用植物。紫蘇籽油是由紫蘇籽經(jīng)烘焙、壓榨和精煉獲得食用油[1],具有防止動(dòng)脈粥樣硬化、降血脂、抗氧化、抗衰老、抑菌、抗腫瘤、平喘等作用[2~7]。然而,其作用的分子機(jī)理尚不清楚[7]。目前紫蘇籽油化學(xué)成分認(rèn)識(shí)僅限于脂肪酸(主要α-亞麻酸[8]),揮發(fā)物[6],紫蘇籽和果渣中迷迭香酸、芹黃素和木犀草素等[9]。酚類(lèi)化合物具有抗氧化作用,預(yù)防心血管疾病,抑菌、抗癌和解毒護(hù)肝[10~13]。因此,建立一種靈敏的紫蘇籽油中酚類(lèi)成分同時(shí)測(cè)定方法對(duì)紫蘇籽油功能解析與評(píng)價(jià)具有重要意義。

    目前,關(guān)于多酚類(lèi)化合物的檢測(cè)已有很多報(bào)道,陳磊等[14]采用高效液相色譜法檢測(cè)黃酒中多酚類(lèi)成分;呂海濤等[15]以乙酸乙酯為提取劑,建立了蘋(píng)果中酚類(lèi)成分定量分析方法;張?zhí)鸬萚16]采用固相萃取-高效液相色譜測(cè)定煙草樣品中多酚;胡秋芬等[17]采用微柱液相色譜法測(cè)定金銀花中的多酚類(lèi)化合物。由于植物油中多酚類(lèi)物質(zhì)含量底,樣品基質(zhì)復(fù)雜,酚類(lèi)化合物分析需對(duì)樣品進(jìn)行富集和純化[18],因此建立有效的前處理技術(shù)尤為重要。目前多采用液液萃取、固相萃取等技術(shù),存在費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、有機(jī)溶劑量大等缺點(diǎn)[19],多壁碳納米管因其獨(dú)特的物理結(jié)構(gòu),巨大的比表面積而備受關(guān)注[20~22]。作為固相萃取吸附劑,多壁碳納米管具有優(yōu)異的富集性能,并且通過(guò)對(duì)其表面進(jìn)行羧基化修飾和磁性化,使得材料更加穩(wěn)定,不易聚集,能夠均勻分散在基質(zhì)樣品中,實(shí)現(xiàn)酚類(lèi)物質(zhì)的高選擇性純化富集,操作過(guò)程快速簡(jiǎn)單,僅需外加磁場(chǎng)即可分離[23]。

    本研究以磁性羧基化多壁碳納米管材料為基礎(chǔ),建立了植物油中天然酚類(lèi)組分富集-高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析方法,優(yōu)化了如流動(dòng)相、流動(dòng)相中酸的添加量、流速、進(jìn)樣量及碰撞能量等條件,并應(yīng)用于紫蘇籽油中多酚成分的測(cè)定,為全面認(rèn)識(shí)紫蘇籽油中酚類(lèi)組分,開(kāi)展紫蘇籽油的品質(zhì)與營(yíng)養(yǎng)功能評(píng)價(jià)提供了必要基礎(chǔ)。

    2 實(shí)驗(yàn)部分

    2.1 儀器與試劑

    液相色譜質(zhì)譜TSQ三重四級(jí)桿(美國(guó)Thermo公司);HQ-60旋渦混合器(北方同正生物技術(shù)發(fā)展公司);BF-2000型氮?dú)獯蹈蓛x(北京八方世紀(jì)科技有限公司);Milli-Q超純水儀(美國(guó)Millipore公司);KQ-600B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

    紫蘇籽油:從主產(chǎn)區(qū)收集代表性紫蘇籽,采用實(shí)驗(yàn)室物理壓榨方式獲得紫蘇籽油。

    對(duì)羥基乙醇、肉桂酸、3,4-二羥基苯甲酸、對(duì)香豆酸、香草酸、咖啡酸、阿魏酸、丁香酸、芹黃素、木犀草素、槲皮素、甲酸(Sigma公司);甲醇(色譜純,Merck公司);醋酸(優(yōu)級(jí)純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、FeCl3·6H2O(分析純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);石油醚、乙二醇、無(wú)水乙醇(分析純,西隴化工股份有限公司);乙酸鈉(分析純,天津市德恩化學(xué)試劑有限公司);正己烷(HPLC純,安徽時(shí)聯(lián)特種溶劑股份有限公司);羧基化多壁碳納米管(南京先豐納米材料科技有限公司,長(zhǎng)度約30 μm, 直徑<8 nm, COOH含量: 3.86%);實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q 超純水,其它試劑為分析純。

    2.2 HPLC-MS/MS分析條件

    2.2.1 液相色譜條件 Hypersil Gold C18液相色譜柱(100 mm×2.1 mm i.d., 3 μm),柱溫:30℃;流速:0.2 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL;流動(dòng)相: A為0.01%(V/V) 醋酸-甲醇溶液,B為0.01%(V/V)醋酸-水溶液;流動(dòng)相洗脫程序見(jiàn)表1。

    2.2.2 質(zhì)譜條件 質(zhì)譜條件:電噴霧離子源(ESI);多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);負(fù)離子模式掃描;毛細(xì)管電壓:3 kV;毛細(xì)管溫度:270℃;氣簾氣(N2):30 units;輔助氣(N2): 5 units;碰撞氣(Ar): 1.5 mTorr;掃描時(shí)間:0.1 s;酚類(lèi)化合物的質(zhì)譜參數(shù)條件見(jiàn)表2。

    2.3 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

    準(zhǔn)確稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)羥基乙醇、肉桂酸、3,4-二羥基苯甲酸、對(duì)香豆酸、香草酸、咖啡酸、阿魏酸、丁香酸、芹黃素、木犀草素、槲皮素各10.0 mg,分別用甲醇溶解,定容至10.0 mL,即得1.0 mg/mL單一標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液,4℃避光保存。分別移取0.1 mL單一標(biāo)準(zhǔn)品混合,制備10.0 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液,使用時(shí)用甲醇稀釋成不同濃度梯度的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。

    2.4 實(shí)驗(yàn)步驟

    準(zhǔn)確稱(chēng)取0.50 g紫蘇籽油樣于10 mL試管中,加入4.0 mL正己烷,增加樣品流動(dòng)性,使目標(biāo)物更快地由樣品轉(zhuǎn)移到萃取劑中。充分混勻后,加入5.0 mg磁性納米材料,渦旋提取2 min后,在試管外壁加磁鐵,靜置10 s,待液體呈透明狀,將液體倒出。 加入1.0 mL石油醚淋洗雜質(zhì),渦旋15 s,再次在試管外壁加磁鐵,靜置10s,待液體透明,將液體倒出。選擇乙醇為洗脫溶劑,加入3.0 mL 0.02%(V/V)甲酸-乙醇,超聲6 min,過(guò)0.22 μm有機(jī)膜,氮吹濃縮,200 μL初始流動(dòng)相比例定容,進(jìn)樣10 μL進(jìn)行LC-MS/MS檢測(cè)。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 流動(dòng)相的選擇

    在高效液相色譜條件中流動(dòng)相的選擇至關(guān)重要??疾炝思状?水、乙腈-水作為流動(dòng)相的分離效果。結(jié)果表明,11種酚類(lèi)化合物在甲醇-水體系獲得較好分離,通過(guò)調(diào)整梯度洗脫程序,峰形和分離度基本達(dá)到要求。因此,本研究選擇甲醇-水體系為流動(dòng)相。針對(duì)部分目標(biāo)物存在峰拖尾現(xiàn)象,加入少量酸調(diào)節(jié)溶液pH值,可使單個(gè)酚類(lèi)的電離受到抑制,以中性分子的形態(tài)存在,極性減弱,增強(qiáng)在固定相上的保留[11]。

    3.2 酸添加量?jī)?yōu)化

    反相色譜柱填料表面由于存在殘余的羥基,具有一定的酸性,而部分酚類(lèi)化合物具有弱酸性,能夠與殘余硅羥基發(fā)生強(qiáng)的靜電作用力,產(chǎn)生次級(jí)保留效應(yīng),洗脫被推遲,產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象。由于酸性環(huán)境能夠抑制硅羥基的電離,流動(dòng)相中添加少量酸,可改善峰形,為了獲得準(zhǔn)確的定量分析結(jié)果,考察了酸添加量的影響。

    采用醋酸調(diào)節(jié)流動(dòng)相的酸性。對(duì)比了在水相中加入0.5%, 0.2%, 0.1%, 0.05%和0.01%(V/V)醋酸的出峰情況發(fā)現(xiàn),在水相中加入0.01%(V/V)醋酸,效果最好,響應(yīng)值最高; 利用同樣的濃度梯度優(yōu)化了甲醇相中醋酸添加量,結(jié)果發(fā)現(xiàn),同樣在0.01%(V/V)的效果最好。可能的原因是:有機(jī)相和水相中加入相同濃度的醋酸,保證了在梯度洗脫過(guò)程中,兩種流動(dòng)相混合時(shí),保持恒定的醋酸濃度,pH值不發(fā)生變化,同時(shí),這樣可使基線(xiàn)更加平穩(wěn),容易平衡梯度,降低目標(biāo)物在分離過(guò)程中受干擾因素。因此,流動(dòng)相為0.01% (V/V)醋酸-甲醇和0.01%(V/V)醋酸。

    3.3 流速和進(jìn)樣量選擇

    流速和進(jìn)樣量對(duì)提高目標(biāo)化合物的分離效果非常重要。當(dāng)流速為200 μL/min的效果優(yōu)于250 μL/min; 考察了進(jìn)樣量分別為5, 10和20 μL的分離效果。當(dāng)進(jìn)樣量為10 μL,目標(biāo)物出峰情況良好,未出現(xiàn)前沿峰和拖尾峰。因此,本研究的流速選定200 μL/min,進(jìn)樣量為10 μL。

    3.4 質(zhì)譜條件優(yōu)化

    選取負(fù)離子模式監(jiān)測(cè),以\[M-H\]為母離子,選取離子豐度最強(qiáng)的碎片為子離子,通過(guò)優(yōu)化錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù),信號(hào)強(qiáng)度明顯改善。質(zhì)譜條件見(jiàn)表2。采用C18色譜柱,以0.01%醋酸-甲醇和0.01% 醋酸溶液進(jìn)行梯度洗脫(梯度洗脫程序見(jiàn)表1),11種酚類(lèi)化合物在30 min內(nèi)可實(shí)現(xiàn)良好分離,保留時(shí)間見(jiàn)表2,目標(biāo)物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的SRM色譜圖見(jiàn)圖1。

    3.5 方法評(píng)價(jià)

    配制10,50,100,200,500和1000 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,在優(yōu)化的HPLC-MS/MS條件下進(jìn)樣檢測(cè),每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)樣3次,以目標(biāo)物平均峰面積(Y)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(x, ng/mL)進(jìn)行線(xiàn)性回歸。根據(jù)信噪比(S/N)3倍和10倍分別確定目標(biāo)物的檢出限(LOD)和定量限(LOQ),結(jié)果見(jiàn)表3。11種酚類(lèi)化合物都有較寬的線(xiàn)性范圍,在各相應(yīng)的線(xiàn)性范圍內(nèi),線(xiàn)性關(guān)系良好(R2≥0.993);LOD為0.02~0.70 ng/mL,LOQ為0.07~2.00 ng/mL;準(zhǔn)確度和精密度結(jié)果見(jiàn)表4,2個(gè)加標(biāo)水平的回收率為79.61%~121.52%,RSD<15%,可以滿(mǎn)足實(shí)際樣品的測(cè)定需要。

    將本方法與前期報(bào)道中食用油中酚類(lèi)化合物定量分析方法相比,從表5可見(jiàn),本方法分析時(shí)間短,線(xiàn)性范圍寬,檢出限低,能滿(mǎn)足實(shí)際樣品測(cè)定的需要。

    3.6 實(shí)際樣品分析

    采用本方法對(duì)紫蘇籽油實(shí)際樣品進(jìn)行檢測(cè),每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次,檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2,11種酚類(lèi)化合物含量分別為:對(duì)羥基乙醇8.00 ng/g、肉桂酸19.0 ng/g、3,4-二羥基苯甲酸7.32 ng/g、對(duì)香豆酸46.5 ng/g、香草酸68.6 ng/g、咖啡酸32.8 ng/g、阿魏酸55.7 ng/g、丁香酸22.4 ng/g、芹黃素43.3 ng/g、木犀草素7.96 ng/g和槲皮素13.4 ng/g;其中,香草酸、阿魏酸、對(duì)香豆酸、芹黃素、咖啡酸等含量較高,是紫蘇籽油主要的潛在營(yíng)養(yǎng)成分。

    4 結(jié) 論

    通過(guò)對(duì)流動(dòng)相、流動(dòng)相中酸的添加量、流速、進(jìn)樣量及質(zhì)譜條件的優(yōu)化和考察,建立了基于磁固相萃取技術(shù)LC-MS/MS檢測(cè)紫蘇籽油種11種酚類(lèi)化合物的分析方法。本方法前處理操作簡(jiǎn)單,環(huán)境友好,實(shí)現(xiàn)了高靈敏度、高分析速度、低成本的目標(biāo),結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確,為全面認(rèn)識(shí)紫蘇籽油中酚類(lèi)組成,開(kāi)展紫蘇籽油的品質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)功能評(píng)價(jià)提供了必要基礎(chǔ)。

    References

    1 Park M H, Seol N G, Chang P S, Yoon S H, Lee J H. J. Food Sci., 2011, 76: C808-C816

    2 Sadi A M, Toda T, Oku H, Hokama S. Exp. Anim., 1996, 45: 55-62

    3 Kim H K, Choi H. Life Sci., 2005, 77: 1293-1306

    4 Onogi N, Okuno M, Komaki C, Moriwaki H, Kawamori T, Tanaka T, Mori H, Muto Y. Carcinogenesis, 1996, 17: 1291-1296

    5 Deng Y, Xie Q, Zhang S, Yao H, Zhang H. Planta Med., 2007, 73: 53-58

    6 Kim S J, Yoon H N, Rhee J S. J. Am. Oil Chem. Soc., 2000, 77: 451-456

    7 Lee S, Lee Y J, Sung J S, Shin H S. J. Korean Soc. Appl. Biol. Chem., 2015, 3: 325-334

    8 Jung D M, Yoon S H, Jung M Y. J. Food Sci., 2012, 77: 1249-1255

    9 Zheng G, Li S, Lin Z, Yang R, Zhao Y, Liu J, Yang S, Chen A. Phytochem. Anal., 2014, 114: 1007-1015

    10 Zhao G, Qin G W, Wang J, Chu W J, Guo L H. Neurochem. Int., 2010, 56: 168-176

    11 Lee J H, Park K H, Lee M H, Kim H T, Seo W D, Kim J Y, Baek I Y, Jang D S, Ha T J. Food Chem., 2013, 136: 843-852

    12 Zhao G, Yao-Yue C, Qin G W, Guo, L H. Neurobiol. Aging, 2012, 33: 176-186

    13 Yang S Y, Hong C O, Lee G P, Kim C T, Lee K W. Food Chem. Toxicol., 2013, 55: 92-99

    14 CHEN Lei, HUANG Xue-Song. Chinese J. Anal. Chem., 2010, 38(1): 133-137

    陳 磊, 黃雪松. 分析化學(xué), 2010, 38(1): 133-137

    15 L Hai-Tao, SUN Hai-Feng, QU Bao-Han, DAI Hong-Yi. Chinese J. Anal. Chem., 2007, 35(10): 1425-1429

    呂海濤, 孫海峰, 曲寶涵, 戴洪義. 分析化學(xué), 2007, 35(10): 1425-1429

    16 ZHANG Tian, DONG Xue-Chang, WU Fang-Ping, YANG Guang-Yu, QIAO Yong-Feng. Chinese J. Anal. Chem., 2005, 33(3): 359-362

    張 甜, 董學(xué)暢, 吳方評(píng), 楊光宇, 喬永峰. 分析化學(xué), 2005, 33(3): 359-362

    17 HU Qiu-Fen, YANG Guang-Yu, HUANG Zhang-Jie, LI Hai-Tao, YIN Jia-Yuan. Chinese J. Anal. Chem., 2005, 33(1): 69-72

    胡秋芬, 楊光宇, 黃章杰, 李海濤, 尹家元. 分析化學(xué), 2005, 33(1): 69-72

    18 XING Han-Zhu, WANG Xia, CHEN Xiang-Feng, WANG Ming-Lin, ZHAO Ru-Song. Chinese J. Anal. Chem., 2015, 43(3): 409-413

    邢寒竹, 王 霞, 陳相峰, 王明林, 趙汝松. 分析化學(xué), 2015, 43(3): 409-413

    19 Wang W X, Yang T J, Li Z G, Jong T T, Lee M R. Anal. Chim. Acta, 2011, 690: 221-227

    20 Soylak M, Ercan O. J. Hazard.Mater., 2009, 168(2): 1527-1531

    21 Zhao Q, Wei F, Luo Y B, Ding J, Xiao N, Feng Y Q. J. Agr. Food Chem., 2011, 59(24): 12794-12800

    22 KOU Li-Juan, LIANG Rong-Ning. Chinese Journal of Chromatography, 2014, 33(8): 817-821

    寇立娟, 梁榮寧. 色譜, 2014, 33(8): 817-821

    23 Meng L, Fu C, Lu Q. Prog. Nat. Sci., 2009, 19(7): 801-810

    24 LUO Fan, FEI Xue-Qian, FANG Xue-Zhi, WANG Ya-Ping, WANG Jin-Yuan. Journal of Instrumental Analysis, 2011, 30(6): 696-700

    羅 凡, 費(fèi)學(xué)謙, 方學(xué)智, 王亞萍, 王金元. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2011, 30(6): 696-700

    25 Ballus C A, Quirantes-Piné R, Bakhouche A, da Silva L F D O, de Oliveira A F, Coutinho E F, da Croce D M, Segura-Carretero A, Godoy H T. Food Chem., 2015, 170: 366-377

    26 Herchi W, Sawalha S, Arrez-Romn D, Boukhchina S, Segura-Carretero A, Kallel H, Fernndez-Gutierrez A. Food Chem., 2011, 126(1): 332-338

    27 Franco M N, Galeano-Díaz T, López , Fernndez-Bolaos J G, Snchez J, De Miguel C, Gil M V, Martín-Vertedor D. Food Chem., 2014, 163: 289-298

    猜你喜歡
    串聯(lián)質(zhì)譜高效液相色譜
    氘代替代物結(jié)合UPLC—MS/MS同步檢測(cè)去卵巢大鼠血漿中22種內(nèi)源性大麻素
    氘代替代物結(jié)合UPLC—MS/MS同步檢測(cè)去卵巢大鼠血漿中22種內(nèi)源性大麻素
    分析化學(xué)(2017年1期)2017-02-06
    高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定檳榔中9種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留
    高效液相色譜—二極管陣列檢測(cè)器法測(cè)定膠囊殼中20種禁用工業(yè)染料
    高效液相色譜概述及其在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用
    海水中鐵載體的固相萃取預(yù)處理和高效液相色譜
    液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定人工模擬豬消化液中3種霉菌毒素
    久久人人精品亚洲av| 成人特级黄色片久久久久久久| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美成人午夜精品| 成人精品一区二区免费| 精品久久久久久成人av| 后天国语完整版免费观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 新久久久久国产一级毛片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 91大片在线观看| 婷婷丁香在线五月| 91国产中文字幕| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 欧美丝袜亚洲另类 | 午夜免费激情av| 免费看a级黄色片| 亚洲中文字幕日韩| 久久草成人影院| 男女下面插进去视频免费观看| 在线观看一区二区三区激情| 在线观看免费视频日本深夜| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲免费av在线视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 9色porny在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产成人精品久久二区二区91| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲av五月六月丁香网| 一区二区三区国产精品乱码| 91麻豆av在线| 丝袜人妻中文字幕| 嫩草影院精品99| 国产91精品成人一区二区三区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 免费在线观看亚洲国产| 日本精品一区二区三区蜜桃| 超碰97精品在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 搡老岳熟女国产| 热99国产精品久久久久久7| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久九九热精品免费| 黑丝袜美女国产一区| 在线永久观看黄色视频| 欧美日韩黄片免| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 视频区图区小说| 国产精品日韩av在线免费观看 | 国产精品 欧美亚洲| 一区二区三区精品91| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品国产av在线观看| 亚洲精品在线美女| 又黄又粗又硬又大视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 男女下面进入的视频免费午夜 | 性色av乱码一区二区三区2| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 精品第一国产精品| 性欧美人与动物交配| 两人在一起打扑克的视频| 在线观看日韩欧美| 最近最新中文字幕大全免费视频| 91精品三级在线观看| av视频免费观看在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 身体一侧抽搐| 欧美精品亚洲一区二区| 日韩精品中文字幕看吧| 色播在线永久视频| 脱女人内裤的视频| 国产高清videossex| 女警被强在线播放| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲av第一区精品v没综合| 久久天堂一区二区三区四区| 午夜a级毛片| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 三上悠亚av全集在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美人与性动交α欧美软件| 搡老熟女国产l中国老女人| 中文字幕高清在线视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美中文综合在线视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲成国产人片在线观看| 午夜老司机福利片| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久久久国内视频| 欧美在线一区亚洲| 欧美成人性av电影在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 成人免费观看视频高清| 日韩精品免费视频一区二区三区| 成人特级黄色片久久久久久久| 男男h啪啪无遮挡| 色综合婷婷激情| 9191精品国产免费久久| 一级a爱视频在线免费观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 午夜视频精品福利| 丁香欧美五月| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 男人的好看免费观看在线视频 | 久久国产乱子伦精品免费另类| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 动漫黄色视频在线观看| 一区二区三区激情视频| 国产精品免费视频内射| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 69精品国产乱码久久久| 精品福利永久在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲精品一区av在线观看| 悠悠久久av| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 在线观看www视频免费| 欧美成人午夜精品| 热re99久久精品国产66热6| 久久香蕉精品热| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 超碰97精品在线观看| 丝袜在线中文字幕| 国产高清视频在线播放一区| 午夜视频精品福利| 日韩欧美国产一区二区入口| 免费看a级黄色片| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产xxxxx性猛交| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲av美国av| 精品国产美女av久久久久小说| 在线视频色国产色| 一区二区日韩欧美中文字幕| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产一卡二卡三卡精品| 国产欧美日韩一区二区三| 在线观看免费视频网站a站| 久久久国产欧美日韩av| 日韩免费高清中文字幕av| 91九色精品人成在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 中文字幕精品免费在线观看视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 少妇 在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日韩免费av在线播放| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产主播在线观看一区二区| 欧美激情 高清一区二区三区| videosex国产| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产成人av教育| 欧美色视频一区免费| 国产国语露脸激情在线看| 在线观看日韩欧美| 久久久国产成人免费| 久久香蕉激情| 免费在线观看黄色视频的| 黄色片一级片一级黄色片| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 一进一出抽搐动态| 性少妇av在线| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产精品成人在线| 一区在线观看完整版| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲免费av在线视频| 人妻久久中文字幕网| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产av一区在线观看免费| 国产片内射在线| 制服人妻中文乱码| 黄色怎么调成土黄色| 欧美乱码精品一区二区三区| av电影中文网址| 在线观看66精品国产| 丝袜在线中文字幕| 妹子高潮喷水视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 热re99久久精品国产66热6| 欧美激情久久久久久爽电影 | 91av网站免费观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲一码二码三码区别大吗| 视频在线观看一区二区三区| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲黑人精品在线| 精品福利永久在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 成人手机av| 久久久久国内视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 少妇的丰满在线观看| 正在播放国产对白刺激| 免费观看精品视频网站| 午夜福利影视在线免费观看| 在线观看免费视频日本深夜| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲 国产 在线| 日本 av在线| 亚洲成人精品中文字幕电影 | ponron亚洲| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 成人免费观看视频高清| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲五月天丁香| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲一区高清亚洲精品| 成人影院久久| 日韩免费高清中文字幕av| 日韩中文字幕欧美一区二区| 在线视频色国产色| 亚洲男人天堂网一区| 五月开心婷婷网| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 黄色 视频免费看| 久久狼人影院| 一个人免费在线观看的高清视频| 日韩av在线大香蕉| 精品国产一区二区久久| 最新美女视频免费是黄的| 精品高清国产在线一区| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产欧美日韩精品亚洲av| cao死你这个sao货| 国产熟女午夜一区二区三区| 无人区码免费观看不卡| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 999精品在线视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 欧美乱妇无乱码| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 黄色女人牲交| 啪啪无遮挡十八禁网站| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲片人在线观看| 大型av网站在线播放| 精品日产1卡2卡| 老司机在亚洲福利影院| 乱人伦中国视频| 日韩三级视频一区二区三区| 免费人成视频x8x8入口观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 9色porny在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 自线自在国产av| 久久狼人影院| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 中亚洲国语对白在线视频| 制服诱惑二区| 午夜久久久在线观看| 脱女人内裤的视频| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲精品在线观看二区| 日本黄色日本黄色录像| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美丝袜亚洲另类 | x7x7x7水蜜桃| svipshipincom国产片| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 黄色 视频免费看| 亚洲成人国产一区在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 成人黄色视频免费在线看| 日韩欧美在线二视频| 一本综合久久免费| 精品电影一区二区在线| 丰满的人妻完整版| 日韩欧美免费精品| 精品熟女少妇八av免费久了| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲精品成人av观看孕妇| 日本欧美视频一区| 欧美午夜高清在线| 91av网站免费观看| 国产成人av教育| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 久久人人97超碰香蕉20202| 深夜精品福利| 亚洲av熟女| 日本vs欧美在线观看视频| 搡老乐熟女国产| 日韩精品中文字幕看吧| 久久人人97超碰香蕉20202| 99在线人妻在线中文字幕| www日本在线高清视频| 久久久国产欧美日韩av| 满18在线观看网站| 亚洲人成电影免费在线| 成人三级做爰电影| 久久 成人 亚洲| 亚洲成人免费电影在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 啦啦啦 在线观看视频| 高清毛片免费观看视频网站 | 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲精品国产色婷婷电影| 又黄又爽又免费观看的视频| 91字幕亚洲| 高清黄色对白视频在线免费看| av天堂久久9| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久精品人人爽人人爽视色| 99久久精品国产亚洲精品| 黄色毛片三级朝国网站| 不卡一级毛片| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 校园春色视频在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费 | 国产av在哪里看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 制服诱惑二区| 日本三级黄在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久热这里只有精品99| 亚洲熟妇熟女久久| 国产欧美日韩精品亚洲av| 十八禁人妻一区二区| 黑人猛操日本美女一级片| 午夜福利影视在线免费观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 在线观看一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 精品欧美一区二区三区在线| 黄色怎么调成土黄色| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 男女下面进入的视频免费午夜 | 国产精品影院久久| 99国产精品免费福利视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 久久久国产一区二区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 韩国精品一区二区三区| 90打野战视频偷拍视频| 99热国产这里只有精品6| 9色porny在线观看| 久久国产精品影院| 国产欧美日韩一区二区三| 18美女黄网站色大片免费观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲精品一区av在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲人成伊人成综合网2020| 高潮久久久久久久久久久不卡| 老汉色∧v一级毛片| 91av网站免费观看| svipshipincom国产片| 三上悠亚av全集在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲美女黄片视频| 超色免费av| 国产亚洲精品一区二区www| 一进一出好大好爽视频| 女警被强在线播放| 国产乱人伦免费视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品久久蜜臀av无| 精品国产亚洲在线| 男女之事视频高清在线观看| xxx96com| 日韩成人在线观看一区二区三区| 又大又爽又粗| 亚洲午夜理论影院| av在线播放免费不卡| 成人黄色视频免费在线看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 他把我摸到了高潮在线观看| 黄片大片在线免费观看| 国产精品成人在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 丝袜美足系列| 精品人妻1区二区| 日本免费a在线| 成人国语在线视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| www.自偷自拍.com| 久久精品人人爽人人爽视色| 美女 人体艺术 gogo| 午夜91福利影院| 午夜影院日韩av| 51午夜福利影视在线观看| 多毛熟女@视频| 午夜激情av网站| 久久亚洲精品不卡| 中国美女看黄片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 日本黄色视频三级网站网址| 一进一出好大好爽视频| 欧美日韩视频精品一区| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲色图av天堂| 国产精品国产av在线观看| а√天堂www在线а√下载| 人妻久久中文字幕网| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 1024香蕉在线观看| 国产精品久久视频播放| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲一区二区三区不卡视频| 无遮挡黄片免费观看| 久久中文字幕一级| 国产色视频综合| 窝窝影院91人妻| 999精品在线视频| 国产成年人精品一区二区 | 曰老女人黄片| 欧美丝袜亚洲另类 | 黄色女人牲交| 欧美在线一区亚洲| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲国产精品999在线| 欧美在线一区亚洲| 两个人看的免费小视频| 日本黄色视频三级网站网址| 一二三四社区在线视频社区8| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 精品高清国产在线一区| 村上凉子中文字幕在线| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美成狂野欧美在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 午夜影院日韩av| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产激情欧美一区二区| 中文字幕高清在线视频| 91字幕亚洲| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | svipshipincom国产片| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 91麻豆精品激情在线观看国产 | bbb黄色大片| 91九色精品人成在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 精品国产美女av久久久久小说| avwww免费| 亚洲av五月六月丁香网| 麻豆一二三区av精品| 很黄的视频免费| 99re在线观看精品视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 精品一品国产午夜福利视频| 午夜免费激情av| 中文字幕av电影在线播放| 久久人人精品亚洲av| 中亚洲国语对白在线视频| 脱女人内裤的视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 麻豆av在线久日| 日韩大尺度精品在线看网址 | av天堂久久9| 亚洲欧美激情在线| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 精品久久久久久成人av| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 欧美日韩视频精品一区| 美女福利国产在线| 午夜a级毛片| 一级,二级,三级黄色视频| 免费观看精品视频网站| 国产成人系列免费观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 超碰成人久久| 十八禁网站免费在线| 少妇的丰满在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久人妻熟女aⅴ| 久久午夜综合久久蜜桃| 999久久久国产精品视频| 久久人妻熟女aⅴ| 久久影院123| 波多野结衣av一区二区av| 国产精华一区二区三区| 精品久久久精品久久久| 亚洲激情在线av| 久久这里只有精品19| 少妇 在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 国产片内射在线| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲情色 制服丝袜| 免费少妇av软件| 一级作爱视频免费观看| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久精品影院6| 精品一区二区三区四区五区乱码| 色播在线永久视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 精品久久久久久电影网| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 成人免费观看视频高清| 国产精品永久免费网站| 精品人妻1区二区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 在线观看一区二区三区激情| 久久香蕉激情| 国产精品综合久久久久久久免费 | av在线播放免费不卡| 无人区码免费观看不卡| 国产精品综合久久久久久久免费 | 日韩欧美免费精品| 欧美乱色亚洲激情| 国产有黄有色有爽视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 99国产综合亚洲精品| 国产成+人综合+亚洲专区| 天堂中文最新版在线下载| 无限看片的www在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 美女福利国产在线| 国产成人精品在线电影| 91在线观看av| 国产av精品麻豆| 国产亚洲精品一区二区www| 国产av精品麻豆| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 啪啪无遮挡十八禁网站| 欧美日韩av久久| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 成人手机av| 身体一侧抽搐| 午夜老司机福利片| 91成人精品电影| 性欧美人与动物交配| 亚洲第一av免费看| 日韩欧美在线二视频| 久久精品国产清高在天天线| 最近最新中文字幕大全电影3 | 成人三级做爰电影| 国产真人三级小视频在线观看| 老司机福利观看| 另类亚洲欧美激情| 最新美女视频免费是黄的| 日本精品一区二区三区蜜桃| 一级毛片精品| 视频区欧美日本亚洲| 韩国av一区二区三区四区| 久久中文字幕人妻熟女| 老司机亚洲免费影院| cao死你这个sao货| 国产精品一区二区精品视频观看| 中国美女看黄片| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲七黄色美女视频| 91在线观看av| cao死你这个sao货| 超碰97精品在线观看| 人人妻人人澡人人看| 久久人人精品亚洲av| 亚洲avbb在线观看| 国产一卡二卡三卡精品| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲av电影在线进入| 亚洲专区字幕在线| av超薄肉色丝袜交足视频| 妹子高潮喷水视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 在线观看午夜福利视频| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久久久亚洲av毛片大全| 大码成人一级视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 最近最新中文字幕大全电影3 | 久久久国产一区二区| 亚洲自拍偷在线| 黄色丝袜av网址大全| 啦啦啦 在线观看视频| netflix在线观看网站| 亚洲黑人精品在线| 在线观看www视频免费| 人人妻人人澡人人看| 国产精品久久久av美女十八| 在线播放国产精品三级| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产熟女xx| 夜夜爽天天搞|