根除幽門螺桿菌對腸化生和上皮內(nèi)瘤變VEGF表達的影響

王　銳　高會斌　于永強　楊婕琳　李　多

根除幽門螺桿菌對腸化生和上皮內(nèi)瘤變VEGF表達的影響

王銳高會斌于永強楊婕琳李多

目的 探討幽門螺桿菌（Hp）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）與腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變的相互關系，進一步了解Hp根除治療對腸上皮化生和上皮內(nèi)瘤變VEGF表達的影響。方法 選取門診及胃鏡室患者根據(jù)病理結果分為腸上皮化生和上皮內(nèi)瘤變二組，分別測定Hp及VEGF的表達，分析比較Hp及根除治療對胃黏膜腸上皮化生和上皮內(nèi)瘤變中VEGF表達的影響。結果 在腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變中VEGF的表達Hp陽性組均較陰性組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。腸上皮化生組根除前后VEGF表達陽性率分別為76.5%（26/34）、66.7%（20/30），在上皮內(nèi)瘤變組根除前后VEGF表達陽性率分別為80%（36/45）、73.8%（31/42），可見VEGF的表達均較治療前下降，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論 Hp對VEGF表達有上調(diào)作用，根除治療后VEGF表達不能降至正常。

血管內(nèi)皮生長因子 幽門螺桿菌 根除 腸上皮化生 上皮內(nèi)瘤變

血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor ，VEGF）是血管生成的重要因子，可促進細胞增殖分裂、刺激新生血管形成，其表達水平與胃癌的生物學行為密切相關［1］。胃黏膜腸上皮化生和上皮內(nèi)瘤變是慢性胃炎至胃癌演變過程中的關鍵步驟，幽門螺桿菌（Hp）感染是兩者的重要致病因素。因此了解其機制及制定預防措施對預防并減少胃癌的發(fā)生有重要意義。目前Hp對影響腸上皮化生和上皮內(nèi)瘤變VEGF表達的機制尚不清楚，同時研究多集中在Hp感染對VEGF表達的影響上，而根除Hp對VEGF表達的變化尚未見報道。本資料旨在通過檢測Hp和VEGF，探討Hp及根除治療對胃黏膜腸上皮化生和上皮內(nèi)瘤變中VEGF表達的影響。

1　臨床資料

1.1一般資料 選取2012年12月至2013年12月本院消化科門診胃鏡室就診患者120例。其中男68例，女52例；年齡35～72歲，平均年齡58.9歲。根據(jù)胃鏡及病理結果分為腸上皮化生組和上皮內(nèi)瘤變組，對個體情況進行詢問。其中腸上皮化生組60例，Hp陽性34例，陽性率56%；上皮內(nèi)瘤變組 60例，Hp陽性45例，陽性率75%。排除標準：（1）有嚴重心腦血管、肝、腎疾病，腫瘤，血液系統(tǒng)疾病，胃部手術病史等基礎疾病患者。（2）對任何一種藥物過敏者。（3）1周內(nèi)接受過抗生素、鉍劑或抑酸藥物。（4）既往接受過Hp根除治療者。（5）1周內(nèi)有上消化道急性出血。（6）隨訪過程中退出者。

1.2方法 （1）胃黏膜活檢標本置于10%甲醛溶液中固定，常規(guī)石蠟包埋切片，閱片由專業(yè)病理科醫(yī)師進行判斷。采用免疫組化進行VEGF檢測（鼠抗人VEGF單克隆抗體，北京中杉金橋生物有限公司）。（2）Hp檢測［2］：檢查前1周停用影響Hp活性的藥物。檢測前空腹，采用13C呼氣試驗檢測Hp。（3）Hp根除方法［2］：采用四聯(lián)方案：標準劑量奧美拉唑20mg，2次/d+枸櫞酸鉍鉀膠囊600mg，2次/d（餐前0.5h服）+阿莫西林1000 mg，2次/d+克拉霉索500mg/次，2種抗菌藥物（餐后服）。14d治療結束后避免服用抗生素和抑酸藥，并記錄其他伴隨治療藥物服用情況。于治療結束停藥4周后進行復查14C尿素呼氣試驗和胃鏡，Hp陰性表示根除成功。

1.3結果判斷 （1）VEGF陽性判定 VEGF主要位于細胞漿，免疫組化陽性反應為黃-棕褐色顆粒。陽性細胞數(shù)計算方法：每張切片隨機觀察5個高倍視野，每個視野計100個細胞中的陽性細胞數(shù)，取均值，以百分數(shù)表示細胞陽性指數(shù)。染色強度：無染色為0 分；淺黃色為1 分；黃色為2 分；棕黃或棕褐色為3 分。陽性細胞百分率：無陽性細胞為0 分；陽性細胞數(shù)＜25%為1分；25%～50%為2 分；50%～75%為3 分；＞75%為4分。2 項相加：0 分為（-）；1～2分為（+），3～4分為（++），5～7分為（+++），均為陽性。（2）13C呼氣試驗結果陽性者判斷為Hp現(xiàn)癥感染。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1腸上皮化生和上皮內(nèi)瘤變中Hp檢查和VEGF表達情況 在腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變中VEGF的表達Hp陽性組均較陰性組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1　Hp對腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變中VEGF表達的影響（n）

2.2在腸上皮化生和上皮內(nèi)瘤變中根除Hp前后VEGF表達情況 共有79例Hp陽性患者接受根除治療，成功根除72例、失敗7例，根除率91.1%。其中腸上皮化生4例，上皮內(nèi)瘤變組3例。分別對兩組根除前后VEGF表達情況比較分析，結果提示腸上皮化生組根除前VEGF表達陽性率76.5%（26/34），根除后VEGF表達陽性率66.7%（20/30）。在上皮內(nèi)瘤變組根除前VEGF表達陽性率80%（36/45），根除后VEGF表達陽性率73.8%（31/42），可見根除前后兩組VEGF表達均較治療前下降，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2　根除Hp對腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變中VEGF表達的影響（n）

3　討論

胃黏膜腸上皮化生和上皮內(nèi)瘤變作為慢性胃炎至胃癌演變過程中的關鍵環(huán)節(jié)，始終被國內(nèi)外學者所關注。在分子遺傳學水平以及臨床均做了較多工作，，其中VEGF是研究熱點之一。李慧臻等［3］發(fā)現(xiàn)VEGF在胃癌前病變中呈過度表達，VEGF的表達隨胃黏膜腺體萎縮及腸上皮化生的加重逐漸增強，認為VEGF參與了胃癌前病變的發(fā)生及發(fā)展過程。賀慶娟等［4］發(fā)現(xiàn)VEGF在高級別上皮內(nèi)瘤變呈一定水平的表達，隨著胃黏膜病變程度的加重，COX-2的表達逐漸增強，且COX-2與VEGF的表達成正相關，推測在胃癌的形成過程中，COX-2可能促進了VEGF的表達。Hp是人類胃癌的Ⅰ類（即肯定的）致癌原。既往研究顯示Hp感染與胃黏膜炎癥、腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變發(fā)生、發(fā)展密切相關?？梢陨险{(diào)多種致癌因子的表達。本資料結果顯示，在腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變中VEGF的表達Hp陽性組均較陰性組升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示Hp感染可使胃組織中VEGF表達升高。與聞淑軍等［5］報道相一致。體外研究亦表明［6］，Hp可上調(diào)人胃癌MKN45細胞COX-2的表達，進而導致VEGF的表達增高。但Taghizadeh S等［7］發(fā)現(xiàn)，在胃潰瘍及胃癌中雖Hp陽性組比陰性組VEGF的表達增高，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。Hp感染引起病變組織VEGF高表達機制尚不完全清楚，目前認為可能有以下幾種途徑：（1）Hp在胃上皮細胞通過低氧誘導因子1α（HIF-1α）依賴性途徑誘導的VEGF的產(chǎn)生［8］。（2）可能長期持續(xù)Hp感染的刺激，可導致?lián)p害黏膜侵襲因素與黏膜自身的防御因素之間失去平衡，吸引中性粒細胞、淋巴細胞、單核巨噬細胞等到達，炎癥細胞浸潤，釋放IL-1、IL-8［9］等細胞因子，啟動炎癥反應及細胞轉(zhuǎn)化的過程，通過促進細胞增殖，抑制細胞凋亡，加速血管生成等其他機制，參與促進各種腫瘤的形成過程。（3）Hp誘導VEGF的表達是通過對p38蛋白介導的COX-2及PGE2途徑［10］。VEGF表達還可能受其他因素調(diào)節(jié)［11］，如：高酸和（或）葡萄糖缺乏的微環(huán)境；激素包括黃體酮、孕激素、促甲狀腺素釋放激素等激素均可使VEGF的表達增強；癌基因和抑癌基因有調(diào)控其表達的作用，活化了的ras、src、erB2/neu/HER22等癌基因也能上調(diào)VEGF，增強體內(nèi)血管生成；甚至某些腫瘤細胞可以直接激活VEGF基因啟動，促進VEGF的合成。由此可見，誘導VEGF分泌的因素可能是多方面的，Hp可能為誘導表達的因素之一。

既往多項研究均發(fā)現(xiàn)根除Hp后常可減緩腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變等胃黏膜病變的發(fā)展［12，13］，有利于預防胃癌的發(fā)生，根除Hp后是否可逆轉(zhuǎn)胃黏膜萎縮及腸上皮化生方面一直存在爭議。本資料根除Hp后VEGF蛋白表達情況結果提示：在根除Hp后VEGF的表達陽性率在腸上皮化生、上皮內(nèi)瘤變中雖均有下降，但兩者差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）?？紤]Hp感染所引起的局部炎癥反應以及胃黏膜上皮微環(huán)境的改變在分子水平上啟動了某些因子，參與了腸上皮化生的形成和維持，導致不可逆的過程。作者認為下列因素可能影響結果：（1）未對Hp的菌株和毒力等因素進行分類。（2）由于胃黏膜從腸上皮化生到癌變是一個漫長的過程。而Hp誘導VEGF上調(diào)也需較長時間。是否在根除Hp后一段時間VEGF的表達能夠繼續(xù)下降還要進一步研究。（3）當樣本量較大時，結果尚不能確定。尋找拮抗Hp上調(diào)VEGF的因子，明確其對腸上皮化生和上皮內(nèi)瘤變的作用，可能為逆轉(zhuǎn)腸上皮化生的治療提供新的思路，是今后的研究方向。因此，進一步研究Hp對腸上皮化生及上皮內(nèi)瘤變的細胞分子調(diào)控機制，可能助于闡述胃黏膜病變的逆轉(zhuǎn)問題。

1 張征，毛伯能，錢佶.胃癌組織血管內(nèi)皮生長因子家族與胃癌轉(zhuǎn)移的關系.中華消化雜志，2012，32（12）：866～867.

2 第四次全國幽門螺桿菌感染處理共識報告.中華醫(yī)學會消化病學分會幽門螺桿菌學組/全國幽門螺桿菌研究協(xié)作組.中華消化雜志，2012，32（10）：655～661.

3 李慧臻，劉琳.VEGF與胃癌前病變程度相關性的研究.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2014，33（4）：102～103.

4 賀慶娟，張博，趙亞楠.不同級別胃黏膜上皮內(nèi)瘤變組織COX-2和VEGF同步表達的差異性及臨床意義.中外健康文摘，2014，7（1）：22.

5 聞淑軍，張志廣，李熳，等.Hp感染與胃癌組織中MVD及VEGF表達的相關性研究.天津醫(yī)藥，2008，36（2）：99～102.

6 Wu CY， Wang CJ， Tseng CC， et al. Helicobacter pylori promote gastric cancer cells invasion through an NF-kappa B and COX-2-mediated pathway.World J Gastroenterol，2005，11（21）： 3197～3203.

7 Taghizadeh S，Sankian M，Ajami A，et al.Expression levels of vascular endothelial growth factors a and C in patients with peptic ulcers and gastric cancer. J Gastric Cancer，2014，14（3）：196～203.

8 Kang MJ，Song EJ，Kim BY， et al.Helicobacter pylori Induces Vascular Endothelial Growth Factor Production in Gastric Epithelial Cells Through Hypoxia-Inducible Factor-1α-Dependent Pathway. Helicobacter，2014，19（6）： 476～483.

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10 Liu N，Wu Q，Wang Y，et al.Helicobacter pylori promotes VEGF expression via the p38 MAPKmediated COX2PGE2 pathway in MKN45 cells.Mol Med Rep，2014，10（4）：2123～2139.

11 趙麗微，楊淑艷，方青. VEGF表達的調(diào)節(jié)及與腫瘤的相關研究.吉林醫(yī)藥學院學報，2007，28（3）：167～169.

12 Wang J，Xu L，Shi R，et al.Gastric atrophy and intestinal metaplasia before and after Helicobacter pylori eradication：ameta-analysis. Digestion，2011，83（4）：253～260.

13 Kodama M，Murakami K，Okimoto T，et al.Ten-year prospective follow-up of histological changes at five points on the gastric mucosa as recommended by the updated Sydney system after Helicobacter pylori eradication.J Gastroenterol，2012，47（4）：394～403.

Objective To investigate the relationships Helicobacter pylori，VEGF，intestinal metaplasia，and intraepithelial neoplasia，to further understand the mechanisms of H. pylori pathogenic mechanisms in intestinal metaplasia and intraepithelial neoplasia. Methods Patients from outpatient and endoscopy room were divided into intestinal metaplasia and intraepithelial neoplasia groups based on pathological fi ndings. Helicobacter pylori and VEGF expression were measured respectively.and the change was analysised and compared VEGF expression after Hp eradication for gastric intestinal metaplasia and intraepithelial neoplasia. Results The VEGF expression of H. pylori-positive tissues was higher than H. pylori-negative ones in intestinal metaplasia and neoplastic epithelial groups，the difference was statistically signifi cant（P＜0.05）. The expression of VEGF compared before and after the eradication was 76.5 %，66.7% in intestinal metaplasia group and 80%，73.8%.In intraepithelial neoplasia.The VEGF expression decreased after Helicobacter pylori eradication treatment，but the difference was not statistically significant（P＞0.05）.Conclusion Helicobacter pylori upregulated of VEGF expression，however VEGF expression after eradication therapy is not returned to normal.

VEGF Helicobacter pylori Eradication Intestinal metaplasia Intraepithelial neoplasia

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