響應面法優(yōu)化苦蕎干黃酒主發(fā)酵工藝

萬萍，張宇，楊蘭，楊文波，趙鋼

（成都大學生物產(chǎn)業(yè)學院，四川成都610106）

響應面法優(yōu)化苦蕎干黃酒主發(fā)酵工藝

萬萍，張宇，楊蘭，楊文波，趙鋼*

（成都大學生物產(chǎn)業(yè)學院，四川成都610106）

以1∶1的苦蕎米和糯米為原料，通過單因素試驗研究了主發(fā)酵過程中發(fā)酵時間、酒藥質(zhì)量分數(shù)、麥曲質(zhì)量分數(shù)、沖缸加水比、發(fā)酵溫度對苦蕎干黃酒主發(fā)酵的影響，并以主發(fā)酵乙醇體積分數(shù)為響應值，采用響應面法對苦蕎干黃酒的主發(fā)酵工藝進行了優(yōu)化。結(jié)果表明，酒藥質(zhì)量分數(shù)0.6%，麥曲質(zhì)量分數(shù)3.74%，沖缸加水比為1.2mL/g，發(fā)酵溫度29.0℃，主發(fā)酵時間8 d，在該條件下的乙醇體積分數(shù)最高為17.0%（20℃），所得到的產(chǎn)品色香味俱佳，并具有苦蕎干黃酒獨特的風格。

苦蕎米；糯米；干黃酒；主發(fā)酵；響應面法

中國栽培苦蕎的歷史已有2 000多年，苦蕎麥的種植面積和產(chǎn)量均居世界第一［1］。苦蕎麥分布廣泛，主要集中在云南、貴州、四川、湖南、湖北、江西等省，尤其是云貴川比鄰的高山丘陵地帶［1］。它營養(yǎng)價值極高，富含氨基酸、蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、無機鹽與微量元素、食物纖維等，還含有獨特的生物活性成分——黃酮類化合物［2］。相關(guān)研究證明，黃酮類化合物具有明顯降低血糖、血脂的作用［3］。

黃酒是我國獨有的最古老的酒種，其酒體溫和、鮮美可口、營養(yǎng)豐富，有著悠久的酒文化內(nèi)涵和食療文化的歷史，醫(yī)學上常以其作為“藥引子”，故素有“百藥之長”之美稱［5］。在祖國醫(yī)林中，光彩奪目，獨具一格。從古至今糯米作為黃酒生產(chǎn)最好的原料，在我國黃酒生產(chǎn)史上發(fā)揮了重要的作用。黃酒的品質(zhì)和風味與釀造用米的品種、食感有很大關(guān)系。食感越好（如糯米），釀造成酒的風味也越好［6］。

目前以苦蕎為原料的發(fā)酵酒類產(chǎn)品有很多，如苦蕎糯米甜酒、苦蕎紅曲保健酒、苦蕎糯米保健酒［4，7-8］等，深受廣大消費者的歡迎。作者以苦蕎米和優(yōu)質(zhì)糯米為主要原料，采用傳統(tǒng)發(fā)酵工藝釀制一種新型的苦蕎干黃酒，旨在充分利用糯米、苦蕎米和麥曲中所含的多種氨基酸、有機酸、多糖等成分的同時，將苦蕎米中具有保健功能的有效因子蘆丁、槲皮素、D-手性肌醇等溶進酒中，可使其食療效果發(fā)揮得更好［5］。而且，由于干酒的含糖量少，可以滿足特殊人群的需求。采用響應面法對苦蕎干黃酒主發(fā)酵工藝進行優(yōu)化，為生產(chǎn)具有特殊營養(yǎng)和風味的苦蕎干黃酒提供參考，并為苦蕎發(fā)酵酒新產(chǎn)品的開發(fā)提供科學依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

1.1.1材料糯米：市售；苦蕎米：米蕎一號，四川強勁奧林食品飲料有限公司；麥曲：市售；黃酒酒藥：市售；蘆丁標準品：成都普菲德生物技術(shù)有限公司。

1.1.2主要儀器LD型電子天平：沈陽龍騰電子有限公司；BS110S型分析天平：北京賽多利斯天平有限公司；DHG-9141型電熱恒溫干燥箱：上海宏精實驗設(shè)備有限公司；GNP-9270型電熱恒溫培養(yǎng)箱：上海齊欣科技有限公司；WFJ7200型分光光度計：尤尼柯上海儀器有限公司；JB-2型磁力恒溫攪拌器：上海雷磁儀器廠新涇分廠；PHS-3C型酸度計：四川新科儀器有限公司。

1.2試驗方法

1.2.1苦蕎干黃酒發(fā)酵工藝流程

1.2.2操作要點苦蕎米和糯米按1∶1混合，每組稱取400 g，常溫浸米，以水面超過米面6～10 cm為宜，浸泡24 h。浸米的程度以米粒完整而用手指掐米粒成粉狀、無粒心為好。浸漬后的米用清水沖凈漿水、瀝干后用蒸鍋蒸20 min，上汽3 min和15 min時分別灑一次水，再燜5min。對蒸飯的要求是熟而不糊，內(nèi)無白心。將蒸熟的飯攤冷并放入2 L廣口瓶中（先用沸水滅菌），加水使每只瓶內(nèi)的飯重達到800 g（即出飯率200%），待飯冷卻至35～40℃時加入酒藥，攪拌均勻，中間搭成倒置的喇叭狀凹圓窩，蓋上紗布，置于恒溫培養(yǎng)箱進行主發(fā)酵。2 d后添加麥曲和水進行沖缸，此后8～12 h開頭耙，再過4～6 h開二耙，過3～4 h開三耙，以后每3天開耙1次。主發(fā)酵結(jié)束后，將其密封并置于室溫進行后發(fā)酵，時間約3個月。過濾得到產(chǎn)品。

1.2.3理化指標檢測方法總糖質(zhì)量濃度的測定：亞鐵氰化鉀滴定法［10］；總酸質(zhì)量濃度的測定：電位滴定法［10］；乙醇體積分數(shù)的測定：密度瓶法［11］；氨基酸態(tài)氮的測定：電位滴定法［10］；非糖固形物的測定：干燥法［10］；黃酮質(zhì)量濃度的測定：GB/T 20574-2006。

1.2.4試驗設(shè)計首先選取影響苦蕎干黃酒發(fā)酵的主要因素：發(fā)酵時間、酒藥質(zhì)量分數(shù)、麥曲質(zhì)量分數(shù)、沖缸加水比和發(fā)酵溫度等進行單因素試驗，測定其在主發(fā)酵過程中的總糖、總酸和乙醇體積分數(shù)，以判斷發(fā)酵是否正常，并以乙醇體積分數(shù)為主要指標來確定最適的單因素條件。在單因素試驗的基礎(chǔ)上，以乙醇體積分數(shù)為響應值，采用響應面法對苦蕎干黃酒的主發(fā)酵工藝條件進行優(yōu)化。每組做兩個平行樣，結(jié)果取兩個樣的平均值。

2　結(jié)果與分析

2.1單因素試驗

2.1.1發(fā)酵時間對主發(fā)酵的影響選定酒藥質(zhì)量分數(shù)為0.6%，麥曲質(zhì)量分數(shù)為4%，沖缸加水比為1.2 mL/g，發(fā)酵溫度為30℃，分別在發(fā)酵第4、6、8、10、12天時測定酒醅的總糖、總酸和乙醇體積分數(shù)，以確定最適宜的主發(fā)酵時間，結(jié)果見圖1。

圖1　發(fā)酵時間對主發(fā)酵的影響Fig.1　E ffect of fermentation tim e on m ain fermentation

由圖1可知，隨著發(fā)酵時間的增加，酒醅的乙醇體積分數(shù)逐漸增加，在8 d時乙醇體積分數(shù)達到最高，為16.6%。隨著時間繼續(xù)增加，乙醇體積分數(shù)卻有所下降，說明超過8 d以后乙醇有所揮發(fā)，或是轉(zhuǎn)化生成了其他的物質(zhì)，如酯類等。因此確定其最適主發(fā)酵時間為8 d。

2.1.2酒藥質(zhì)量分數(shù)對主發(fā)酵的影響酒藥作為黃酒生產(chǎn)的糖化發(fā)酵劑，具有糖化發(fā)酵力強而用量少的優(yōu)點［12］。酒藥質(zhì)量分數(shù)太少，則微生物數(shù)量較少，發(fā)酵不充分，乙醇體積分數(shù)偏低；酒藥質(zhì)量分數(shù)過多，又會導致微生物數(shù)量太多，在有限的空間內(nèi)會相互抑制，也會對最終的乙醇體積分數(shù)產(chǎn)生影響。

選定麥曲質(zhì)量分數(shù)為4%，沖缸加水比為1.2 mL/g，發(fā)酵溫度為30℃，酒藥質(zhì)量分數(shù)分別為0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%，在發(fā)酵第8天時測定酒醅的總糖、總酸和乙醇體積分數(shù)，以確定最適宜的酒藥質(zhì)量分數(shù)，結(jié)果見圖2。

圖2　酒藥質(zhì)量分數(shù)對主發(fā)酵的影響Fig.2　E ffect of the mass fraction of jiuyao on m ain fermentation

如圖2所示，在其它條件相同的情況下，酒藥質(zhì)量分數(shù)不同，乙醇體積分數(shù)也不同。酒藥質(zhì)量分數(shù)從0.4%增加到0.8%，乙醇體積分數(shù)呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢，在酒藥質(zhì)量分數(shù)0.6%時，乙醇體積分數(shù)達最大值16.6%，因此確定最適酒藥質(zhì)量分數(shù)為0.6%。

2.1.3麥曲質(zhì)量分數(shù)對主發(fā)酵的影響麥曲為黃酒釀造提供各種酶類，主要是淀粉酶和蛋白酶，促使各種原料中所含淀粉、蛋白質(zhì)等高分子物質(zhì)的水解。同時在制曲過程中形成的各種代謝產(chǎn)物，以及由這些代謝產(chǎn)物相互作用產(chǎn)生的色澤香味等，賦予黃酒酒體獨特的風格［12］。麥曲質(zhì)量分數(shù)過低，酶量不足，原料利用率低，發(fā)酵不充分；麥曲質(zhì)量分數(shù)過高，超過了酶促反應所需的最佳量，也會影響發(fā)酵的進行，導致最終的乙醇體積分數(shù)偏低。

選定酒藥質(zhì)量分數(shù)為0.6%，沖缸加水比為1.2 mL/g，發(fā)酵溫度為30℃，麥曲質(zhì)量分數(shù)分別為3%、4%、5%、6%、7%，在發(fā)酵第8天時測定酒醅的總糖、總酸和乙醇體積分數(shù)，以確定最適宜的麥曲質(zhì)量分數(shù)，結(jié)果見圖3。

圖3　麥曲質(zhì)量分數(shù)對主發(fā)酵的影響Fig.3　E ffect of the mass fraction of the w heat star ter on main fermentation

如圖3所示，隨著麥曲質(zhì)量分數(shù)的增加，乙醇體積分數(shù)呈先上升再下降的趨勢，在麥曲質(zhì)量分數(shù)為4%時，乙醇體積分數(shù)達到最大值16.6%，因此確定最適麥曲質(zhì)量分數(shù)為4%。

2.1.4沖缸加水比對主發(fā)酵的影響水在黃酒成品中占80%以上，它是物料和酶的溶劑，生化酶促反應都須在水中進行，水中的金屬元素和離子是微生物必需的養(yǎng)分和刺激物，并對調(diào)節(jié)酒的pH及維持膠體穩(wěn)定性起著重要作用［12］。沖缸加水比適宜，則整個發(fā)酵系統(tǒng)有了適當?shù)娜軇磻苎杆?；當加水比增大，水量增加，溶液被稀釋，各種微生物與酶與原料的接觸面積減小，導致乙醇體積分數(shù)下降。

選定酒藥質(zhì)量分數(shù)為0.6%，麥曲質(zhì)量分數(shù)為4%，發(fā)酵溫度為30℃，分別設(shè)定沖缸加水比為1.1、1.2、1.3mL/g，在發(fā)酵第8天時測定酒醅的總糖、總酸和乙醇體積分數(shù)，以確定最適宜的沖缸加水比，結(jié)果見圖4。

圖4　沖缸加水比對主發(fā)酵的影響Fig.4　Effect of add water than raw materials on main fermentation

如圖4所示，沖缸加水比對乙醇體積分數(shù)有一定的影響。沖缸加水比從1.1mL/g上升到1.2mL/g時，乙醇體積分數(shù)呈上升趨勢；當沖缸加水比從1.2 mL/g繼續(xù)上升到1.3mL/g時，乙醇體積分數(shù)呈下降趨勢。沖缸加水比1.2 mL/g時，乙醇體積分數(shù)達到最大值16.6%，因此確定最適沖缸加水比為1.2mL/g。2.1.5發(fā)酵溫度對主發(fā)酵的影響發(fā)酵溫度對酒的釀造至關(guān)重要，溫度過低或過高都會影響微生物的生長及酶的活性。溫度過低，酶的活性受到影響，導致乙醇體積分數(shù)偏低；溫度過高，發(fā)酵速度過快，同時生酸也快，不僅影響乙醇的生成而且還會影響酒的品質(zhì)。

選定酒藥質(zhì)量分數(shù)為0.6%，麥曲質(zhì)量分數(shù)為4%，沖缸加水比為1.2mL/g，分別設(shè)定發(fā)酵溫度為27、30、33℃，在發(fā)酵第8天時測定酒醅的總糖、總酸和乙醇體積分數(shù)，以確定最適宜的發(fā)酵溫度，結(jié)果見圖5。

如圖5所示，發(fā)酵溫度上升，相應的乙醇體積分數(shù)也上升，但當發(fā)酵溫度超過30℃后，乙醇體積分數(shù)開始下降。發(fā)酵溫度30℃時，乙醇體積分數(shù)達到最大值16.6%，因此確定最適發(fā)酵溫度30℃。

2.2響應面優(yōu)化試驗

圖5　發(fā)酵溫度對主發(fā)酵的影響Fig.5 Effect of fermentation tem perature on main fermentation

表1　Box-Behnken實驗因素及編碼Table 1 Factors and levels of Box-Behnken experiment design

2.2.2模型方程的建立與顯著性影響按照Box-Behnken試驗設(shè)計的統(tǒng)計學要求，根據(jù)試驗因素和水平的要求，設(shè)計17次試驗，實驗結(jié)果見表2。

表2　響應面實驗設(shè)計與結(jié)果Table 2 Results of experiment of combination rotational design

2.2.1響應曲面法試驗設(shè)計根據(jù)Box-Behnken的中心組合實驗設(shè)計原則，采用3因素3水平，以酒藥質(zhì)量分數(shù)、麥曲質(zhì)量分數(shù)、發(fā)酵溫度為主要考察因素，運用響應面設(shè)計實驗組。其響應面實驗因素與編碼見表1。

2.2.3響應面實驗結(jié)果及分析用Design-Expert統(tǒng)計軟件對表2中的實驗數(shù)據(jù)進行二次回歸分析，得到多元二次回歸方程為：

乙醇體積分數(shù)=16.65-0.13A-0.48B-0.72C-0.030AB-0.43AC-0.48BC-0.87A2-0.63B2-0.91C2+ 0.51A2B-0.26A2C-0.14AB2

回歸方程模型的p值為0.001 9，表明該模型顯著（p＜0.05），說明方程對實驗的擬合度較好，實驗誤差小，因此該模型可以真實地擬合和推測實際情況；模型的決定系數(shù)R2=0.990 4，說明模型擬合程度良好，試驗誤差較小，該模型是比較合適的。

從表3可以看出，3個因素對響應值乙醇體積分數(shù)的影響大小分別是C（發(fā)酵溫度）極顯著、B（麥曲質(zhì)量分數(shù)）顯著，而A（酒藥質(zhì)量分數(shù)）不顯著。因素A2、B2、C2對響應值的曲面效應極顯著；因素A2B、AC、BC對響應值的交互影響顯著，說明3個因素均不同程度的對響應值產(chǎn)生顯著或極顯著的影響，本實驗設(shè)計的因素選擇是成功的?；貧w方程模型的F模型=34.33＞F0.01，且P=0.001 9，表明該模型極顯著（P＜0.05），不同主發(fā)酵工藝間的差異極顯著，說明方程對實驗的擬合度較好，實驗誤差小，因此該模型可以真實地擬合和推測實際情況；模型的決定系數(shù)R2=0.990 4，說明模型99.04%的實驗數(shù)據(jù)的可變性可用此模型解釋，僅有總變異的0.96%不能用此模型解釋；回歸模型的擬合程度良好，預測值與實驗值高度相關(guān)，試驗誤差小，該模型是合適的。

表3　回歸模型系數(shù)顯著性檢驗結(jié)果Tab le 3 Resu ltsof significant test for regression coefficient

利用Design Expert對表中的數(shù)據(jù)進行二次多元回歸擬合，可以得到二次回歸方程響應面圖及相應等高線，見圖6-8。由此可對任何二因素交互影響乙醇體積分數(shù)進行分析與評價，以確定最佳因素水平范圍。

由圖6可知，當酒藥質(zhì)量分數(shù)不變時，隨著麥曲質(zhì)量分數(shù)的增加，乙醇體積分數(shù)逐漸上升，當麥曲質(zhì)量分數(shù)為4%時，乙醇體積分數(shù)達到最高，此后隨著麥曲質(zhì)量分數(shù)的增加，乙醇體積分數(shù)呈下降的趨勢；當麥曲質(zhì)量分數(shù)不變時，隨著酒藥質(zhì)量分數(shù)的增加，乙醇體積分數(shù)呈現(xiàn)上升趨勢，在酒藥質(zhì)量分數(shù)為0.6%時，乙醇體積分數(shù)達到最高，此后隨著酒藥質(zhì)量分數(shù)的增加，乙醇體積分數(shù)呈下降的趨勢。等高線圖中的橢圓度較小，說明這兩個因素間沒有交互作用，但由表3可知，A2B之間交互作用對乙醇體積分數(shù)有顯著影響。

由圖7可知，當酒藥質(zhì)量分數(shù)不變時，隨著發(fā)酵溫度的升高，乙醇體積分數(shù)逐漸上升，當發(fā)酵溫度達30℃時，乙醇體積分數(shù)出現(xiàn)最高值，此后隨著發(fā)酵溫度的增大，乙醇體積分數(shù)呈下降的趨勢；當發(fā)酵溫度不變時，隨著酒藥質(zhì)量分數(shù)的增加，乙醇體積分數(shù)逐漸上升，在酒藥質(zhì)量分數(shù)為0.6%時，乙醇體積分數(shù)到達最高值；此后隨著酒藥質(zhì)量分數(shù)的增大，乙醇體積分數(shù)呈下降的趨勢。當發(fā)酵溫度與酒藥質(zhì)量分數(shù)交互作用時對乙醇體積分數(shù)的影響比各自單因素作用大，等高線圖橢圓度較大，故發(fā)酵溫度與酒藥質(zhì)量分數(shù)交互作用時對乙醇體積分數(shù)的影響顯著。

由圖8可知，當麥曲質(zhì)量分數(shù)不變時，隨著發(fā)酵溫度的升高，乙醇體積分數(shù)逐漸上升，當發(fā)酵溫度到達30℃時，乙醇體積分數(shù)出現(xiàn)最高值，此后隨著發(fā)酵溫度的升高，乙醇體積分數(shù)呈下降的趨勢；當發(fā)酵溫度不變時，隨著麥曲質(zhì)量分數(shù)的增加，乙醇體積分數(shù)逐漸上升，在麥曲質(zhì)量分數(shù)為4%時，乙醇體積分數(shù)到達最高值，此后隨著麥曲質(zhì)量分數(shù)的增加，乙醇體積分數(shù)呈下降的趨勢。當發(fā)酵溫度與麥曲質(zhì)量分數(shù)交互作用時對乙醇體積分數(shù)的影響比各自單因素作用時大，等高線橢圓度較大，故發(fā)酵溫度與麥曲質(zhì)量分數(shù)交互作用時對乙醇體積分數(shù)的影響顯著。

圖6　酒藥質(zhì)量分數(shù)和麥曲質(zhì)量分數(shù)對乙醇體積分數(shù)影響的響應面及其等高線Fig.6 Response sur face layer and contour p lot of the m utual-affection of them ass fraction of the wheat starter and the mass fraction of jiuyao on the alcoholic concentration

圖7　酒藥質(zhì)量分數(shù)和發(fā)酵溫度對乙醇體積分數(shù)影響的響應面及其等高線Fig.7 Response surface layer and contour plot of the mutual-affection of the m ass fraction of jiuyao and fermentation tem perature on the alcoholic concentration

圖8　麥曲質(zhì)量分數(shù)和發(fā)酵溫度對乙醇體積分數(shù)影響的響應面及其等高線Fig.8 Response su rface layer and contour p lot of the mutual-affection of themass fraction of the wheat starter and ferm entation tem peratu re on the alcoholic concentration

2.2.4最佳工藝條件的驗證由Design-Expert軟件得到優(yōu)化后的主發(fā)酵條件，確定最優(yōu)工藝參數(shù)為：發(fā)酵溫度29.02℃，酒藥質(zhì)量分數(shù)0.6%，麥曲質(zhì)量分數(shù)3.74%，沖缸加水比為1.2 mL/g，發(fā)酵時間8 d得到的預測乙醇體積分數(shù)是16.82%。為了驗證實驗的可靠性，采用最優(yōu)發(fā)酵條件進行實驗并測其最后的乙醇體積分數(shù)?？紤]實驗的可操作性，將工藝條件改為發(fā)酵溫度29.0℃，其他條件不變，此時，實驗測得值16.97%，與預測值的相對誤差為0.89%，與預測結(jié)果相符。因此，采用響應面法優(yōu)化得到的苦蕎干黃酒主發(fā)酵工藝最優(yōu)條件符合實際。

3　結(jié)語

采用響應面法對苦蕎干黃酒主發(fā)酵工藝進行優(yōu)化，實驗證明：酒藥質(zhì)量分數(shù)、麥曲質(zhì)量分數(shù)及發(fā)酵溫度對苦蕎干黃酒的乙醇體積分數(shù)都有顯著影響?？嗍w干黃酒釀造的最佳主發(fā)酵工藝參數(shù)為：發(fā)酵溫度29.0℃，酒藥質(zhì)量分數(shù)0.6%，麥曲質(zhì)量分數(shù)3.74%，沖缸加水比為1.2mL/g，主發(fā)酵時間8 d。所得產(chǎn)品的主要理化指標為：乙醇體積分數(shù)為17.0%，總糖（以葡萄糖計）為2.2 g/L，非糖固形物為41.1 g/L，總酸（以乳酸計）為6.4 g/L，氨基酸態(tài)氮為1.17 g/L，黃酮質(zhì)量濃度為1.24 mg/mL。經(jīng)后酵、過濾后所得到的苦蕎干黃酒呈黃棕色、清亮透明、有光澤；具有干黃酒特有的濃郁醇香；口味醇和、爽口、無異味；酒體協(xié)調(diào)、具有苦蕎干黃酒獨特的風格，是一種營養(yǎng)價值很高的保健酒。

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［12］顧國賢.釀造酒工藝學（第二版）［M］.北京：中國輕工業(yè)出版社，2013：472-494.

轉(zhuǎn)基因食品檢測關(guān)鍵技術(shù)研究及應用

自1974年科恩（Cohen）揭開轉(zhuǎn)基因技術(shù)應用的序幕起，“轉(zhuǎn)基因”這個詞在全球承受了無盡爭議。2015年1月13日，歐洲議會全體會議通過一項法令，允許歐盟成員國根據(jù)各自情況選擇批準、禁止或限制在本國種植轉(zhuǎn)基因作物。面對轉(zhuǎn)基因食品，目前的世界趨勢是：對相關(guān)食品必須給消費者真實而明確的信息。因此，不論是對轉(zhuǎn)基因食品貼示標簽，或是對轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因原料的分別輸送，轉(zhuǎn)基因原料和食品的檢測技術(shù)是必不可少的。

Morisset（2008）利用NASBA技術(shù)在芯片上完成對轉(zhuǎn)基因玉米MON863和MON810的多重定量檢測，證明了該方法在轉(zhuǎn)基因檢測方面的可應用性。Freeman（2011）根據(jù)量子點特性設(shè)計生物探針用來檢測小分子DNA。目的片段存在的情況下可以與探針結(jié)合暴露酶切位點，經(jīng)ExoⅢ內(nèi)切酶切開后探針與量子點的距離變增大發(fā)出熒光。CN201010604671.0公開了一種基于熒光量子點編碼二氧化硅球進行多種轉(zhuǎn)基因植物的檢測方法，其采用反相微乳法制備的二氧化硅球結(jié)構(gòu)均一，過程簡單易操作，控制QDs的種類和比例能夠準確編碼二氧化硅球，二氧化硅對QDs的熒光起到保護作用，提高QDs的穩(wěn)定性。CN200910181247.7公開了一種葡聚糖四氧化三鐵磁性納米粒子的制備方法、葡聚糖四氧化三鐵磁性納米粒子用于轉(zhuǎn)基因大豆檢測過程中DNA的提取純化以及PCR產(chǎn)物的純化。CN201510064905.X公開了一種利用微流體芯片高通量檢測轉(zhuǎn)基因玉米的方法，其使用單列流體通道包含反應孔腔數(shù)目不少于20、通道不少于3列的微流體芯片進行檢測。在一次PCR擴增過程中，同時完成2個玉米內(nèi)源基因以及18個外源重組品系的篩查檢測，檢測靈敏度可達1%。CN201510075479.X公開了一種利用多重PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因番木瓜的方法。該方法包含如下步驟：S1.設(shè)計多重PCR的5對引物；S2.以待檢測番木瓜基因組DNA為模板，在PCR反應中加入S1.設(shè)計的所有引物，進行PCR及電泳，從而得知所檢測的番木瓜是否為轉(zhuǎn)基因番木瓜。該發(fā)明多重PCR具有高效性、系統(tǒng)性、經(jīng)濟簡便性，成功建立了檢測番木瓜中轉(zhuǎn)基因成分的五重PCR技術(shù)，檢測限為0.2 ng，達到了轉(zhuǎn)基因番木瓜快速篩選的目的。CN201510005351.6公開了一種食品中轉(zhuǎn)基因成分的檢測方法，包括：步驟一、提取原材料的總蛋白；步驟二、將步驟一得到的總蛋白質(zhì)注射到檢測裝置中，使總蛋白通過檢測裝置，檢測裝置包括加樣裝置、多根中空纖維聚丙烯膜和第一多孔板體，中空纖維聚丙烯膜上附著有與轉(zhuǎn)基因蛋白特異性結(jié)合的第一抗體，加樣裝置包括第二多孔板體和圓錐體，中空纖維聚丙烯膜的兩端分別固定在第一和第二多孔板體上且分別與其上的孔洞貫通；步驟三，洗滌；步驟四，將與轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的且?guī)в袠擞浀牡诙贵w注射到檢測裝置的加樣孔，使第二抗體通過檢測裝置；步驟五，洗滌；步驟六，檢測中空纖維聚丙烯膜上是否存在標記，并將檢測結(jié)果和原材料中是否存在轉(zhuǎn)基因成分聯(lián)系起來。CN201410484724.8公開了一種新的轉(zhuǎn)基因地衣芽孢桿菌檢測試劑盒及其檢測方法，其通過巧妙地設(shè)計針對轉(zhuǎn)基因地衣芽孢桿菌序列的帶標記引物和探針，結(jié)合PCR擴增和核酸試紙條檢測技術(shù)，實現(xiàn)了轉(zhuǎn)基因地衣芽孢桿菌的高效快速檢測。該方法特異性強，靈敏度高和穩(wěn)定性好，對于提高轉(zhuǎn)基因地衣芽孢桿菌的準確性、縮短檢測時間具有重要的作用。CN201310409728.5公開了一種米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測法，以米或米制品為待測樣品，以轉(zhuǎn)基因稻米LLRICE62為陽性對照，以非轉(zhuǎn)基因稻米或者非LLRICE62的轉(zhuǎn)基因稻米為陰性對照；包括以下步驟：1）、設(shè)計耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的對應引物組；2）、提取待測樣品、陽性對照、陰性對照的DNA；3）、將步驟2）所得的待測樣品的DNA、陽性對照的DNA、陰性對照的DNA分別利用步驟1）所得的引物組設(shè)置PCR反應體系進行擴增；4）、利用步驟3）所得的待測樣品反應液、陽性對照反應液、陰性對照反應液進行比對，從而判定米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62。

隨著我國農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)的飛速發(fā)展以及人們對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品安全的持續(xù)熱點關(guān)注，各種轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)也就成了研究熱點。高靈敏度、高通量、自動化和低成本是轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)將來的發(fā)展趨勢。（江南大學圖書館張群）

Optimization of Main Fermentation Technology for Buckwheat Dry Rice Wine by Response Surface Method

WAN Ping，ZHANG Yu，YANG Lan，YANGWenbo，ZHAO Gang*
（Collegeof Biotechnology，Chengdu University，Chengdu 610106，China）

With 1∶1 buckwheat rice and glutinous rice as raw materials，the impacts of fermentation time，the mass fraction of jiuyao and wheat starter，proportion of water added into fermenter，fermentation temperature on buckwheat dry rice w ine fermentation during the main fermentation processwere studied by single factor experiment.The alcoholic strength ofmain fermentation was used as the response value to optim izemain fermentation technology forbuckwheatdry ricew ineby adopt response surfacemethod.The results indicated thatunder the condition of 0.6%jiuyao，3.74% wheat starter，1.2 m L/g proportion of water added into raw material，29.0℃fermentation temperature，and 8 d fermenting time，the alcoholic concentration up to 17.0%（20℃），the product is aromaand hasa unique taste styleof buckwheatdry ricew ine.

buckwheat，glutinous rice，dry ricewine，main fermentation，response surfacemethod

TS 262.4

A

1673—1689（2015）11—1185—07

2015-04-03

國家“十二五”科技支撐計劃項目（2012BAD34B05-13）；成都市經(jīng)濟和信息化委員會專項項目（201301012）；四川省科技支撐計劃項目（2012NZ0031）。

萬萍（1963—），女，四川邛崍人，工學學士，副教授，主要從事食品發(fā)酵工程方面的研究。E-mail：wanp66@aliyun.com

趙鋼（1959—），男，四川會理人，理學學士，教授，碩士研究生導師，主要從事雜糧綜合開發(fā)利用研究。

E-mail：zhaogang@cdu.edu.cn