EGFR與ERCC1的表達在非小細胞肺癌中的臨床意義

北京懷柔醫(yī)院（101400）隨冬俠 高桂華

肺癌是目前全球范圍內發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，已經嚴重威脅人民的健康和生命。根據病理學的分型,確診的肺癌中約有80%～85%為非小細胞肺癌（NSCLC），并且80%的患者在確診時已屬于中晚期，已不能進行手術治療，這部分患者的是以化療為主的綜合治療，以鉑類為基礎聯合第三代化療新藥化療方案已成為NSCLC患者標準化療方案，但療效仍然很低，肺癌耐藥成為臨床化療失敗最常見和最難克服的問題。多項研究顯示：腫瘤組織的基因表達情況與晚期NSCLC化療的療效相關，這使得制定適合不同病人化療方案成為可能。許多臨床研究的結果顯示，高水平表達ERCC1的患者其預后較差。Chun-MingTasi[1]等分析非小細胞肺癌中表皮生長因子受體(EGFR)與腫瘤多重藥性關系時發(fā)現EGFR不僅影響非小細胞肺癌的發(fā)展和預后，而且也影響腫瘤細胞對順鉑等化療藥物的敏感性，應用單抗或阻遏物可增加化療藥物的療效，另外EGFR表達陽性的病人也較易產生耐藥性。

1 材料與方法

1.1 研究對象：84例非小細胞肺癌組織均取自北京懷柔醫(yī)院2010.1～2013.12電子支氣管鏡活檢、經皮肺穿或外科手術切除標本并證實為非小細胞肺癌，術前未經放化療。約占同期在醫(yī)院治療患者的5%～10%。患者中男性50例，女性34例，年齡35～79歲，中位年齡56歲。年齡<60歲50例，≥60歲34例。根據WHO組織病理學分型，其中鱗癌44例、腺癌36例、其他4例。TNM分期(2009年肺癌國際分期修正系統(tǒng)）：Ⅰ期8例（ⅠA2例、ⅠB6例）,Ⅱ期15例（ⅡA9例、ⅡB6例），Ⅲ期33例（ⅢA10例、ⅢB23例），Ⅳ期28例。ⅠA～ⅢA期為外科手術切除標本，ⅢB～Ⅳ期為電子支氣管鏡活檢或經皮肺穿標本。標本均經10%中性甲醛固定，石蠟包埋。其中51例（ⅢB期23例，Ⅳ期28例）為用含鉑類方案（EP、GP、TP、NP方案）化療的初治晚期非小細胞肺癌患者的病理標本，其中男性35例，女性16例，年齡范圍43～76歲，中位年齡52歲。其中鱗癌30例，腺癌21例。所有患者都接受至少3周期含鉑的化療方案。51例入選患者胸片或胸部CT上均有可測量病灶及完整的隨訪資料。

1.2 實驗方法：免疫組化檢測：免疫組化試劑盒及單抗分別由美國ZYMED公司和NEOMARKERS公司生產，購自福州邁新公司和北京中杉金橋生物公司。采集入組前腫瘤組織，常規(guī)甲醛固定，石蠟包埋。采用免疫組化S-P法，按說明書常規(guī)操作。以PBS代替一抗作標準陰性對照。免疫組化結果觀察：由2名高職稱病理科醫(yī)師共同閱片。Olympus光學顯微鏡高倍鏡下隨機選擇5個視野,每個視野記數100個細胞，ERCC1以見到位于腫瘤細胞核呈棕黃色染色為陽性標準（附圖1）, EGFR細胞或胞漿呈棕黃色顆粒為陽性（附圖2），根據染色程度和染色細胞所占百分比進行評分。染色程度：基本不著色為0級；著色呈淡黃色為1級；著色呈黃色為2級；著色呈棕褐色為3級。染色陽性細胞百分比：著色陽性細胞占計數細胞< 5%為0級( - )，5%～25% 為1級( + )， 25%～50%為2級(++ )，> 50%為3級( + + + )。將胞核染色程度分級與染色細胞百分比相乘，乘積大于4者為陽性表達(高表達)，0～3者為陰性表達(低表達)。

附圖1 ERCC1在NSCLC患者的陽性表達(10×20)

附圖2 EGFR在NSCLC患者的陽性表達(10×20)

附表1 ERCC1與EFGR陽性表達與NSCLC患者臨床病理特征關系

附表2 晚期NSCLC患者EGCC1、EGFR表達與治療結果關系

1.3 統(tǒng)計學處理 統(tǒng)計分析采用SAS9.1.3軟件包。兩個或三個樣本率的比較采用χ2檢驗,不符合檢驗條件的采用fisher確切概率法，單因素生存分析用Kaplan-Meier法，采用Log-rank test對生存曲線進行檢驗；均以P≤0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 ERCC1與EFGR陽性表達與NSCLC患者臨床病理特征關系 ERCC1與EFGR表達與NSCLC患者的性別、年齡、分期、病理類型無明顯相關性 （P＞0.05）。（見附表1）

2.2 晚期NSCLC患者EGCC1、EGFR表達與治療結果關系 51例晚期NSCLC患者：ERCC1表達陰性的化療有效率為36.5%，TTP疾病進展時間(月)為9.6個月，MST中位生存期（月）為19.2個月，ERCC1表達陽性的分別為15.4%、6.0個月、10.0個月；EGFR表達陰性的化療有效率為35.5%，TTP為9.5個月，MST為15.5個月，EGFR表達陽性的分別為22.7%、6.0個月、11.4個月。ERCC1或EGFR陰性表達的患者治療有效率高于陽性表達者，ERCC1或EGFR陰性表達的患者的TTP、MST均長于陽性表達組（P＜0.05）。（見附表2）

3 討論

肺癌耐藥性是影響肺癌化療療效的主要因素。非小細胞肺癌（NSCLC）對首次化療的敏感性很低，肺癌耐藥的產生與多藥耐藥基因(MDR)和P-糖蛋白(P-gp)表達的增加,多藥耐藥相關蛋白基因(MRP)、肺耐藥蛋白基因(LRP)及它們產物表達的增加，以及拓撲異構酶(TopoⅡ)表達下降和及谷胱甘肽-S-轉移酶π(GST-π)系統(tǒng)表達增加等機制有關[2]。目前，一些研究表明EGFR、ERCC-1高表達或基因突變與化療療效和肺癌化療耐藥有關，可能作為預測預后的指標。鉑類藥物對NSCLC的殺傷作用主要是導致DNA的鏈間交聯或鏈內交聯，從而誘導腫瘤細胞凋亡。DNA的修復能力則是鉑類耐藥的重要原因，通過核苷酸切除修復(NER)而去除鉑類藥物導致DNA鏈內加合物被認為是鉑類耐藥的主要機制，ERCC1是NER途徑的關鍵基因，具有損傷DNA5’的識別功能，并且具有5-核酸內切酶的活性。ERCC1不僅是NER系統(tǒng)中重要的切除酶，還參與對DNA鏈交聯的修復。Rosell等[3]研究發(fā)現ERCC1低表達的患者術后輔助化療受益，Rosell等[4]認為，ERCC1低表達者MST長于高表達者，本研究提示ERCC1陰性表達的患者治療有效率高于陽性表達者，ERCC1陰性表達的患者的TTP、MST均長于陽性表達組，與上述實驗結果一致。表皮生長因子受體(EGFR)是原癌基因c-erbB-l(也稱HER-1)的表達產物。Chun-Ming Tasi[5]等研究EGFR表達與非小細胞肺癌細胞多重耐藥性關系時指出EGFR過度表達的非小細胞肺癌細胞對化療藥物順鉑等的耐藥性升高，敏感性降低。本研究結果提示EGFR高表達的NSCLC對鉑類化療療效低于低表達。因此，聯合檢測ERCC1和EGFR有可能成為預測NSCLC對鉑類藥物化療療效的生物標志物，用于指導臨床的個體化治療。