氣質(zhì)聯(lián)用法快速測(cè)定進(jìn)出口白酒中3種鄰苯二甲酸酯

魏斌馬卉魏云計(jì)朱臻怡馮民陸井蓮吉玉輝韓閱葉何健

（1.淮安出入境檢驗(yàn)檢疫局 江蘇淮安 223001；2.泰州出入境檢驗(yàn)檢疫局）

氣質(zhì)聯(lián)用法快速測(cè)定進(jìn)出口白酒中3種鄰苯二甲酸酯

魏斌1馬卉2魏云計(jì)1朱臻怡1馮民1陸井蓮1吉玉輝1韓閱葉1何健1

（1.淮安出入境檢驗(yàn)檢疫局 江蘇淮安 223001；2.泰州出入境檢驗(yàn)檢疫局）

根據(jù)國(guó)內(nèi)外相關(guān)法規(guī)及實(shí)際檢測(cè)需要，采用氮吹除去乙醇后正己烷提取白酒中的鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯和鄰苯二甲酸二異壬酯，建立了氣相色譜儀質(zhì)譜法測(cè)定進(jìn)出口白酒中的3種鄰苯二甲酸酯。在0.01-2 mg/L濃度范圍內(nèi)3種鄰苯二甲酸酯均有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.9980，0.9982和0.9988，添加回收率為77.8%-95.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.9%-7.6%（n=5），符合進(jìn)出口白酒日常檢測(cè)要求。

鄰苯二甲酸二丁酯；鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯；鄰苯二甲酸二異壬酯；氣相色譜質(zhì)譜法；白酒

1 前言

鄰苯二甲酸酯類化合物（phthalates，PAEs）是塑料工業(yè)中常見的塑化劑，它能增加塑料的可塑性和柔韌性。近幾年P(guān)AEs被歸類為疑似環(huán)境荷爾蒙，其生物毒性主要屬雌激素與抗雄激素活性，可能會(huì)損害人體生殖系統(tǒng)甚至引發(fā)癌癥［1］，尤其是鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）及其代謝物質(zhì)結(jié)構(gòu)類似于荷爾蒙，可使男性精子異常并使女性性早熟，對(duì)幼兒的危害更大，可能使幼兒性別錯(cuò)亂和生殖器短?。?］。白酒生產(chǎn)過程中PAEs主要源于酒泵進(jìn)出乳膠管、塑料輸酒管、封酒缸塑料布、塑料接酒桶、成品酒塑料內(nèi)蓋、成品酒塑料包裝等。由于白酒中的主要成分是乙醇，PAEs在乙醇中遷移率比較高，因此成品白酒中不可避免地產(chǎn)生PAEs的遷移。我國(guó)允許在非脂肪性及嬰兒食品的容器和包裝材料中使用DEHP和鄰苯二甲酸二丁酯（DBP），但食品中DEHP、鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）和DBP在食品中的最大殘留量分別為1.5 mg/kg、9 mg/kg和0.3 mg/kg［3］，且DEHP和DBP不允許直接加入到食品中，它們已經(jīng)被列入“食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)”的黑名單，如檢出應(yīng)排查是否為人為添加。進(jìn)口食品應(yīng)當(dāng)符合我國(guó)相關(guān)法規(guī)及規(guī)范，因此對(duì)于進(jìn)口白酒應(yīng)當(dāng)檢測(cè)上述3種PAEs并符合原衛(wèi)生部之規(guī)定。歐盟對(duì)于食品中DEHP與DBP的規(guī)定和限量與我國(guó)類似，并規(guī)定DEHP和DBP在終端產(chǎn)品中不得超過0.1%和0.05%；韓國(guó)對(duì)酒類PAEs的限量也有規(guī)定，其中對(duì)DEHP的控制比我國(guó)更為嚴(yán)格，直接導(dǎo)致2013年退運(yùn)我國(guó)出口白酒事件；臺(tái)灣“衛(wèi)生署”對(duì)食品中PAEs的每日耐受攝入量（TDI）規(guī)定為DEHP為0.05mg，DBP為0.01mg，DINP（DIDP）為0.15 mg。因此在進(jìn)出口白酒的檢測(cè)中均有DBP、DEHP和DINP的檢測(cè)項(xiàng)目。

目前有關(guān)PAEs測(cè)定方法主要有氣相色譜法（GC）［4］、高效液相色譜法（HPLC）、氣質(zhì)聯(lián)用法（GCMS）［5］、液相色譜質(zhì)譜法（LC-MS）［6］和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）［7］。但目前尚未有專門以進(jìn)出口白酒中為基質(zhì)進(jìn)行PAEs檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)機(jī)構(gòu)一般主要參考《GB/T 21911-2008食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定》中“不含油脂試樣”的處理方法，以及《SN/ T 3147-2012出口食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定》中“不易乳化液體樣”的處理方法，此兩項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)方法涉及基質(zhì)種類較多，未針對(duì)白酒這一多醇多酯基質(zhì)進(jìn)行詳細(xì)討論。

2 材料與方法

2.1材料

2.1.1儀器

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：Thermo Trace-DSQII配有EI離子源，美國(guó)Thermofisher公司；HP-5MS彈性石英毛細(xì)管（30m×0.25mm×0.25μm）：美國(guó)安捷倫公司；電子天平：PB-203E型，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；恒溫氮吹裝置：N-EVAP14165型，美國(guó)Organomation聯(lián)合公司；超聲儀：sb-5200型，寧波新芝科技；具塞玻璃離心管、玻璃膠頭滴管、玻璃移液管：天津玻璃儀器廠，使用前采用分析純乙酸乙酯淋洗一遍。

2.1.2試劑

標(biāo)準(zhǔn)品：鄰苯二甲酸二異壬酯、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯，德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司；正己烷、乙酸乙酯：色譜純，德國(guó)Merck公司；乙酸乙酯、NaCl、無水Na2SO4：分析純，南京化學(xué)試劑有限公司。

2.1.3試驗(yàn)樣品

白酒：部分選自進(jìn)出口企業(yè)送檢樣品，部分為周邊市場(chǎng)購(gòu)買。

2.2方法

2.2.1樣品預(yù)處理

用玻璃吸管轉(zhuǎn)移并用天平準(zhǔn)確稱量白酒5g（精確到0.01 g）于10 mL玻璃氮吹管中，以10 psi的壓力氮吹約10 min，至液體明顯減少且無明顯酒味；加入2 mL正己烷溶解，渦旋1 min，超聲5 min；將超聲后的乳濁液靜置分層，用玻璃滴管吸取上層正己烷層1 mL，上機(jī)。

2.2.2儀器條件

氣相色譜條件：進(jìn)樣體積1.0 μL，進(jìn)樣口溫度250°C，不分流進(jìn)樣，載氣流速氦氣1.0 mL/min，柱溫箱初始溫度60°C，保持1 min，20°C/min升至220°C，保持1 min，5°C/min升至280°C，保持4 min。

質(zhì)譜條件：電離模式為電子轟擊（EI），離子源溫度200°C，傳輸線溫度280°C，溶劑延遲時(shí)間為6 min。數(shù)據(jù)采集方式：分時(shí)段選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM）方式，6 min-15 min定量離子為m/z 149，定性離子為m/z 121 205 223；15 min-end，定量離子為m/z 149，定性離子為m/z 113 127 279 293。

2.2.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

用小型玻璃吸管吸取微量標(biāo)準(zhǔn)液并逐滴添加到10 mL容量瓶中約0.02 g（精確到0.0001 g），加入色譜純級(jí)正己烷溶解并定容得到較大濃度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再通過稀釋配制得到100 mg/L大濃度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再逐級(jí)稀釋到2、1、0.5、0.1、0.05、0.01 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)液工作組。

3 結(jié)果與討論

3.1前處理方法

比較了乙腈、丙酮、乙酸乙酯、正己烷等幾種常見的有機(jī)提取溶劑。結(jié)果顯示乙腈提取效果與正己烷差不多，但不易與水分層；丙酮提取后回收率只有40%-60%，不能滿足要求；乙酸乙酯提取后色譜圖雜峰變多，對(duì)儀器有一定的干擾，最后選擇正己烷進(jìn)行提取。由于乙醇對(duì)PAEs的溶解性很好，經(jīng)過水浴加熱蒸發(fā)乙醇后提取可有效提高回收率，但耗時(shí)較多，考慮到進(jìn)出口白酒批次多、時(shí)效性強(qiáng)，本方法采用氮吹法除去乙醇。加入NaCl或者Na2SO4鹽析未見回收率明顯增加，反而有帶入塑料試劑瓶中PAEs的風(fēng)險(xiǎn)，因此不予采用。直接用正己烷提取簡(jiǎn)單快捷，回收率能滿足檢測(cè)要求，與國(guó)標(biāo)方法一致，使得檢測(cè)機(jī)構(gòu)出證具有參考性?！禨N/T 3147-2012出口食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定》中還有QuEChERS及SPE前處理方法，但均針對(duì)不含油脂固體或半固體試樣以及含油脂試樣，對(duì)以醇酯為主要雜質(zhì)的白酒并不適用，因此未予采納。

3.2除去乙醇的必要性

國(guó)標(biāo)方法中沒有要求必須除去乙醇，但從實(shí)際檢測(cè)角度來看，乙醇不僅會(huì)對(duì)儀器離子源中的燈絲以及非極性色譜柱有一定損害［8］，而且白酒中多種復(fù)雜的揮發(fā)成分會(huì)對(duì)檢測(cè)造成干擾，尤其是對(duì)較低濃度DBP的檢測(cè)存在干擾，圖1為DBP濃度為50 μg/kg左右的陽(yáng)性樣品氮吹前后色譜對(duì)比圖。

圖1　DBP濃度為50 μg/kg左右的陽(yáng)性樣品氮吹前后色譜對(duì)比圖

圖1顯示，在氮吹前DBP峰周圍雜峰較多，主峰型左側(cè)有為分離的干擾物質(zhì)，會(huì)造成測(cè)量結(jié)果偏大。氮吹后干擾物質(zhì)明顯減少，且峰型較為標(biāo)準(zhǔn)。在檢測(cè)較大添加濃度樣品時(shí)，則對(duì)檢測(cè)結(jié)果干擾較小。

3.3色譜的定性與定量

本研究使用中弱極性的毛細(xì)管色譜柱，hp-5ms，為目前檢測(cè)PAEs最常用色譜柱，具有分離度好、峰型好、不拖尾和出峰時(shí)間適中的優(yōu)點(diǎn)。由于m/z 149為大多數(shù)PAEs的主要特征離子碎片且豐度大于90%，因此以m/z 149為定量離子。圖2（a）為0.5 mg/kg混合標(biāo)準(zhǔn)液的SIM模式下總離子色譜圖，（b）為添加了0.2 mg/kg混合標(biāo)準(zhǔn)液的白酒樣品（考慮到濃縮倍數(shù)后相當(dāng)于檢測(cè)濃度為0.5 mg/kg），（c）為20.04-21.17 min區(qū)間以m/z 149為定量離子提取的多重火焰型峰，為DINP特有的峰型，定量積分時(shí)應(yīng)手動(dòng)選取整個(gè)火焰峰區(qū)間的峰面積之和。從圖2中可以看出，白酒中添加物質(zhì)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)出峰時(shí)間一致，且目標(biāo)物周圍無雜峰干擾，可以有效的定性與定量。

圖2　3種PAEs總離子色譜圖

3.4方法的線性相關(guān)系數(shù)、添加回收率及方法檢測(cè)限

將2、1、0.5、0.2、0.1、0.05 mg/kg的系列標(biāo)準(zhǔn)液工作組按照儀器方法上機(jī)檢測(cè)，DBP與DEHP在1-0.05mg/kg范圍內(nèi)的線性相關(guān)系數(shù)（r2）分別為0.9980和0.9982，DINP在2-0.1 mg/kg范圍內(nèi)r2為0.9988，說明線性關(guān)系良好。在白酒樣品中添加濃度為0.1、0.2和0.5 mg/kg的3種PAEs的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液制成添加回收樣品，經(jīng)5次平行檢測(cè)，結(jié)果見表1。

表1　白酒中3種PAEs在3個(gè)添加水平下的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）

表1顯示，扣除白酒中本底PAEs后回收率為77.8%-95.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.9%-7.6%。以實(shí)驗(yàn)中信噪比S/N≥3確定檢出限（LOD），DBP為0.01 mg/kg，DEHP為0.02 mg/kg，DINP為0.05 mg/kg；以S/N≥10確定定量限（LOQ），DBP為0.03 mg/kg，DEHP為0.05 mg/kg，DINP為0.18 mg/kg。方法滿足進(jìn)出口白酒的檢測(cè)要求。

3.5實(shí)際樣品測(cè)定

選擇18種白酒樣品（從市場(chǎng)價(jià)格上涵蓋了中高低各個(gè)品牌檔次）以及本地小酒坊生產(chǎn)的無品牌塑料瓶裝白酒進(jìn)行3種PAEs檢測(cè)，結(jié)果見表2。

表2　18中白酒樣品3種PAEs檢測(cè)情況（重新制表）

表2顯示，DBP含量在0.015-1.16 mg/kg之間，有3個(gè)樣品不合格（根據(jù)遷移量限值0.3 mg/kg判斷）；DEHP含量在0.007-0.043 mg/kg之間，均合格（根據(jù)遷移量限值1.5 mg/kg判斷）；DBP與DEHP檢測(cè)中，儀器顯示值低于LOD值，判定為未檢出；DINP均未出峰，判定為未檢出。

4 結(jié)論

結(jié)合國(guó)內(nèi)外對(duì)白酒中PAEs遷移的規(guī)定，建立了白酒中DBP、DEHP和DINP 3種PAEs的氣相色譜質(zhì)譜法。該方法切合國(guó)標(biāo)，簡(jiǎn)單快速，靈敏度高，定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，適合進(jìn)出口白酒的快速檢測(cè)。

［1］王紅，彭瑾，朱寬正，等.白酒塑化劑危害及應(yīng)對(duì)措施［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2014，24（4）：601-606.

［2］Swan S H，Main K M，Liu F，et al.Decrease in anogenital distance among male infants with prenatal phthalate exposure［J］. Environ Health Perspect，2005，113（8）：1056-1061.

［3］衛(wèi)生部辦公廳通報(bào)食品及食品添加劑中鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)最大殘留量的函［Z］.衛(wèi)生監(jiān)督函［2011］551號(hào)，2011.6.22.

［4］盧艷，杜麗平，喬陽(yáng)，等.氣相色譜法測(cè)定茶葉中鄰苯二甲酸酯［J］.分析實(shí)驗(yàn)室，2015，34（2）：194-198.

［5］張芳梅，牟振波，陳中祥，等.氣相色譜質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中15種鄰苯二甲酸酯［J］.中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2013，3（2）：36-42.

［6］鄭榮，許勇，于建，等.色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定化妝品中25種鄰苯二甲酸酯［J］.分析實(shí)驗(yàn)室，2014，33（7）：864-868.

［7］于建，許勇，鄭榮，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定化妝品中23種鄰苯二甲酸酯類化合物［J］.日用化學(xué)工業(yè)，2014，9（44）：531-533.

［8］蔡冠梁.氣相色譜-質(zhì)譜儀離子源燈絲的修復(fù)［J］.分析儀器，1995，4：53-54.

Determination of DBP，DEHP and DINP Residues in Import-Export Liquor by GC-MS

Wei Bin1，Ma Hui2，Wei Yunji1，Zhu Zhenyi1，F(xiàn)eng Min1，Lu Jinglian1，Ji Yuhui1，Han Yueye1，He Jian1
（1.Huaian Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Huaian，Jiangsu 223001；2.Taizhou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau）

Pursuant to relevant laws and regulations in domestic and abroad，a method was developed for the determination of dibutyl phthalate（DBP），bis（2-ethylhexyl）phtalate（DEHP）and diisononyl phthalate（DINP）in liquor by gas chromatography-mass spectrometry（GC-MS）with n-hexane as extraction solvent which was compared with several usual solvents.The mass concentration of DBP，DEHP and DINP was linear with peak area in the range of 0.01-2 mg/L with the correlation coefficient of 0.9980，0.9982 and 0.9988.The recovery was in the range of77.8%-95.3%，the relative standard deviation of detection results was in the range of 2.9%-7.6%（n=5）.The method is suitable for the determination of DBP，DEHP and DINP in import-export liquor.

DBP；DEHP；DINP；Gas Chromatography-Mass Spectrometry；Liquor

O657.63

E-mail：seuwei@126.com

2015-04-28