• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    貝那普利對(duì)高血壓患者內(nèi)皮祖細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激的影響

    2015-10-22 09:08:03李永東葛智平溫慧華劉丹阿拉坦高勒
    中國(guó)心血管雜志 2015年1期
    關(guān)鍵詞:祖細(xì)胞那普利內(nèi)皮

    李永東 葛智平 溫慧華 劉丹 阿拉坦高勒

    .基礎(chǔ)研究.

    貝那普利對(duì)高血壓患者內(nèi)皮祖細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激的影響

    李永東 葛智平 溫慧華 劉丹 阿拉坦高勒

    目的 探討貝那普利對(duì)高血壓患者內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)凋亡和氧化應(yīng)激的影響。方法入選符合《中國(guó)高血壓防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)的1級(jí)高血壓患者15例,同時(shí)選取年齡、性別相匹配的健康體檢者15名為對(duì)照組。所有受試者抽取外周血,常規(guī)密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞,將經(jīng)鑒定的正在分化的EPC培養(yǎng)5 d后用于實(shí)驗(yàn)。將分離、培養(yǎng)獲得的每一例高血壓患者EPC培養(yǎng)5 d后將細(xì)胞平行分為5份,每份細(xì)胞根據(jù)不同的刺激處理?xiàng)l件分為高血壓組、不同濃度貝那普利(1、10和100 μmol/L)干預(yù)組、貝那普利(10 μmol/L)+基質(zhì)細(xì)胞衍生因子/受體趨化因子4(SDF-1/CXCR4)拮抗劑AMD3100干預(yù)組。上述干預(yù)24 h后進(jìn)行EPC凋亡檢測(cè):用Annexin-V/PI法;氧化應(yīng)激檢測(cè):黃嘌呤氧化法測(cè)定上清液中超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥酸法測(cè)定丙二醛含量。結(jié)果 (1)與對(duì)照組比較,高血壓組外周血EPC凋亡率明顯增加(t早=6.6334,t晚=3.812;均為P<0.01),氧化應(yīng)激反應(yīng)明顯增高(tSOD=8.258,tMDA=6.6806;均為P<0.01);(2)隨著貝那普利干預(yù)濃度的增加(1、10和100 μmol/L),EPC凋亡率也隨之降低(F早=17.39,F(xiàn)晚=51.65;均為P<0.05),氧化應(yīng)激反應(yīng)也隨之降低,呈濃度依賴(lài)性(FSOD=14.56,F(xiàn)MDA=7.859;均為P<0.05)。與10 μmol/L貝那普利干預(yù)組比較,10 μmol/L貝那普利+AMD 3100干預(yù)組的EPC凋亡率增加(t早=3.551,t晚=5.333;均為P早、晚<0.05),氧化應(yīng)激反應(yīng)增高(tSOD=1.931,tMDA=0.6407;均為P<0.05)。結(jié)論 貝那普利能顯著改善高血壓患者體外EPC凋亡及氧化應(yīng)激反應(yīng),并可能通過(guò)SDF-1/CXCR4軸發(fā)揮作用。

    高血壓; 內(nèi)皮祖細(xì)胞; 凋亡; 氧化應(yīng)激; 拮抗劑AMD 3100

    原發(fā)性高血壓是最常見(jiàn)的心血管疾病之一,并可造成心腦腎及周?chē)軆?nèi)皮損害,導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cell,EPC)是一群能增殖分化為成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞,參與出生后血管新生、血管形成及內(nèi)皮損傷修復(fù)的前體細(xì)胞。EPC可維持內(nèi)皮的完整和抑制內(nèi)皮的激活,這種生物學(xué)作用在高血壓的發(fā)生、發(fā)展中起關(guān)鍵作用。高血壓的發(fā)病機(jī)制中腎素-血管緊張素系統(tǒng)起了重要作用,血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEI)通過(guò)抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶,削弱血管緊張素Ⅱ介導(dǎo)的各種病理作用,降低血壓,改善血管、心臟重構(gòu),改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能。已有研究表明,高血壓血管損傷與EPC的凋亡增加和氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)有關(guān)[1-2],而ACEI對(duì)高血壓患者外周循環(huán)中EPC凋亡及氧化應(yīng)有何影響,ACEI對(duì)高血壓患者的治療作用是否與EPC凋亡和氧化應(yīng)激的改善有關(guān)目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)相關(guān)研究。已知基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)及其受體趨化因子4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)之間的受體配體生物軸在EPC動(dòng)員、遷移及歸巢過(guò)程中起重要作用[3]。本實(shí)驗(yàn)擬探討貝那普利能否改善高血壓患者EPC凋亡和氧化應(yīng)激反應(yīng),同時(shí)探討SDF-1/ CXCR4軸在其中的可能作用。

    1 材料和方法

    1.1研究對(duì)象

    2011年10月在內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院心內(nèi)科入選符合《中國(guó)高血壓防治指南》(2012版)診斷標(biāo)準(zhǔn)的1級(jí)高血壓患者15例,年齡38~63歲,平均(47±12)歲,其中男性9例,女性6例。排除標(biāo)準(zhǔn):既往服用過(guò)降壓藥物的患者;合并血脂、血糖代謝異常的患者;抽煙、酗酒者;合并感染性疾病如嚴(yán)重的上呼吸道感染、肺部、肝膽道感染等;高熱,應(yīng)用炎癥抑制藥物如非固醇類(lèi)消炎鎮(zhèn)痛藥、類(lèi)固醇和鴉片類(lèi)藥物者。同時(shí)選取年齡、性別相匹配的健康體檢者15名作為對(duì)照組,年齡36~61歲,平均(46±11)歲,其中男性10例,女性5例。

    1.2主要試劑和儀器

    EGM-2-MV培養(yǎng)基為L(zhǎng)onza公司產(chǎn)品,DiI標(biāo)記的乙?;兔芏戎鞍祝╝cLDL-DiI)和FITC-lectin為BTI公司產(chǎn)品,AMD3100為Roche公司產(chǎn)品,SDF-1試劑盒、CD34、CD133、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)試劑盒、丙二醛(malonaldehyde,MDA)試劑盒購(gòu)自北京博奧森公司。細(xì)胞培養(yǎng)箱、多功能酶標(biāo)儀為美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司產(chǎn)品,流式細(xì)胞儀為BD公司產(chǎn)品,熒光倒置顯微鏡為尼康公司產(chǎn)品。

    1.3人EPC的分離、培養(yǎng)和鑒定

    所有研究對(duì)象于入選后第2天空腹采集新鮮外周抗凝血20 ml,常規(guī)密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞。將單個(gè)核細(xì)胞以1×105個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種在人纖維連接蛋白包被的6孔培養(yǎng)板上。加入EGM-2-MV培養(yǎng)基(hEGF,Hydrocortisone,VEGF,F(xiàn)GF-B,R3-IGF-1),于5%CO2培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)。培養(yǎng)4 d后,用PBS洗掉非貼壁細(xì)胞。為維持細(xì)胞原生存環(huán)境,EGM-2-MV培養(yǎng)基中加入20%的患者來(lái)源血清細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)至5 d后進(jìn)行各種檢測(cè)分析。貼壁細(xì)胞用acLDL-DiI和FITC-lectin行熒光化學(xué)染色,激光共聚焦顯微鏡下觀察,染色雙陽(yáng)性細(xì)胞被認(rèn)為是正在分化的EPC,每孔隨機(jī)選擇15個(gè)視野(×200)行EPC計(jì)數(shù)。取其平均值換算為每平方毫米的細(xì)胞個(gè)數(shù)記錄。將培養(yǎng)5 d的EPC消化,制成細(xì)胞懸液,按操作說(shuō)明書(shū)加入CD34及CD133單克隆抗體,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞CD34、CD133的表達(dá)。

    1.4實(shí)驗(yàn)分組和方法

    將上述分離得到的每例人群EPC培養(yǎng)5 d后用于實(shí)驗(yàn)研究;15例正常組人群EPC作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組,而15例高血壓患者人群分離得到的EPC培養(yǎng)5 d后,將每例患者來(lái)源的內(nèi)皮祖細(xì)胞平行分為5份,根據(jù)不同的處理?xiàng)l件設(shè)置為5組:高血壓組、不同濃度貝那普利(1、10和100 μmol/L)干預(yù)高血壓組和貝那普利(10 μmol/L)+SDF-1/CXCR4拮抗劑AMD3100干預(yù)組;每組都為15例。其中貝那普利原粉以不同濃度(1、10和100 μmol/L)與高血壓組EPC共培養(yǎng)24 h(在含20%患者來(lái)源血清的培養(yǎng)基中同時(shí)加入貝那普利,于37 C、5%CO2飽和濕度條件的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng))。隨后檢測(cè)所有實(shí)驗(yàn)組外周血EPC凋亡率和氧化應(yīng)激水平。

    1.5檢測(cè)項(xiàng)目和方法

    1.5.1貝那普利干預(yù)對(duì)EPC凋亡的影響 用含1%患者來(lái)源血清細(xì)胞的EGM-2-MV培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12 h后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。需用AMD3100預(yù)處理的細(xì)胞組,經(jīng)20 μmol/L AMD3100預(yù)處理1 h,用含20%患者血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h,按Annexin-V-FLUOS staining kit的操作說(shuō)明進(jìn)行FITC-Annexin-V/PI的熒光染色,在熒光顯微鏡下(×400)觀察并應(yīng)用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞占所有細(xì)胞的比例,每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。FITC+PI-的細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞,F(xiàn)ITC+PI+的細(xì)胞為晚期凋亡細(xì)胞。

    1.5.2貝那普利干預(yù)EPC氧化應(yīng)激的檢測(cè) 1%患者來(lái)源血清細(xì)胞的EGM-2-MV培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12 h后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。需AMD3100預(yù)處理的細(xì)胞組,經(jīng)20 μmol/L AMD 3100預(yù)處理1 h,用含20%患者血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h,黃嘌呤氧化法測(cè)定上清液中SOD活力,硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量。按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,分光光度儀測(cè)定各組的吸光度OD值,計(jì)算各組的SOD活性和MDA含量。

    1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)量資料用表示,組間比較采用單因素方差分析和t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1EPC的鑒定

    人EPC分離培養(yǎng)第5天時(shí),倒置顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞呈短梭形,為單層細(xì)胞。用acLDL-DiI及FITC標(biāo)記荊豆凝集素(FITC-UEA-I)對(duì)細(xì)胞染色后,用熒光顯微鏡觀察,發(fā)紅色熒光的為acLDL-DiI陽(yáng)性細(xì)胞,發(fā)綠色熒光的是UEA-I陽(yáng)性細(xì)胞,染色雙陽(yáng)性的細(xì)胞為正在分化的EPC。流式細(xì)胞儀分析CD34和CD133的陽(yáng)性率分別為72.55%±5.17%和71.31±4.39%。見(jiàn)圖1。

    圖1 人外周血EPC經(jīng)acLDL-DiI和FITC-UEA-Ⅰ雙熒光染色鑒定結(jié)果

    2.2貝那普利對(duì)EPC凋亡的影響及SDF-1 CXCR 4拮抗劑AMD3100在其中的作用

    與對(duì)照組比較,高血壓組樣本EPC凋亡率明顯增高(t早=6.6334,t晚=3.812;均為P<0.01)。用1、10和100 μmol/L的貝那普利干預(yù)體外培養(yǎng)的高血壓患者EPC 24 h,檢測(cè)其凋亡率顯示,隨著貝那普利濃度逐漸增加,EPC早期、晚期凋亡率均逐漸降低,并呈濃度依賴(lài)性(F早=17.39,F(xiàn)晚=51.65;均為P<0.05)。與10 μmol/L貝那普利干預(yù)組比較,10 μmol/L貝那普利+AMD 3100組的EPC凋亡率升高(t早=3.551,t晚=5.333;均為P<0.05)。見(jiàn)表1。

    表1 不同濃度貝那普利對(duì)EPC凋亡率的影響(,%)

    表1 不同濃度貝那普利對(duì)EPC凋亡率的影響(,%)

    注:與對(duì)照組比較,aP<0.01;與高血壓組比較,bP<0.05;與10 μmol/L干預(yù)組比較,cP<0.05

    組別例數(shù)早期凋亡率晚期凋亡率對(duì)照組153.2±2.14.7±2.9高血壓組159.2±3.1a8.6±3.2a貝那普利干預(yù)組1 μmol/L組157.4±2.7b6.5±2.0b10 μmol/L組155.3±2.4b4.6±3.1b100 μmol/L組153.6±1.9b2.6±1.6b10 μmol/L+AMD 3100組158.9±2.9c7.9±3.0c

    2.3貝那普利對(duì)EPC氧化應(yīng)激的影響及SDF-1 CXCR4拮抗劑AMD3100在其中的作用

    與對(duì)照組比較,高血壓組樣本SOD活性明顯降低,MDA含量明顯升高(tSOD=8.258,tMDA=6.6806;P<0.01),用1、10和100 μmol/L貝那普利干預(yù)體外培養(yǎng)的高血壓患者EPC 24 h,檢測(cè)其氧化應(yīng)激的變化顯示,隨著貝那普利濃度逐漸增加,EPC的SOD活性逐漸升高,MDA含量逐漸減低,并呈濃度依賴(lài)性(FSOD=14.56,F(xiàn)MDA=7.859;均為P<0.05)。與10 μmol/L貝那普利干預(yù)組比較,10 μmol/L貝那普利+AMD3100組SOD活性降低,MDA含量升高(tSOD=1.931,tMDA=0.6407;均為P<0.05)。見(jiàn)表2。

    表2 不同濃度貝那普利對(duì)EPC的SOD、MDA影響()

    表2 不同濃度貝那普利對(duì)EPC的SOD、MDA影響()

    注:與對(duì)照組比較,aP<0.01;與高血壓組比較,bP<0.05;與10 μmol/L干預(yù)組比較,cP<0.05

    組別例數(shù)SOD(U/ml)MDA(mmol/ml)對(duì)照組1578.49±8.999.41±1.61高血壓組1540.64±9.84a16.17±2.41a貝那普利干預(yù)組1 μmol/L組1552.81±10.29b14.81±2.18b10 μmol/L組1564.74±10.84b12.71±1.93b100 μmol/L組1576.29±11.12b9.84±1.73b10 μmol/L+AMD 3100組1541.59±10.12c15.89±2.07c

    3 討論

    EPC是一類(lèi)具有特異性歸巢于損傷區(qū)域并能分化增殖為成熟內(nèi)皮細(xì)胞的干(祖)細(xì)胞。存在于外周血、骨髓和臍靜脈血中,是成熟內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞,其生物學(xué)功能主要是促進(jìn)血管新生和參與血管損傷后的內(nèi)皮修復(fù)[4]。

    Oliveras等[5]發(fā)現(xiàn),高血壓患者外周血EPC數(shù)量明顯減少,而且比EPC數(shù)量減少發(fā)生更早的是EPC功能的紊亂,功能受損與凋亡及氧化應(yīng)激有密切關(guān)系。

    MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的主要代謝產(chǎn)物,具有細(xì)胞毒性,能較好地反映細(xì)胞氧化損傷的程度;而SOD是清除體內(nèi)自由基系統(tǒng)的主要酶,SOD活力的高低間接反映機(jī)體清除氧自由基的能力;SOD活性和MDA含量可反映機(jī)體清除氧自由基的能力及細(xì)胞受自由基損傷的嚴(yán)重程度,兩者水平的變化在一定程度上可以反映過(guò)氧化損傷的程度[6]。

    本研究顯示,與對(duì)照組比較,高血壓組外周血EPC早期、晚期凋亡率明顯增加,與以往研究相一致;而與對(duì)照組比較,高血壓組SOD明顯降低,MDA明顯升高,表明高血壓患者的EPC氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)。氧化應(yīng)激通過(guò)減弱EPC抗氧化酶的表達(dá),增加氧化酶的表達(dá)而促進(jìn)EPC的凋亡進(jìn)而影響其數(shù)量與功能[7]。

    高血壓發(fā)生時(shí),血管緊張素Ⅱ通過(guò)誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)抑制EPC分化,抑制端粒酶活性,加速EPC老化,且使EPC分化成熟為完整內(nèi)皮細(xì)胞的能力減弱,會(huì)削弱其血管修復(fù)的能力[8];Imanishi等[9]指出,EPC的衰老是加速基礎(chǔ)血壓升高和惡化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

    我們應(yīng)用1、10和100 μmol/L貝那普利干預(yù)體外培養(yǎng)的高血壓患者EPC 24 h,檢測(cè)凋亡和氧化應(yīng)激的變化顯示,隨著貝那普利濃度逐漸增加,EPC早期、晚期凋亡率降低,同時(shí)SOD活性逐漸升高,MDA含量逐漸減低,即改善了氧化反應(yīng)水平,并呈濃度依賴(lài)性(均為P<0.05)。提示貝那普利可減少高血壓患者EPC的凋亡,改善EPC的氧化應(yīng)激反應(yīng)??紤]可能機(jī)制:(1)ACEI貝那普利通過(guò)促進(jìn)EPC的動(dòng)員,引起EPC數(shù)量的增多;(2)提高EPC的抗氧化酶活性及抑制脂質(zhì)過(guò)氧化物生成;(3)局部的腎素血管緊張素系統(tǒng)也可調(diào)節(jié)EPC功能[10-11]。

    SDF-1又名前B細(xì)胞刺激因子,屬于CXC族趨化因子成員,SDF-1主要在骨髓基質(zhì)細(xì)胞及骨髓內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。研究表明,在損傷血管的平滑肌也有SDF-1強(qiáng)表達(dá)。SDF-1唯一的受體CXCR4,是一個(gè)有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的G蛋白偶聯(lián)受體,在EPC表面高度表達(dá)。SDF-1/CXCR4軸參與EPC的生物學(xué)性能,如動(dòng)員、遷移和歸巢等[3]。

    本研究中,應(yīng)用SDF-1/CXCR4軸特異性拮抗劑AMD 3100觀察了其對(duì)貝那普利干預(yù)EPC的影響,發(fā)現(xiàn)與10 μmol/L貝那普利干預(yù)組比較,在加入AMD 3100共培養(yǎng)后EPC凋亡增加和氧化應(yīng)激水平明顯升高,提示貝那普利對(duì)高血壓患者EPC凋亡和氧化應(yīng)激的影響可能通過(guò)SDF-1/CXCR4軸起作用。

    綜上,EPC凋亡增加和氧化應(yīng)激導(dǎo)致內(nèi)皮修復(fù)和血管再生能力受損,加速高血壓的發(fā)生發(fā)展。貝那普利可改善EPC的凋亡和氧化應(yīng)激反應(yīng),改善血管內(nèi)皮功能。對(duì)于EPC在高血壓病理過(guò)程中作用的研究才剛剛開(kāi)始,高血壓與EPC關(guān)系的研究還需要進(jìn)一步深入,隨著兩者之間的關(guān)系逐漸明朗,將可能為高血壓的防治提供一條新的途徑。

    [1]Lu QM,Di CX,Zhang RQ,et al.Number and function of bone marrow-derivedendothelialprogenitorcellsinessential hypertension[J].China Med Herald,2013,10:20-24.(in Chinese)

    陸慶明,邸春霞,張榮慶,等.原發(fā)性高血壓條件下骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及功能的變化[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2013,10:20-24.

    [2]Zhang TX,ZhouJZ.Endothelialprogenitorcellsand hypertension[J].Modern Med J,2008,36:141-144.(in Chinese)

    張鐵須,周建中.內(nèi)皮祖細(xì)胞與高血壓?。跩].現(xiàn)代醫(yī)學(xué),2008,36:141-144.

    [3]Kang QL,Lu LS,Chen J.Effects of SDF-1/CXCR4 axis on biological characteristics of bone marrow derived endothelial progenitor cells in rat in vitro[J].Anat Res,2011,33:413-416.(in Chinese)

    康慶林,陸聯(lián)松,陳佳.SDF-1/CXCR4生物軸活化誘導(dǎo)對(duì)鼠骨髓源性?xún)?nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)性能的影響[J].解剖學(xué)研究,2011,33:413-416.

    [4]Yang M,Xiao ZL,Lyu QS,et al.Effect of polyI:C on quantity and activity of endothelial progenitor cells from human umbilical cord blood[J].Chin J Arteriosclerosis,2011,19:668-673.(in Chinese)

    楊梅,肖智林,呂青山,等.PolyI:C對(duì)人肚血內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量及功能的影響[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志,2011,19:668-673.

    [5]Oliveras A,Soler MJ,Martinez-Estrada OM,et al.Endothelial progenitor cells are reduced in refractory hypertension[J].J Hum Hypertens,2008,22:183-190.

    [6]MA J,Ji KT,Guan XQ,et al.Protective effects of gink golide B on oxidative damage of EPCs and study its possible mechanism[J].J Wenzhou Med Coll,2013,43:714-718.(in Chinese)

    馬駿,季亢挺,官學(xué)強(qiáng),等.銀杏內(nèi)酯B對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制[J].溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2013,43:714-718.

    [7]Chen SC,Song GY.Research progress of endothelial progenitor cells and oxidative stress[J].J Clin Rehab Tiss Engin Res,2011,15:1119-1122.(in Chinese)

    陳樹(shù)春,宋光耀.內(nèi)皮細(xì)胞與氧化應(yīng)激研究進(jìn)展[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2011,15:1119-1122.

    [8]Liu X,Zhang GX,Xia WH,et al.Effect of hypertension on the in vivo reendothelialization capacity of endothelial progenitor cells[J].Mol Cardiol China,2011,8:23-25.(in Chinese)

    劉星,張高星,夏文豪,等.高血壓對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞再生能力的影響[J].中國(guó)分子心臟病學(xué)雜志,2011,8:23-25.

    [9]Imanishi T,Moriwaki C,Hano T,et al.Endothelial progenitor cell senescence is accelerated in both experimental hypertensive rats and patients with essential hypertension[J].J Hypertens,2005,23:1831-1837.

    [10]Bahlmann FH,de Groot K,Mueller O,et al.Stimulation of endothelial progenitor cells:a new putative therapeutic effect of angiotensinⅡreceptor antagonists[J].Hypertension,2005,45:526-529.

    [11]Dernbach E,Urbich C,Brandes RP,et al.Antioxidative stressassociated genes in circulating progenitor cells:evidence for enhanced resistance against oxidative stress[J].Blood,2004,104:3591-3597.

    Effects of Benner Pury on endothelial progenitor cells apoptosis and oxidative stress in patients with hypertension

    Li Yongdong1,2,Ge Zhiping1,Wen Huihua1,Liu Dan1,Alatan Gaole2.1 Department of Cardiology,the Third Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University,Baotou 014010,China;2 College of Life Science Hohhot,Inner Mongolia University

    Li Yongdong,Email:lyd20070501@163.com

    Objective To investigate the effection of Benner Pury on endothelial progenitor cells apoptosis and oxidative stress in vitro hypertension.Methods The patients who were diagnosed as hypertension grade 1,according to the standard″Guidelines for Prevention and Treatment of Hypertension″. The control group were healthy subjects matched with study group in age and gender.Mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation,and fluorescence chemical staining in acLDL-DiI,F(xiàn)ITC-lectin,observed under confocal laser scanning microscope,staining positive cells were considered as the differentiation of endothelial progenitor cell(EPC).EPC cultivated for 5 days were used for study.The cells isolated from each hypertensive were divided into five copies in parallel,and according to the different stimulation,the cells were divided into five groups:hypertension group,different concentrations of Benner Pury(1 μmol/L,10 μmol/L,100 μmol/L)intervention in hypertension group,and Benner Pury(10μmol/L)+stromal cell derived factor-1(SDF-1)/its receptor chemokine 4(CXCR4)antagonist AMD 3100 pretreatment group.EPC cultivated for 24 h under the different stimulation were used for study EPC apoptosis detection:Annexin-V/PI method;oxidative stress detection:the activity of superoxide dismutase(SOD),xanthine-oxidation method,the content of Malonaldehyde(MDA)malondialdehyde thiobarbituric acid method.Results (1)Compared with the control group,peripheral blood EPS apoptosis rate was obviously increased in hypertension group,oxidative stress was significantly increased too(tearly=6.6334,tlate=3.812;both P<0.01).(2)Detection of the apoptosis and oxidative stress level display,different concentrations of Benner Pury 1 μmol/L,10 μmol/L,100 μmol/L intervention in vitro hypertensive patients EPC for 24 h,with the concentrations of Benner Pury gradually increased,the apoptosis rate of EPC was reduced(Fearly=17.39,F(xiàn)late=51.65;both P<0.05),oxidative stress response also come down in a concentration dependent manner(FSOD=14.56,F(xiàn)MDA=7.859;both P<0.05).Compared with 10 μmol/L pretreatment group,10 μmol/L+group AMD 3100,EPC apoptosis rate increased(tearly=3.551,tlate= 5.333,both P<0.05),oxidative stress response raised up(tSOD=1.931,tMDA=0.6407,both P<0.05). Conclusions BennerPury significantly improved the apoptosis of EPC and oxidative stress response in vitro hypertension,and the function may be through the SDF-1/CXCR4 axis.

    Hypertension; Endothelial progenitor cells; Apoptosis; Oxidative stress;Antagonist AMD 3100

    2014-10-10)

    (本文編輯:譚瀟)

    10.3969/j.issn.1007-5410.2015.01.012

    內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2011MS1150)

    014010包頭,內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院心內(nèi)科(李永東、葛智平、溫慧華、劉丹);內(nèi)蒙古大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院(李永東、阿拉坦高勒)

    李永東,電子信箱:lyd20070501@163.com

    This workwassupportedbyagrantfrom theNaturalScienceFundProjectofInnerMongolia(No.2011MS1150)

    猜你喜歡
    祖細(xì)胞那普利內(nèi)皮
    貝那普利聯(lián)合美托落爾治療快速房顫的療效觀察
    特拉唑嗪聯(lián)合貝那普利治療腎性高血壓的臨床觀察
    Wnt3a基因沉默對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖的影響
    內(nèi)皮祖細(xì)胞在缺血性腦卒中診治中的研究進(jìn)展
    反相高效液相色譜法測(cè)定鹽酸貝那普利的血藥濃度
    益腎方聯(lián)合貝那普利治療早期糖尿病腎病50例
    懸滴和懸浮法相結(jié)合培養(yǎng)胰腺祖細(xì)胞
    新鮮生雞蛋殼內(nèi)皮貼敷治療小面積燙傷
    微環(huán)境在體外大量擴(kuò)增晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞中的作用
    偷拍熟女少妇极品色| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲五月天丁香| 久久久久久伊人网av| 嫩草影视91久久| 在线a可以看的网站| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 午夜福利在线观看吧| 黄色视频,在线免费观看| 久久久成人免费电影| 久久精品人妻少妇| 91狼人影院| 别揉我奶头 嗯啊视频| 97热精品久久久久久| 色哟哟·www| 精品国产三级普通话版| 久久香蕉精品热| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 国产美女午夜福利| а√天堂www在线а√下载| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 特级一级黄色大片| 91麻豆av在线| 51国产日韩欧美| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲精品国产成人久久av| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 日本-黄色视频高清免费观看| netflix在线观看网站| 精品一区二区三区av网在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久9热在线精品视频| 亚洲黑人精品在线| а√天堂www在线а√下载| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲真实伦在线观看| 黄色配什么色好看| 男女那种视频在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 嫁个100分男人电影在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 日韩中字成人| 欧美+日韩+精品| 欧美中文日本在线观看视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| av在线亚洲专区| av女优亚洲男人天堂| 国产精品久久视频播放| 综合色av麻豆| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久精品人妻少妇| 三级国产精品欧美在线观看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 免费一级毛片在线播放高清视频| 欧美高清性xxxxhd video| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 在线免费十八禁| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲精品国产成人久久av| 久久久久久久久久黄片| 搡老岳熟女国产| 此物有八面人人有两片| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲 国产 在线| 成年版毛片免费区| 联通29元200g的流量卡| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲无线在线观看| 亚洲综合色惰| 久久亚洲精品不卡| av中文乱码字幕在线| 日本黄色视频三级网站网址| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 色尼玛亚洲综合影院| aaaaa片日本免费| 免费观看的影片在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 最近中文字幕高清免费大全6 | 熟女人妻精品中文字幕| 国产亚洲精品久久久com| 日韩av在线大香蕉| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产精品一及| av在线观看视频网站免费| 一区二区三区四区激情视频 | xxxwww97欧美| 国产精品一区www在线观看 | 欧美最新免费一区二区三区| 赤兔流量卡办理| 色综合婷婷激情| 日韩大尺度精品在线看网址| 真实男女啪啪啪动态图| av黄色大香蕉| 亚洲图色成人| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 一进一出抽搐gif免费好疼| 91狼人影院| 内射极品少妇av片p| 中文资源天堂在线| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 不卡视频在线观看欧美| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久久久久久久久成人| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲电影在线观看av| 国产熟女欧美一区二区| 日本免费一区二区三区高清不卡| 波多野结衣高清无吗| av天堂在线播放| 国产真实伦视频高清在线观看 | 无人区码免费观看不卡| 国产视频内射| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 日韩一区二区视频免费看| 一级黄色大片毛片| av.在线天堂| 国产一区二区三区视频了| 一区二区三区激情视频| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲成人精品中文字幕电影| 美女大奶头视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产成年人精品一区二区| 亚洲精品国产成人久久av| 国产精品精品国产色婷婷| 久久久久久久精品吃奶| 久久亚洲真实| 毛片女人毛片| 在线免费十八禁| 精品人妻视频免费看| 亚洲成人久久性| 嫩草影视91久久| 亚洲美女黄片视频| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 色吧在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 日本免费a在线| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 69人妻影院| 俺也久久电影网| 男插女下体视频免费在线播放| 日本 欧美在线| 免费观看的影片在线观看| 中文资源天堂在线| 女人被狂操c到高潮| 亚洲国产色片| 亚洲国产色片| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 午夜久久久久精精品| 99热这里只有精品一区| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产久久久一区二区三区| 在线国产一区二区在线| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 一级黄色大片毛片| 日韩欧美 国产精品| 波多野结衣高清无吗| 日韩精品有码人妻一区| 香蕉av资源在线| 亚洲av免费在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 露出奶头的视频| 久久精品综合一区二区三区| 最近中文字幕高清免费大全6 | 日本免费a在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产黄色小视频在线观看| 日本 欧美在线| 国产淫片久久久久久久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 能在线免费观看的黄片| 久久午夜亚洲精品久久| 日韩亚洲欧美综合| 国内精品宾馆在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美成人免费av一区二区三区| 啦啦啦啦在线视频资源| 99久久成人亚洲精品观看| 伦理电影大哥的女人| 午夜福利高清视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 久久精品综合一区二区三区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲无线在线观看| 日韩av在线大香蕉| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 能在线免费观看的黄片| 日本三级黄在线观看| 一本精品99久久精品77| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 色噜噜av男人的天堂激情| 久久精品国产清高在天天线| 国产亚洲91精品色在线| 麻豆国产97在线/欧美| 天美传媒精品一区二区| 91久久精品国产一区二区成人| 性色avwww在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲第一电影网av| 窝窝影院91人妻| 中文字幕av在线有码专区| 内射极品少妇av片p| 国内精品一区二区在线观看| 欧美区成人在线视频| 午夜福利高清视频| 精华霜和精华液先用哪个| 我的女老师完整版在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 中文字幕熟女人妻在线| 最近中文字幕高清免费大全6 | 精品人妻熟女av久视频| 成人二区视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲自偷自拍三级| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产黄色小视频在线观看| 久久久久国内视频| 中文资源天堂在线| 精品国内亚洲2022精品成人| 伦精品一区二区三区| 黄色日韩在线| 国产高潮美女av| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久久久久久久大av| 久久久久久久午夜电影| 欧美日韩乱码在线| 一本久久中文字幕| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲avbb在线观看| 九色国产91popny在线| 在线播放无遮挡| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲美女视频黄频| 欧美性猛交黑人性爽| 中国美女看黄片| xxxwww97欧美| 国产精品一区二区免费欧美| 尾随美女入室| 动漫黄色视频在线观看| 日韩中字成人| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产精品久久久久久av不卡| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产久久久一区二区三区| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 色吧在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久九九热精品免费| 亚洲人成网站在线播| 中文字幕高清在线视频| 欧美三级亚洲精品| 日本色播在线视频| 长腿黑丝高跟| 国产精品久久久久久av不卡| 免费在线观看成人毛片| 国产综合懂色| 老司机深夜福利视频在线观看| 不卡一级毛片| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 五月伊人婷婷丁香| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品国产高清国产av| 在线观看免费视频日本深夜| 中文亚洲av片在线观看爽| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲美女黄片视频| 欧美bdsm另类| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久久久久久久久黄片| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品免费一区二区三区在线| 免费大片18禁| 久久久久国内视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 69av精品久久久久久| 亚洲五月天丁香| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 99riav亚洲国产免费| 成人无遮挡网站| 久久午夜亚洲精品久久| 久99久视频精品免费| 精品久久久久久久末码| 午夜老司机福利剧场| 国模一区二区三区四区视频| 最后的刺客免费高清国语| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 麻豆国产av国片精品| 三级毛片av免费| 午夜激情欧美在线| 99久久精品国产国产毛片| 一本一本综合久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 校园春色视频在线观看| 99热这里只有是精品50| 亚洲无线观看免费| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产精品久久久久久精品电影| 日本精品一区二区三区蜜桃| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲最大成人手机在线| aaaaa片日本免费| 男女那种视频在线观看| 成人精品一区二区免费| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美日本亚洲视频在线播放| 日本 av在线| 亚州av有码| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 精品久久久久久久末码| 亚洲成人久久爱视频| 99热精品在线国产| 国产精品一区二区三区四区久久| 日韩欧美免费精品| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲avbb在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 在线天堂最新版资源| 国产一级毛片七仙女欲春2| 久久热精品热| 热99在线观看视频| 亚洲18禁久久av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 婷婷亚洲欧美| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美日韩精品成人综合77777| 婷婷六月久久综合丁香| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 高清毛片免费观看视频网站| 精品人妻熟女av久视频| 如何舔出高潮| 又爽又黄a免费视频| 看黄色毛片网站| 黄色一级大片看看| 22中文网久久字幕| 丰满的人妻完整版| 听说在线观看完整版免费高清| 午夜福利视频1000在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 久久久国产成人精品二区| 国内精品久久久久精免费| h日本视频在线播放| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲av美国av| 亚洲国产精品成人综合色| 国产成人av教育| 亚洲第一电影网av| av天堂中文字幕网| 少妇人妻一区二区三区视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲成av人片在线播放无| 在线天堂最新版资源| 欧美日韩精品成人综合77777| 成年女人永久免费观看视频| 精品免费久久久久久久清纯| 国产真实乱freesex| 成熟少妇高潮喷水视频| 欧美潮喷喷水| av天堂中文字幕网| 亚洲av中文av极速乱 | 伊人久久精品亚洲午夜| 身体一侧抽搐| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 亚洲精华国产精华精| 亚洲av免费高清在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 国产日本99.免费观看| 国产在线男女| 欧美三级亚洲精品| 国产精品一及| 69av精品久久久久久| 午夜精品久久久久久毛片777| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 尾随美女入室| 婷婷亚洲欧美| 亚洲国产精品sss在线观看| av在线老鸭窝| 亚洲七黄色美女视频| 国产淫片久久久久久久久| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲三级黄色毛片| 日韩精品中文字幕看吧| 欧美+亚洲+日韩+国产| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 乱码一卡2卡4卡精品| 又爽又黄a免费视频| 午夜久久久久精精品| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲在线自拍视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 免费看日本二区| 亚洲av不卡在线观看| 欧美3d第一页| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 很黄的视频免费| 欧美3d第一页| 欧美高清性xxxxhd video| 国产伦精品一区二区三区四那| 国内精品美女久久久久久| 亚洲av.av天堂| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 麻豆av噜噜一区二区三区| 免费黄网站久久成人精品| 在线观看舔阴道视频| 男人舔奶头视频| 哪里可以看免费的av片| 一本久久中文字幕| 最近最新中文字幕大全电影3| 欧美区成人在线视频| 日本 av在线| 久久亚洲真实| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 美女黄网站色视频| 99riav亚洲国产免费| 亚洲图色成人| 99久久精品一区二区三区| 又黄又爽又免费观看的视频| 搡老岳熟女国产| 久久久久久久精品吃奶| 欧美丝袜亚洲另类 | 黄色欧美视频在线观看| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲美女视频黄频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 成年女人看的毛片在线观看| 国产精品亚洲美女久久久| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产成年人精品一区二区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 日本与韩国留学比较| 我要看日韩黄色一级片| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 美女黄网站色视频| videossex国产| 亚洲图色成人| 欧美最新免费一区二区三区| 日韩人妻高清精品专区| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美日本视频| 亚洲自拍偷在线| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲精品国产成人久久av| 免费观看的影片在线观看| 波野结衣二区三区在线| 男女下面进入的视频免费午夜| 欧美zozozo另类| 亚洲av不卡在线观看| 白带黄色成豆腐渣| 国产伦精品一区二区三区视频9| 嫩草影院入口| 亚洲天堂国产精品一区在线| 永久网站在线| 国产精品一及| 男人的好看免费观看在线视频| 日韩欧美在线二视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 在线免费观看的www视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 九色国产91popny在线| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品,欧美在线| 在现免费观看毛片| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲18禁久久av| 69人妻影院| 又爽又黄a免费视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 波多野结衣高清作品| 校园人妻丝袜中文字幕| 内地一区二区视频在线| 在线观看免费视频日本深夜| 国产私拍福利视频在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久久国产成人免费| 日韩欧美在线乱码| 久久精品国产自在天天线| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品日产1卡2卡| 99视频精品全部免费 在线| 国产高清视频在线观看网站| 午夜精品久久久久久毛片777| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久精品国产自在天天线| 男女视频在线观看网站免费| 久久久久久久久久久丰满 | 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美高清成人免费视频www| 搡老岳熟女国产| 亚洲va在线va天堂va国产| 中文字幕av在线有码专区| 搡老岳熟女国产| 久久久久久久精品吃奶| 日韩 亚洲 欧美在线| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产91精品成人一区二区三区| 久久久国产成人免费| 日本熟妇午夜| 99热网站在线观看| 国产美女午夜福利| 伦精品一区二区三区| 久久亚洲精品不卡| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲最大成人手机在线| 国产大屁股一区二区在线视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 一级毛片久久久久久久久女| 少妇人妻精品综合一区二区 | 在线观看66精品国产| 天堂√8在线中文| 老司机午夜福利在线观看视频| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲av成人av| 精品无人区乱码1区二区| 看十八女毛片水多多多| 国产男人的电影天堂91| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲av.av天堂| 可以在线观看的亚洲视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 长腿黑丝高跟| 亚洲欧美精品综合久久99| 午夜福利高清视频| 69av精品久久久久久| 久久久精品大字幕| 日韩中文字幕欧美一区二区| 淫秽高清视频在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 国产高潮美女av| 夜夜爽天天搞| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 少妇丰满av| 禁无遮挡网站| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 热99在线观看视频| 国产精品一区www在线观看 | 精品一区二区三区视频在线观看免费| 综合色av麻豆| 欧美国产日韩亚洲一区| av中文乱码字幕在线| 亚洲七黄色美女视频| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲成人免费电影在线观看| 免费大片18禁| 淫妇啪啪啪对白视频| 午夜免费成人在线视频| 中国美女看黄片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 久久久久久久久久黄片| 国产单亲对白刺激| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 中文资源天堂在线| 国产精品av视频在线免费观看| 精品欧美国产一区二区三| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲av一区综合| 久久久久免费精品人妻一区二区| 黄色视频,在线免费观看| 在线国产一区二区在线| 久久精品综合一区二区三区| 18+在线观看网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| 老司机深夜福利视频在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| a在线观看视频网站| 国产极品精品免费视频能看的| 久久午夜亚洲精品久久| 午夜福利高清视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产私拍福利视频在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 成人综合一区亚洲|