冰凍切片的制作體會

顧科峰 張憲 王新 湯寅

摘要：目的 ：探討在冰凍切片過程中針對不同組織樣本采取的相應(yīng)對策，以達(dá)到最佳的切片效果。方法： 回顧分析我院自2011年以來148例術(shù)中快速冰凍切片的制作方法。針對不同的組織樣本，選擇的冰凍溫度與時間不同，包埋與切片的也方法不同。結(jié)果： 切片厚薄均勻完整，無皺褶，核染色清晰，細(xì)胞形態(tài)完整，核漿對比鮮明。結(jié)論： 冰凍溫度與時間、組織包埋、切片方法等是制作高質(zhì)量冰凍切片的關(guān)鍵。

關(guān)鍵詞：冰凍切片；樣本；制作；效果

術(shù)中快速冰凍切片檢查是病理科的一項(xiàng)常規(guī)工作，但同時又是一項(xiàng)非常重要和高風(fēng)險的檢查。它是在低溫情況下將新鮮組織冷凍到一定硬度，然后再進(jìn)行切片的一種方法【1】。它能對臨床治療提供積極的指導(dǎo)意義，為手術(shù)醫(yī)生決定手術(shù)方式和范圍提供依據(jù)。而高質(zhì)量的冰凍切片又是這項(xiàng)檢查的首要條件。所以，能否制作一張優(yōu)質(zhì)的冰凍切片就顯得尤為重要。我科自2011年引進(jìn)英國珊頓冰凍切片機(jī)以來，我共完成制作冰凍切片148例。

1 材料與方法

1.1材料

臨床送檢的各類手術(shù)中新鮮組織，不加任何固定液，直接送至病理科。其中甲狀腺25例、子宮腫瘤24例、卵巢腫瘤22例、乳腺腫瘤51例、肺腫瘤4例、胃腸道腫瘤5例、其它17例。

1.2方法

采用手術(shù)切除后新鮮標(biāo)本，取一塊1.5*1.5*0.3cm左右【2】的有病變組織塊，去除多余的脂肪組織、鈣化物、壞死組織和骨組織。取材速度要快，避免取材器械和取材臺上有水接觸，用干紗布把組織上的血液和液體吸干，避免冰凍切片出現(xiàn)過多的冰晶現(xiàn)象【3】。然后直接放在冷凍托盤上，滴加OCT（聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物）或普通膠水。根據(jù)要切片的組織類型設(shè)定冰凍溫度和冰凍時間。切片厚度以5微米為佳，然后迅速粘片，投入AF液（40%甲醛與95%酒精1：4的混合液）中固定1min左右。蘇木素染色，水洗，分化，返藍(lán)，伊紅，梯度酒精（從低濃度到高濃度）脫水，透明，封固。

2. 結(jié)果

切片質(zhì)量較好，厚薄均勻完整，無皺褶，核染色清晰，細(xì)胞形態(tài)完整，核漿對比明顯，符合冰凍診斷要求。

3 討論

隨著現(xiàn)代臨床外科技術(shù)的突飛猛進(jìn)對術(shù)中快速冰凍切片的要求越來越高，病例也越來越多，送檢的組織也是千差萬別?？焖佟⒏哔|(zhì)量的冰凍切片是確保術(shù)中診斷科學(xué)性和可靠性的重要保證【4】。這就要求病理科的醫(yī)生和技術(shù)員具有過硬的技術(shù)，能在短時間內(nèi)拿出令人滿意的結(jié)果。因此我總結(jié)了一些在平時制片過程中對于溫度與時間、包埋、切片的經(jīng)驗(yàn)和體會，與大家共鑒。

3.1溫度與時間

冰凍切片機(jī)的箱體應(yīng)24h處于待機(jī)狀態(tài)，我們平時一般設(shè)定在-25℃。溫度過低時，組織變?yōu)樗执?，切片時容易破碎甚至粉末狀。溫度過高時，組織呈粘稠狀，切片易卷曲甚至切不成片。因根據(jù)所需冰凍組織類型分別對待。作者經(jīng)驗(yàn)甲狀腺、淋巴結(jié)、肝、脾、腎等最佳溫度控制在-20℃左右，冷凍1～2min。子宮、乳腺、胃腸等溫度控制在-25℃左右，冷凍2min左右。含脂肪多的組織、軟組織等溫度控制在-30℃左右，冷凍3min以上。當(dāng)然機(jī)器的新舊和環(huán)境溫度的變化等也會帶來一定的影響，應(yīng)酌情對待。

3.2包埋

選擇合適的包埋劑，現(xiàn)在常用的包埋劑是OCT，但也有單位用的是普通的膠水，作者單位使用膠水包埋效果很好，而且有資料也報道膠水與OCT有相識的物理特性【5】，可以替代OCT，節(jié)省成本。這就要求在包埋時要先冷凍膠水，等膠水快凝固時再加入組織塊，可以防止組織因吸水而使細(xì)胞中有冰晶出現(xiàn)。對于小組織，我們要求先用適量包埋劑在標(biāo)本托上做一個膠水的底托，然后把小組織根據(jù)切面放好，再滴加少量包埋劑在組織上，迅速冷凍。對于像囊壁樣的長條組織，可以像卷紙一樣，把組織盤起來，垂直放在標(biāo)本托上，使囊壁的層次分明，利于切片和鏡檢。包埋時要根據(jù)組織的大小，選擇大、中、小合適的標(biāo)本托，組織塊要包埋平整，盡量放在冷凍托的中央位置?？傊?，包埋的重要性和技術(shù)要領(lǐng)是每個技術(shù)員都必須心領(lǐng)神會的。

3.3切片

當(dāng)冷凍包埋劑發(fā)白變硬后，就可以開始切片了，更換鋒利的刀片，清潔防卷板和調(diào)整防卷板與切片刀的角度（作者的經(jīng)驗(yàn)一般為5度），防止切片卷縮。切片時用力均勻，厚度5微米，過薄易造成組織皺縮和鏡下核細(xì)胞碎裂【6】，過厚容易造成組織掉片。如遇到帶有脂肪組織的或軟組織等難以切片的，可以用冷凍錘再次冷凍組織延長冷凍時間或增加冷凍切片厚度到6-8微米。盡量修面暴露組織至最大面，有包膜的一定要切完整，小結(jié)節(jié)或重要病變部位要切到位，必要時可多切幾個面【7】，防止因?yàn)闆]切到位而發(fā)生漏診，也可以多粘幾張玻片以便挑選備用。粘片時玻片要干凈，防止掉片，容易掉片的組織可以使用涂膠片，動作要快，避免因動作慢而使切片有皺褶，粘不上片等情況發(fā)生。切片時還要注意組織的包埋方向，切片方向由易到難，由粘膜面向漿膜面，必要時可以轉(zhuǎn)動冷凍的標(biāo)本托，以利于制片。對于冷凍時間過長而使組織變脆的，可以用帶乳膠手套的手指輕觸組織，使其稍稍回溫。

中華醫(yī)學(xué)會中規(guī)定完成冰凍HE染色切片制備通常時間為20～25min【8】，在如此短的時間內(nèi)拿出一張完美的冰凍切片，不僅要求技術(shù)員有精湛的技術(shù)，還要有高度的責(zé)任心和精益求精的態(tài)度。細(xì)節(jié)決定成敗，多注意制片過程中的各個環(huán)節(jié)和不同組織成分的特性。理論聯(lián)系實(shí)際，認(rèn)真仔細(xì)的解決遇到的各種問題，在不斷摸索中總結(jié)和改進(jìn)，才能保證冰凍切片的完整、優(yōu)良。

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