HDPR1基因在骨髓增生異常綜合征患者中甲基化水平分析

梅琛

摘要：在本研究中我們通過(guò)甲基化特異性PCR（MSP）方法：檢測(cè)Wnt信號(hào)通路拮抗基因HDPR1在53例骨髓增生異常綜合征（MDS）患者中的甲基化情況，并分析其甲基化與患者臨床指標(biāo)及預(yù)后之間的關(guān)系，結(jié)果：顯示HDPR1的甲基化頻率為34.0%，同時(shí)發(fā)現(xiàn)在骨髓原始細(xì)胞比例≥5%的患者中HDPR1甲基化陽(yáng)性率明顯增高（P=0.019），并在MDS分型之間存在差異性（P=0.019），與WPSS預(yù)后評(píng)分有顯著相關(guān)性（P=0.037），此外HDPR1甲基化組的總體生存時(shí)間要短于非甲基化組（P=0.017）。表明MDS患者中存在HDPR1基因一定程度的甲基化，并在MDS疾病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。

關(guān)鍵詞：骨髓增生異常綜合征；HDPR1；甲基化

骨髓增生異常綜合征（MDS）是起源于造血干/祖細(xì)胞的一組高度異質(zhì)性克隆性疾病[1]。有研究發(fā)現(xiàn)在MDS中存在抑癌基因的甲基化，并與MDS的轉(zhuǎn)白、預(yù)后的有關(guān)[2， 3]。Wnt信號(hào)通路是一個(gè)對(duì)細(xì)胞的分化和增殖起重要調(diào)節(jié)作用的途徑，而人類(lèi)Dapper因子1（HDPR1）是爪蟾屬中Dapper（Dpr）蛋白的人類(lèi)同源體，可以抑制Wnt信號(hào)通路的傳遞[4]。目前研究表明Wnt拮抗基因的甲基化改變和Wnt信號(hào)通路的異常活化參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[5]。本文將對(duì)HDPR1基因在MDS患者中的甲基化情況進(jìn)行研究，探討其甲基化改變與患者臨床指標(biāo)及總體生存之間的關(guān)系。

1.材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2008年至2010年在本院診斷為骨髓增生異常綜合征的患者53例和非腫瘤對(duì)照19例。其中男性 31例，女性 22例，中位年齡52歲。所有患者均采取抗凝骨髓液送檢，此外加入了MDS急變細(xì)胞株（SKM-1）的檢測(cè)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

甲基化特異性PCR（MSP）：基因組DNA抽提及MSP方法見(jiàn)文獻(xiàn)[6]，甲基化引物序列及反應(yīng)條件見(jiàn)參考文獻(xiàn)[7]。擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察。

1.3 數(shù)據(jù)分析和處理：

所有統(tǒng)計(jì)分析均采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，HDPR1甲基化與MDS患者臨床指標(biāo)的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)?？傮w生存（OS）時(shí)間計(jì)算采用Kaplan-Meier方法，比較采用Log-Rank法。P <0.05定義為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 HDPR1基因甲基化與臨床指標(biāo)之間的關(guān)系

在53例MDS患者中HDPR1基因甲基化陽(yáng)性18例（34.0%），甲基化PCR結(jié)果見(jiàn)圖1。我們將MDS-RA和MDS-RCMD作為低風(fēng)險(xiǎn)組，MDS-RAEB 1型和MDS-RAEB 2型作為高風(fēng)險(xiǎn)組進(jìn)行比較；根據(jù)WPSS評(píng)分將極低危組、低危組和中危組作為低風(fēng)險(xiǎn)組，高危組和極高危組作為高風(fēng)險(xiǎn)組進(jìn)行比較。統(tǒng)計(jì)結(jié)果分析表明：在骨髓原始細(xì)胞比例≥5%的患者中HDPR1甲基化陽(yáng)性率明顯高于骨髓原始細(xì)胞比例<5%的患者（P=0.019）；而且HDPR1甲基化陽(yáng)性率還與MDS分型和WPSS預(yù)后評(píng)分有顯著相關(guān)性（P=0.019；P=0.037），此外HDPR1基因在平均紅細(xì)胞容積（MCV）<100fl的患者中甲基化頻率明顯高于平均紅細(xì)胞容積（MCV）≥100fl的患者（50.0%和27.8%，P=0.016）；但與其他臨床指標(biāo)無(wú)明顯相關(guān)性，詳見(jiàn)表1。

2.2. HDPR1基因甲基化與MDS預(yù)后的關(guān)系

比較HDPR1甲基化情況與MDS患者的總體生存時(shí)間發(fā)現(xiàn)，甲基化陽(yáng)性組為20.5個(gè)月，陰性組為46.3個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.017），見(jiàn)圖2。

3.討論

研究表明Wnt信號(hào)通路在干細(xì)胞的自我更新和增殖中發(fā)揮重要作用，因此它的異常激活與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展存在關(guān)系[8]。同時(shí)Wnt信號(hào)通路在調(diào)節(jié)造血干細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖和分化中也發(fā)揮著重要作用，有研究表明在血液腫瘤中引起Wnt信號(hào)通路異常激活的主要機(jī)制之一是Wnt拮抗基因的甲基化[9]。

HDPR1基因是爪蟾屬Dapper蛋白的同系物，其基因定位于人類(lèi)14染色體，編碼由799個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)[10]。HDPR1是新近發(fā)現(xiàn)的Wnt信號(hào)通路拮抗基因，在Tai-on Yan等[7]研究中發(fā)現(xiàn)肝癌組織中存在HDPR1表達(dá)下調(diào)，并與β-catenin積聚存在相關(guān)性，進(jìn)行甲基化分析后發(fā)現(xiàn)存在HDPR1啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化，提示HDPR1甲基化是Wnt信號(hào)通路異常激活的主要機(jī)制。而在血液系統(tǒng)腫瘤中，也有HDPR1基因甲基化與Wnt信號(hào)通路異?；罨膱?bào)道[9]。本研究結(jié)果顯示，HDPR1基因在34%的MDS患者中存在甲基化，在骨髓原始細(xì)胞比例增高的患者中甲基化陽(yáng)性率明顯升高，并在MDS分型之間存在差異性，表明HDPR1基因可能在MDS疾病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。同時(shí)HDPR1基因在WPSS評(píng)分高風(fēng)險(xiǎn)組中的甲基化陽(yáng)性率明顯高于低風(fēng)險(xiǎn)組，且甲基化組患者的中位生存時(shí)間要明顯短于非甲基化組患者，說(shuō)明HDPR1甲基化提示MDS患者可能有不良預(yù)后。此外HDPR1基因在MCV<100fl的患者HDPR1基因甲基化頻率明顯高于MCV≥100fl的患者，結(jié)合Wang[11]報(bào)道提示MCV<100fl是MDS患者的獨(dú)立不良預(yù)后因素，表明HDPR1基因甲基化可能參與了MDS疾病的預(yù)后分層。

綜上所述，HDPR1基因在MDS患者中存在一定的甲基化頻率，可能在MDS疾病進(jìn)展和預(yù)后分層中發(fā)揮重要作用。

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