HPLC法測定乳泉顆粒中阿魏酸含量及不同廠家產品含量的研究

段廣勛 王軍花

摘要：目的： 建立乳泉顆粒中阿魏酸含量測定方法。方法： 采用lichrospher C18柱（5μm，4.6mm×250mm），流動相為甲醇-0.085%磷酸（28：72）；流速為1.0mL/min；檢測波長為321nm。結果： 阿魏酸在1.265×10-5～2.024×10-4mg范圍內呈良好的線性關系，r=0.9993，平均樣品加樣回收率為96.97%。結論： 該方法簡便可靠，重復性好，可用于乳泉顆粒的質量控制。

關鍵詞：乳泉顆粒；高效液相色譜；阿魏酸；含量測定

乳泉顆粒是婦科用中成藥，其處方由王不留行、穿山甲（炙）、天花粉、當歸、漏蘆、甘草（炙）組成，具有通經、活血、下乳的功效，適用中醫(yī)肝郁氣滯證型產后缺乳患者的治療[1-2]。其現(xiàn)行質量標準為衛(wèi)生部《部頒標準》1993版，質量控制項僅有理化鑒別，雖有乳泉顆粒中阿魏酸含量測定的報道[3-4]，但尚未收錄標準，本文為了更好地控制藥品質量[5]，采用HPLC法對乳泉顆粒中阿魏酸含量測定方法進行研究并對不同廠家產品含量進行了測定。

1儀器與材料

1.1儀器 Agilent 1260（美國安捷倫）；電子分析天平（梅特勒一托利多儀器上海有限公司，型號：XP6）；

1.2材料和試劑 乳泉顆粒（南京中山制藥有限公司，批號：121201、121202、121203、130601、130602、130603；上海悅盛蕪湖藥業(yè)有限公司，批號：120704、130101、130102；河南天方藥業(yè)中藥有限公司，批號：130401、130402、130403；遼寧康博士制藥有限公司，批號：20130302、20130303、20130304）。陰性樣品（自制），阿魏酸對照品（中國藥品生物制品鑒定所，批號110773-200611），甲醇（HPLC），其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：lichrospher C18（5μm，4.6mm×250mm，江蘇漢邦）；流動相：甲醇-0.085%磷酸（28：72）；流速：1.0mL/min；檢測波長：321nm；柱溫35℃；進樣量10μL。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應不低于3500。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸對照品2.53mg，置100mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，作對照品儲備液（避光操作）。

2.3供試品溶液的制備[3-4] 取本品15g，碾細，取2g，精密稱定，加稀鹽酸2.5mL潤濕，加水30mL，使溶解，用乙醚-乙醇（27：3）混合溶液萃取4次，每次20mL，合并萃取液，用無水硫酸鈉脫水，60℃蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5mL棕色容量瓶中，定容至刻度，即得（避光操作）。

2.4專屬性試驗 取缺當歸陰性樣品，照2.3項下方法得陰性對照溶液。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL，照2.1項下色譜條件，注入液相色譜儀測定。結果，見圖1。

該色譜條件下，色譜峰分離較好。陰性對照色譜圖中在待測成分保留時間處無雜質峰出現(xiàn)，表明本法具有良好的專屬性。

2.5線性關系考察 精密吸取對照品儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0mL，分別置10mL容量瓶中，加甲醇定容，依次稀釋配制成1.265、2.53、5.06、7.59、10.12、12.65、20.24μg/mL的溶液，精密吸取10μL，照2.1項下色譜條件，注入液相色譜儀測定。以峰面積A為縱坐標，阿魏酸含量C為橫坐標，作標準曲線，線性方程為A=58.882C-14.422，r=0.9993。結果表明，阿魏酸在1.265×10-5～2.024×10-4mg間呈良好的線性關系。結果見表1。

表1 線性關系考察中測定結果

2.6精密度試驗 吸取同一供試品溶液10μL，重復進樣6次，測定阿魏酸的峰面積。

2.7重復性試驗 取同一批號樣品平行制備6份樣品，照本文所述測定方法測定，計算阿魏酸平均含量為0.2698mg/袋，RSD=1.86%（M=6）。

2.8穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8h分別進樣，結果表明樣品溶液在8h內穩(wěn)定。

2.9加樣回收率實驗 取已知含量的供試品1g，精密稱定，置150mL磨口錐形瓶中，分別精密加入阿魏酸對照品溶液（5.06μg/mL）2.1、3.5、4.9mL，照2.3項下供試品溶液制備方法分別平行制備3份，照2.1項下色譜條件測定，計算加樣回收率。

2.2.10樣品測定 分別取不同廠家不同批號樣品，碾細后取2g，精密稱定，照2.1項下色譜條件，依法測定阿魏酸含量，結果見表2。

表2 不同廠家不同批號樣品含量測定結果

3討論

3.1通過二極管陣列檢測器對阿魏酸對照品及樣品峰進行全波長掃描， 在321nm波長處均有最大吸收，故將321nm作為檢測波長。

3.2文獻[6]對阿魏酸測定方法進行了探究，認為在測定過程中應采用避光，控制溫度等進行操作，故本試驗均低溫、避光操作。

3.3在穩(wěn)定性考察8h時，RSD為1.66%；10h時， RSD為5.49%，說明阿魏酸在10h時有分解反應，試驗結果表明阿魏酸在8h內穩(wěn)定。

3.4 國內有15家藥企擁有乳泉顆粒批準文號，目前市場收集到的只有4家藥企的產品，樣品顏色、阿魏酸含量差別較大，檢測結果表明，隨著顆粒顏色的加深，阿魏酸含量逐漸升高。顏色、含量差異較大主要因為該制劑尚無阿魏酸含測標準，無法進行定量分析，導致不同廠家阿魏酸含量差別較大，且與不同廠家原藥材、藥材轉移率、輔料差異等有關。故本試驗為提高乳泉顆粒產品質量提供了參考依據(jù)。參考試驗結果，結合中國藥典中當歸含量測定項下標準[7]，通過折算每袋乳泉顆粒中所含當歸藥材的量，建議暫定本品每袋15g中含當歸以阿魏酸（C10H10O4）計不少于0.12mg。

3.5現(xiàn)行的乳泉顆粒標準尚無薄層鑒別，另其君藥為王不留行，應當建立王不留行相關物質含測方法，故該品種的質量標準尚有待進一步研究。

參考文獻：

[1] 衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑[S].第7冊.1993：98.

[2] 宋健，濮存海，孫波.乳泉顆粒處方考證及研究進展[J].中國現(xiàn)代中藥，2013，15（3）：226-229.

[3] 楊霞，李向陽，李振國.RP-HPLC法測定乳泉顆粒中阿魏酸的含量[J].中醫(yī)研究.2006，19（7）：21-23.

[4] 陳濤，郭韶莉.HPLC法測定乳泉顆粒中阿魏酸的含量[J].天津藥學，2008，20（1）：14-15.

[5] 國家藥典委員會.中國藥典，Ι部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社.2010：附錄130-131.

[6] 閔凡新，李文玉，王彥為，等.HPLC法測定當歸中阿魏酸的含量[J].中草藥，2004，35（3）：332-333.

[7] 國家藥典委員會.中國藥典，Ι部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社.2010：124.