濁點(diǎn)萃取-間接光度法測(cè)定飲料中VC

朱圣平，丁宗慶

（鄖陽師范高等?？茖W(xué)校生物化學(xué)與環(huán)境工程系，湖北十堰442000）

濁點(diǎn)萃取-間接光度法測(cè)定飲料中VC

朱圣平，丁宗慶

（鄖陽師范高等?？茖W(xué)校生物化學(xué)與環(huán)境工程系，湖北十堰442000）

建立了濁點(diǎn)萃取-間接分光光度法測(cè)定飲料中VC的方法。優(yōu)化了pH、試劑用量、平衡溫度和時(shí)間等條件。該方法的線性范圍4.0 mg/L～140 mg/L（r=0.999 5），檢出限為2.24 mg/L，加標(biāo)回收率在97.6%～102.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.7%～2.4%之間。成功的應(yīng)用于飲料樣品中VC的測(cè)定。

濁點(diǎn)萃取；分光光度法；VC；分離富集；飲料

VC的測(cè)定方法主要有碘量法［2］、分光光度法［3-4］、電分析法［5-6］和高效液相色譜法［7］等，碘量法無需特殊儀器，準(zhǔn)確度高，但它只適用于較高含量的測(cè)定；電分析法和高效液相色譜法需要大型昂貴儀器，不利于普及；分光光度法所用儀器簡(jiǎn)單，發(fā)展比較迅速。VC難以用直接光度法測(cè)定，通常是將其與過量的Fe（Ⅲ）反應(yīng)，反應(yīng)后生成的Fe（Ⅱ）再和鄰菲啰啉（Phen）反應(yīng)生成有色絡(luò)合物，利用分光光度法測(cè)定。由于飲料中常添加有食用色素，會(huì)對(duì)光度測(cè)定帶來較大的背景干擾，且部分樣品中VC含量較低，使用該方法靈敏度較低。

濁點(diǎn)萃取是一種簡(jiǎn)便、環(huán)保的液-液萃取分離技術(shù)，通過精確控制并改變表面活性劑溶液的溫度，引發(fā)溶液的“濁點(diǎn)”現(xiàn)象，通過離心后就可將溶液分離為表面活性劑相（疏水性物質(zhì)）和水相（親水性物質(zhì)）［8］。該方法可有效分離飲料樣品中的干擾物質(zhì)，并對(duì)目標(biāo)分析物有富集作用，能顯著提高分光光度法的準(zhǔn)確度和靈敏度。實(shí)驗(yàn)建立了濁點(diǎn)萃取-間接光度法測(cè)定VC的新方法，并用于飲料樣品分析。

1材料與方法

1.1 材料與試劑

VC標(biāo)準(zhǔn)溶液：100 mg/L；Fe（Ⅲ）-Phen溶液：準(zhǔn)確稱取十二水合硫酸鐵銨1.446 g，溶于20 mL 1 mol/L H2SO4中，準(zhǔn)確稱取鄰菲啰啉1.982 g，溶于20 mL 95%乙醇中，將上述2種溶液混合，用水稀釋至250 mL；TritonX-100溶液：5%（m/m）；HAc-NaAc緩沖溶液pH=5.5，試劑均為分析純，上海國(guó)藥；市售飲料。

1.2 儀器

TU-1901紫外可見分光光度計(jì)：普析通用；SYC-15恒溫水浴：南京桑力電子設(shè)備廠；800型離心機(jī)：江蘇金壇富華電器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

于10 mL具塞離心管中加入0.5 mL VC標(biāo)準(zhǔn)溶液，2.0 mL HAc-NaAc緩沖溶液，1.8 mL TritonX-100溶液，0.3 mL Fe（Ⅲ）-Phen溶液，加水至10 mL刻度，搖勻后靜置3 min使VC和Fe（Ⅲ）-Phen溶液充分反應(yīng)。

建筑結(jié)構(gòu)優(yōu)化設(shè)計(jì)是一項(xiàng)非常復(fù)雜的環(huán)節(jié)，需要建筑設(shè)計(jì)過程的每個(gè)環(huán)節(jié)都互相協(xié)調(diào)。對(duì)于房屋結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，房屋的外觀和質(zhì)量需要得到有效保證。而建筑結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)主要是指對(duì)房屋結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)，建筑結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)和房屋內(nèi)部結(jié)構(gòu)要互相結(jié)合和協(xié)調(diào)，盡量減少施工損耗和施工成本，從而保證房屋結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)質(zhì)量和外觀，實(shí)現(xiàn)其實(shí)用價(jià)值，并使房屋的建筑結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)得到科學(xué)合理的優(yōu)化。

將離心管置于85℃恒溫水浴中，加熱6 min趁熱取出。立即以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心3 min，溶液分層為紅色的表面活性劑富集相（下層）和水相（上層）。小心傾去上層水相，加水至5 mL刻度線，搖勻。以試劑空白為參比，使用1 cm比色皿，在508 nm處測(cè)定顯色液吸光度。

2結(jié)果與分析

2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

按照1.3實(shí)驗(yàn)方法，測(cè)定濁點(diǎn)萃取顯色富集液在440 nm～620 nm范圍內(nèi)的吸收曲線，如圖1所示。選擇最大吸收波長(zhǎng)508 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

圖1 吸收曲線Fig．1Absorption spectra

2.2 緩沖溶液的用量

按照1.3實(shí)驗(yàn)方法，考查了pH=5.5的緩沖溶液用量對(duì)測(cè)定的影響。結(jié)果表明，緩沖溶液用量在2.0 mL～2.5 mL之間，吸光度值高且穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)選擇加入HAc-NaAc緩沖溶液2.0 mL。

2.3 試劑用量的優(yōu)化

固定VC的濃度，分別加入不同量的TritonX-100溶液和Fe（Ⅲ）-Phen溶液，按實(shí)驗(yàn)方法考察其測(cè)定結(jié)果。結(jié)果表明：TritonX-100溶液用量在1.8 mL時(shí)，吸光度最大，繼續(xù)增加用量則吸光度降低；Fe（Ⅲ）-Phen溶液用量在0.3 mL時(shí)吸光度最大，繼續(xù)增加用量則吸光度值出現(xiàn)平臺(tái)。實(shí)驗(yàn)選擇加入TritonX-100溶液1.8 mL；Fe（Ⅲ）-Phen溶液0.3 mL。

2.4 平衡溫度和時(shí)間的優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)了不同溫度和時(shí)間對(duì)濁點(diǎn)萃取的影響。在60℃～95℃的溫度范圍內(nèi)，溫度低于71℃，無濁點(diǎn)分相現(xiàn)象，當(dāng)溫度達(dá)到85℃時(shí)，溶液吸光度達(dá)到最大；高于85℃后，吸光度開始下降。在85℃水浴中分別平衡3 min～12 min，當(dāng)平衡時(shí)間為6 min時(shí)，吸光度值最大，增加時(shí)間，吸光度無明顯變化。實(shí)驗(yàn)選擇在85℃平衡6 min。

2.5 干擾物質(zhì)的影響

考察了飲料中常見干擾物質(zhì)對(duì)100 mg/L VC測(cè)定的干擾，相對(duì)誤差在±5%以內(nèi)時(shí)，以下物質(zhì)（倍數(shù)）不干擾測(cè)定：Na+（100）、K+（100）、Ca2+（100）、Mg2+（100）、Ac-（100），Cl-（100），SO42-（100）、PO43-（100）、淀粉（100）、蔗糖（100）、Fe2+（50）、檸檬酸（50）、咖啡因（20）、賴氨酸（20）、（20）、羧甲基纖維素鈉（20）、?；撬幔?0）（10）。有色飲料中添加的食用色素不干擾測(cè)定?？梢姳痉▽?duì)VC的測(cè)定有較好的選擇性。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

按照1.3實(shí)驗(yàn)方法，在離心管中準(zhǔn)確加入不同體積的VC標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行濁點(diǎn)萃取測(cè)定，考察方法的線性。結(jié)果表明，在4.0 mg/L～140 mg/L范圍內(nèi)，VC濃度與A值呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為A=0.0075+ 0.012 7 C（mg/L），r=0.999 5。連續(xù)平行測(cè)定空白溶液11次，以測(cè)定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)偏差的3倍除以斜率計(jì)算方法檢出限為2.24 mg/L。

2.7 樣品分析

取市售不同品牌的飲料樣品按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，并與碘量滴定法測(cè)定結(jié)果比較，結(jié)果見表1。

表1 樣品分析結(jié)果（n=5）Table 1Analytical results of sample（n=5）

3結(jié)論

濁點(diǎn)萃取是一種簡(jiǎn)便、環(huán)保的分離富集方法，非離子表面活性劑TritonX-100具有良好的濁點(diǎn)萃取性能。利用濁點(diǎn)萃取-間接光度法測(cè)定飲料中VC，可排除飲料樣品中食用色素對(duì)光度法測(cè)定的干擾，并能對(duì)樣品中的VC進(jìn)行間接的富集，本法用于測(cè)定市售飲料樣品中的VC獲得了滿意結(jié)果，在食品分析領(lǐng)域有一定應(yīng)用價(jià)值。

［1］Moreno P，Salvado V.Determination of eight water-and fat-soluble vitamins in multi-vitamin pharmaceutical formulations by high-performance liquid chromatography［J］.Journal of Chromatography A，2000，870（1）：207-215

［2］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.2部，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：669-670

［3］楚紅英.紫外分光光度法測(cè)定食用菌中維生素C［J］.理化檢驗(yàn)：化學(xué)分冊(cè)，2014，50（2）：255-257

［4］李占清，魏海英.分光光度法測(cè)定新鮮蔬菜中維生素C的含量［J］.中國(guó)無機(jī)分析化學(xué)，2014，4（3）：79-81

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［6］鄧培紅，張軍，黎拒難.多壁碳納米管修飾碳黑微電極同時(shí)測(cè)定多巴胺和抗壞血酸［J］.分析試驗(yàn)室，2009，28（1）：92-95

［7］吳海燕.微波提取高效液相色譜法測(cè)定花菜中的VC［J］.食品研究與開發(fā)，2014，35（23）：87-89

［8］宋吉英，李軍德.濁點(diǎn)萃取技術(shù)的應(yīng)用［J］.化學(xué)世界，2008，49（5）：311-314

Determination of Vitamin C in Drink by Indirec Spectrophotometric with Cloud Point Extraction

ZHU Sheng-ping，DING Zong-qing
（Department of Biology，Chemistry and Environmental Engineering，Yunyang Teachers College，Shiyan 442000，Hubei，China）

A new method for the determination of vitamin C by indirec spectrophotometric after cloud point extraction was proposed.The effects of experimental conditions such as pH value，reagent dosage，equilibration temperature and time on cloud point extraction were discussed.a good linear relationship was obtained in the range of 4.0 mg/L-140 mg/L of the vitamin C（r=0.999 5），the detection limits of 2.24 mg/L.The recoveries fell in the range from 97.6%to 102.2%and the relative standard deviations were between 1.7%and 2.4%.This method has been applied for the determination of VCin drink samples.

cloud point extraction；spectrophotometry；VC；separation and enrichment；drink

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.029

2015-03-05

湖北省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（Q20126002）；鄖陽師范高等?？茖W(xué)?？蒲许?xiàng)目（2012A01）

朱圣平（1969—），男（漢），副教授，本科，主要從事食品分析研究。