慢性應(yīng)激對(duì)大鼠胸腺指數(shù)和血清CORT、胸腺肽濃度的影響

崔春紅 等

[摘要] 目的 研究慢性應(yīng)激對(duì)大鼠胸腺指數(shù)和血清糖皮質(zhì)激素（CORT）和胸腺肽濃度的影響。方法 大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和應(yīng)激組。應(yīng)激組大鼠給予復(fù)合應(yīng)激，即禁水12 h、禁食12 h、束縛6 h、晝夜顛倒、強(qiáng)迫游泳15 min、潮濕墊料24 h和45°浸水5 min7種應(yīng)激刺激，每天隨機(jī)一次，7 d為一個(gè)周期，每種刺激應(yīng)用一次，共14 d。應(yīng)激結(jié)束后取材，計(jì)算胸腺指數(shù)，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)血清CORT和胸腺肽的含量。 結(jié)果 應(yīng)激組大鼠胸腺指數(shù)為（1.08±0.13）mg/g，與對(duì)照組[（1.45±0.11）mg/g]比較顯著性減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；應(yīng)激組大鼠血清CORT濃度為（87.91±2.45） pg/mL，與對(duì)照組[（77.28±1.56）pg/mL]比較明顯增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；應(yīng)激組大鼠血清胸腺肽的含量為（0.93±0.03）×103 pg/mL，與對(duì)照組[（1.40±0.06）×103 pg/mL]比較顯著性降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 慢性應(yīng)激會(huì)降低大鼠胸腺指數(shù)，抑制胸腺肽的分泌功能。

[關(guān)鍵詞] 慢性應(yīng)激；胸腺；ACTH；胸腺肽

[中圖分類號(hào)] R4 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2015）09（a）-0096-02

Effects of Chronic Stress on Thymus Index and Concentration of Serum CORT and Thymosin in Rats

CUIChun-hong1， SUN Zhao-xia2， LI Wei1， JIANG He1

1. Department of Histology and Embryology， Shandong Wanjie Medical School， Zibo， Shandong Province， 255213 China； 2. Department of Anatomy， Shandong Wanjie Medical School， Zibo， Shandong Province， 255213 China

[Abstract] Objective To To study the influence of acute stress on thymus index and concentration of serum CORT and thymosin in rats. Methods Rats were randomly divided into control group and stress group. Stress group rats were given compound stress， including absolute diet 12 h， water deprivation 12 h， being bounded 6 h， day and night inversion， forced swimming 15 min， damp bedding 24 h， 45° water immersion， which were randomly given once a day with 7 days for a cycle， and each stimulus was applied once for a total of 14 days. Then rats were killed and serum CORT and thymosin were extracted. We calculated the thymus index and determined the concentration of serum CORT and thymopeptide using enzyme-linked immunosorbent assay. Results The thymus index was （1.08±0.13）mg/g in the stress group ， lower than （1.45±0.11）mg/g in the control group， and the difference was statistically significant， P<0.05. The CORT levels was （87.91±2.45） pg/ml in the stress group， higher than （77.28±1.56）pg/ml in the control group， and the difference was statistically significant， P<0.05； the concentration of serum thymosin was （0.93±0.03）×103 pg/ml in the stress group， lower than（1.40±0.06）×103pg/ml in the control group， and the difference was statistically significant， P<0.05. Conclusion Chronic stress can lower the thymus index and inhibit the secretion of the thymosin in rats.

[Key words] Chronic Stress； Thymus； ACTH； Thymosin

應(yīng)激是個(gè)體面臨或察覺到環(huán)境變化對(duì)機(jī)體有威脅或挑戰(zhàn)時(shí)所做出的適應(yīng)和應(yīng)對(duì)過(guò)程。長(zhǎng)時(shí)間或過(guò)強(qiáng)的應(yīng)激可引起神經(jīng)、內(nèi)分泌失調(diào)，免疫功能障礙[1]，而機(jī)體對(duì)應(yīng)激的反應(yīng)主要表現(xiàn)在交感-腎上腺髓質(zhì)軸（sympathetic-adrenal medullary，SAM）高度興奮和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸（hypothalamic-pituitary-adrenal axis，HPA）反應(yīng)，引起神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂[2]。胸腺是機(jī)體重要的中樞免疫器官，是T淋巴細(xì)胞發(fā)育、成熟的場(chǎng)所，對(duì)機(jī)體外周淋巴器官的發(fā)育和免疫應(yīng)答的發(fā)生起著重要的調(diào)節(jié)作用[3]。應(yīng)激反應(yīng)可導(dǎo)致胸腺的退化萎縮[4]，并伴有免疫功能受損。目前，對(duì)應(yīng)激反應(yīng)中血清胸腺肽濃度的研究較少。本實(shí)驗(yàn)試圖通過(guò)慢性應(yīng)激探討應(yīng)激對(duì)大鼠胸腺指數(shù)和血清CORT以及胸腺肽濃度的影響，為進(jìn)一步探討應(yīng)激影響機(jī)體免疫功能的機(jī)制與途徑奠定基礎(chǔ)。測(cè)定胸腺指數(shù)意在了解應(yīng)激對(duì)大鼠胸腺體積、重量的影響；檢測(cè)應(yīng)激后血清胸腺肽濃度，旨在了解應(yīng)激對(duì)胸腺肽的影響，為進(jìn)一步探討胸腺肽在應(yīng)激影響胸腺結(jié)構(gòu)過(guò)程中的作用及其機(jī)制提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究于2014年6月—2014年8月間以12只Wistar雄性大鼠（山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）為研究對(duì)象，大鼠體重180±10g，6只一籠合養(yǎng)（籠子尺寸為約為500mm×400mm×300mm）。在實(shí)驗(yàn)室中在環(huán)境適應(yīng)5 d，晝/夜周期為12h/12h（光照時(shí)間為08：00～20：00），室內(nèi)溫度為（23±2）℃，濕度為50%左右。適應(yīng)期內(nèi)所有動(dòng)物自由攝食和飲水。 適應(yīng)期后對(duì)大鼠進(jìn)行分組，采用隨機(jī)數(shù)表法選取6只作為正常對(duì)照組，不作任何實(shí)驗(yàn)處理；另6只作為應(yīng)激組。

1.2 方法

應(yīng)激組大鼠給予復(fù)合應(yīng)激，即禁水12 h、禁食12 h、束縛6 h、晝夜顛倒、強(qiáng)迫游泳15 min、潮濕墊料24 h和45°浸水5 min7種應(yīng)激刺激，每天隨機(jī)一次，7 d為一個(gè)周期，每種刺激應(yīng)用一次，共1 d。應(yīng)激結(jié)束2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，后剖開腹腔，自腹主動(dòng)脈抽取血液5 mL，室溫靜置30 min后3500r·min-1離心取上層血清，-20℃保存；剖開胸腔取出胸腺，清除表面附著的脂肪等其他組織，用濾紙吸干凈其表面的血液，后用電子天平稱量其重量。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 胸腺指數(shù) 胸腺指數(shù)=胸腺重量/體重，胸腺重以mg為單位，體重以g為單位。

1.3.2 血清CORT和胸腺肽的濃度 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)血清CORT和胸腺肽的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠胸腺指數(shù)

應(yīng)激后大鼠胸腺指數(shù)與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 慢性應(yīng)激對(duì)大鼠胸腺指數(shù)的影響（x±s，mg/g）

注：與對(duì)照組比較*P<0.05。

2.2 血清CORT和血清胸腺肽的濃度

應(yīng)激后大鼠血清CORT的濃度明顯增高，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；胸腺肽的濃度比較對(duì)照組顯著性減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 慢性應(yīng)激對(duì)大鼠血清CORT和胸腺肽的濃度的影響（x±s，pg/mL）

注：與對(duì)照組比較*P<0.05。

3 討論

胸腺是機(jī)體主要的免疫器官，為T淋巴細(xì)胞的成熟和選擇提供微環(huán)境，在免疫功能的執(zhí)行與維持中發(fā)揮重要的作用。人類的胸腺在出生時(shí)已發(fā)育完全，以后隨著年齡的增長(zhǎng)而逐漸變大，致青春期達(dá)到高峰，青春期過(guò)后胸腺逐漸退化萎縮，受性激素的影響[5-6]，故而實(shí)驗(yàn)中選擇青春期雄性大鼠。

各種應(yīng)激均可導(dǎo)致胸腺退化，這種退化是在機(jī)體應(yīng)激時(shí)，通過(guò)下丘腦-垂體-腎上腺軸的作用而發(fā)生的[7]。這與本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果相似，大鼠經(jīng)復(fù)合應(yīng)激2周后血清CORT的濃度[（87.91±2.45） pg/mL]明顯升高，與對(duì)照組[（77.28±1.56）pg/mL]比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

胸腺退化萎縮意味著在細(xì)胞免疫功能中起主導(dǎo)作用的T淋巴細(xì)胞的數(shù)目減少，從而導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能下降甚至抑制。胸腺指數(shù)是反映機(jī)體胸腺免疫功能的重要指標(biāo)之一，其數(shù)值高低的變化可以反映機(jī)體免疫功能的狀態(tài)[8-9]。本實(shí)驗(yàn)中，我們觀察到大鼠應(yīng)激2周后，胸腺指數(shù)[（1.08±0.13）mg/g]出現(xiàn)顯著性減低，與對(duì)照組[（1.45±0.11）mg/g]比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這說(shuō)明應(yīng)激確實(shí)引起了胸腺的退化萎縮，與相關(guān)研究的結(jié)果是相似的[10]。

研究表明，胸腺激素在胸腺細(xì)胞的發(fā)育和成熟過(guò)程中發(fā)揮重要的作用[11-12]，胸腺肽可以增加T細(xì)胞的產(chǎn)生、刺激T細(xì)胞分化與成熟、減少T細(xì)胞凋亡以及產(chǎn)生T細(xì)胞介導(dǎo)抗體等[13]。本實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)激大鼠血清胸腺肽濃度[（0.93±0.03）×103 pg/mL]較對(duì)照組[（1.40±0.06）×103pg/mL]明顯下降，與研究結(jié)果相吻合。應(yīng)激致使胸腺萎縮退化的過(guò)程中，胸腺肽可能也起到重要的作用。但血清胸腺肽濃度降低的機(jī)制以及其與胸腺組織結(jié)構(gòu)的破壞間是否有關(guān)系尚不明確，需進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2015-06-03）