烏龍養(yǎng)血膠囊中芍藥苷的含量測(cè)定

馬玉珠+王菊平

【摘 要】 目的：建立烏龍養(yǎng)血膠囊中芍藥苷的含量測(cè)定方法，并對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)砷進(jìn)行修訂。方法：采用高效液相方法，在色譜柱為Diamonsil Columns C18，甲醇-水-冰醋酸（25∶ 75∶ 0-2）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm的條件下檢測(cè)芍藥苷的含量。結(jié)果：芍藥苷在50～250μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，Y=35883X-249249，r=0-9992。RSD為1-19%（n=6）。結(jié)論：本法靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便易行、重現(xiàn)性好，可作烏龍養(yǎng)血膠囊質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。

【關(guān)鍵詞】 芍藥苷；高效液相；烏龍養(yǎng)血膠囊

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284-1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2015）18-0007-03

The Content determination of Paeoniflorin in Wulong Yangxue capsule

MA Yuzhu WANG Juping

Songlu pharmaceutical Co.Ltd. of Hulunbuir， Hulunbei 162650，China

Abstract：Objective To establish the method for assay of Wulong Yangxue capsule.Methods The sample was analyzed by High performance liquid chromatography HPLC and with Diamonsil Columns C18 column. The amount of paeoniflorin of radix paeoniae rubra was detected with methanol-water-glacial acetic acid （25∶ 75∶ 0-2） as mobile phase and detected wavelength of 230nm.ResultsPaeoniflorin in the range of 250-50μg good linear relationship ， Y=35883X -249249， the correlation coefficient r=0-9992.RSD was 1-19% （n=6）.Conclusion The method was sensitive， accurate ， simple and reproducible， as one of the indicators of the quality control of Wulong Yangxue capsule.

Keywords：Paeoniflorin； HPLC； Wulong Yangxue capsule；

烏龍養(yǎng)血膠囊由人參、冬蟲(chóng)夏草、靈芝、琥珀、熊膽、鹿茸、黃芪、葛根、紅花、絞股藍(lán)、川芎、玫瑰花、海藻、當(dāng)歸、丹參、赤芍、刺五加、枸杞子、地龍、山楂、天麻、何首烏等組成，具有補(bǔ)氣養(yǎng)血的功效。臨床用于氣血虧虛所致的身倦乏力、胸悶、多夢(mèng)、神疲等癥。藥理研究發(fā)現(xiàn)，烏龍養(yǎng)血膠囊具有改善腦血循環(huán)、降低血脂、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能；對(duì)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)具有明顯的雙向調(diào)節(jié)作用，可改善大腦皮層和植物神經(jīng)系統(tǒng)的功能[1]。

研究采用高效液相方法測(cè)定烏龍養(yǎng)血膠囊中的芍藥苷的含量，并對(duì)執(zhí)行過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的砷鹽檢查項(xiàng)存在的問(wèn)題進(jìn)行修訂，進(jìn)一步完善烏龍養(yǎng)血膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與材料

1-1 儀器 島津高效液相色譜儀（LC-10ATvp輸液系統(tǒng)、SPD-10Avp檢測(cè)器、lcsolusion lite 色譜工作站）；UV-2401PC SHIMADZU紫外分析儀；METTLER-240電子分析天平（上海梅特勒）；AS超聲儀（天津奧特賽斯思儀器有限公司）。

1-2 材料 芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-200630，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；烏龍養(yǎng)血膠囊（呼倫貝爾松鹿制藥有限公司）；D101型大孔吸附樹(shù)脂（批號(hào)：990320，天津農(nóng)藥廠）；流動(dòng)相甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2-1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil Columns C18（250 mm×4-6 mm，5μm）；柱溫：35℃；流速：1-0ml/min；流動(dòng)相：甲醇-水-冰醋酸（25∶ 75∶ 0-2）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；進(jìn)樣量：20 μl。理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)應(yīng)不低于2000。

2-2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密稱(chēng)取干燥24 h后的芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每0-1mg/ml的溶液，即得。

2-3 樣品溶液的制備 精密稱(chēng)取烏龍養(yǎng)血膠囊內(nèi)容物3 g，研細(xì)，置具塞三角燒瓶中，加甲醇50 ml，稱(chēng)重，放置1 h，超聲提取30 min，放冷，稱(chēng)重，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液10 ml，置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?～5ml使溶解，加入D101型大孔吸附樹(shù)脂柱上，用50%甲醇50 ml洗脫，收集洗脫液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2-4 陰性溶液的制備 按照烏龍養(yǎng)血膠囊處方，按照“2-3”項(xiàng)制備缺少赤芍的陰性溶液。

2-5 線性關(guān)系的考察[2] 精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品6-64 mg，加甲醇溶液定容至25ml，分別吸取1-0、2-0、3-0、4-0、5-0 ml用甲醇溶液稀釋至5ml，搖勻，分別取20 μl注入高效液相色譜儀。以對(duì)照品溶液濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程，Y=33775805X -249249，r=0-9996，表明芍藥苷進(jìn)樣量在50～250μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系的考察結(jié)果

2-6 干擾試驗(yàn) 將芍藥苷對(duì)照品溶液、供試品溶液、赤芍陰性對(duì)照溶液分別注入液相色譜儀中，進(jìn)行色譜掃描，結(jié)果顯示其他藥味不干擾芍藥苷的檢測(cè)。見(jiàn)圖1。

2-7 精密度試驗(yàn) 取芍藥苷對(duì)照品溶液20μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定芍藥苷的面積積分值。由表2可知，芍藥苷面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1-19%（n=5）<2%，說(shuō)明儀器的精密度良好。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2-8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取烏龍養(yǎng)血膠囊（批號(hào)：130905）的樣品溶液，分別于0、2、6、8、12h注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣量20μl。由表3可知，峰面積RSD為0-91%，表明樣品溶液在12h內(nèi)具有良好穩(wěn)定性。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2-9 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為130905的烏龍養(yǎng)血膠囊樣品，精密稱(chēng)量，按照“2-3”項(xiàng)平行處理6份作為供試品溶液，注入液相色譜儀，進(jìn)樣量為20 μl。由表4可知，烏龍養(yǎng)血膠囊中芍藥苷的含量為0-888 mg/g，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0-72%（n=6），RSD<2%，重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示方法穩(wěn)定可靠。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2-10 回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的烏龍養(yǎng)血膠囊6份（批號(hào)：130905，含量為0-888mg/g）約1-5g，精密稱(chēng)定，置具塞三角燒瓶中，精密加甲醇20ml，分別精密加入對(duì)照品溶液（濃度為71-5μg/ml）20 ml，按照“2-3”項(xiàng)制備供試品溶液。分別進(jìn)樣20μl，測(cè)定。計(jì)算出加樣回收率，平均為97-54%，RSD為0-57%。見(jiàn)表5。

2-11 樣品測(cè)定 按本文擬定方法測(cè)定其中芍藥苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表6。

表5 回收率測(cè)定結(jié)果

表6 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=6）

3 砷鹽的檢查

烏龍養(yǎng)血膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中砷鹽的檢查為“氫氧化鈣熾灼灰化”，該方法灰化不完全，有機(jī)成份干撓嚴(yán)重，影響砷斑顏色判定?，F(xiàn)采用硫酸、硝酸氧化并熾灼灰化，所以采用此方法得到較好的分析，避免了有機(jī)成分灰化不完全而干擾檢測(cè)。具體方法如下：取供試品0-4g，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸1ml，使恰濕潤(rùn)，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸1ml蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500～600℃熾灼使完全灰化。取遺留的殘?jiān)?，加鹽酸5ml與水21ml，依法檢查，含砷量不得過(guò)百萬(wàn)分之五。

4 討論

烏龍養(yǎng)血膠囊的處方總量266g，其中赤芍為11g，而赤芍藥材標(biāo)準(zhǔn)要求含量芍藥苷（C23H28O11）不低于1-8%[3]。因此，烏龍養(yǎng)血膠囊中芍藥苷的理論含量為0-744mg/g。考慮生產(chǎn)工藝復(fù)雜，且受藥材來(lái)源、生產(chǎn)貯存等因素的影響，暫定本品含赤芍以芍藥苷（C23H28O11）計(jì)，每1g不得少于0-7mg。研究采用高效液相法測(cè)定烏龍養(yǎng)血膠囊藥品赤芍中芍藥苷的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，該方法準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便、快速，可作烏龍養(yǎng)血膠囊質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。參考文獻(xiàn)

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[2] 張春華，嚴(yán)云良.醫(yī)藥數(shù)理統(tǒng)計(jì)[M].北京：科學(xué)出版社，2001.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：147-148.

（收稿日期：2015-06-09）