市售杜仲茶中主要成分含量的測定

摘要：實驗確定了京尼平苷酸、桃葉珊瑚苷和芍藥苷的質譜和液相的檢測方法。繪制出了京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標準曲線和藥時曲線。

關鍵詞：京尼平苷酸；桃葉珊瑚苷；芍藥苷

中圖分類號： S571.1 文獻標識碼： A 文章編號： 1674-0432（2014）-02-23-2

杜仲茶具有一定的降壓效果，其中京尼平甘酸、桃葉珊瑚苷等成分具有很顯著功能活性，而且含量較高。我們就是要建立一套完整的提取、檢測方法，為以后的藥代動力學研究作理論基礎。

1 實驗材料

1.1 儀器與試劑

市售杜仲茶，產(chǎn)地為湖南張家界。

正丁醇，J&K Chemical Ltd。

乙醇，J&K Chemical Ltd。

甲醇，J&K Chemical Ltd。

去離子水，選用哈爾濱市文景蒸餾水廠的。

高速中藥粉碎機，選用浙江永康溪岸藥具廠的。

Waters高效液相色譜儀，選用美國Waters公司的。

BS210S電子天平，選用北京賽多利斯有限公司的。

DT200A電子天平，選用江蘇常熟長青儀器儀表廠的。

22R型高速離心機，選用德國Heaerussepatech公司的。

KQ-250DB型臺式數(shù)控超聲波清洗器，選用昆山市超聲儀器有限公司的。

Agilent 1100高效液相色譜儀，選用美國AB公司的。

京尼平苷酸標準品，選用Sigma公司的。

桃葉珊瑚苷標準品，選用Sigma公司的。

芍藥苷標準品，選用Sigma公司的。

1.2 實驗動物

SD大鼠，雌雄各半，體重（240±20）克，清潔級，由哈爾濱醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院實驗動物中心提供。

2 原料處理

稱取杜仲茶50克，粉碎，溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。然后過濾，濾渣溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。過濾后，將兩次濾液混合在一起。用等體積正丁醇萃取3次，將3次萃取液混合。混合后的萃取液用旋轉蒸發(fā)儀處理，溫度60℃，每次時間不超過30分鐘。將最后得到的固體樣品凍干，保存待用。

3 方法

3.1 液相方法

安捷倫C18 色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm），流動相組成是水和甲醇，比例為57%水和43%甲醇，流速1.0毫升/分鐘，進樣量10微克。

3.2 質譜方法

質譜條件掃描方式采用負離子多離子反應監(jiān)測模式MRM電壓-4 500伏，離子源霧化溫度300℃，霧化氣82.7 千帕，氣簾氣68.9千帕。京尼平苷酸分子量373.2，碎片分子量211.1，DP電壓-77伏，CE電壓-18.5伏，CXP電壓-10伏。桃葉珊瑚苷分子量345.2，碎片分子量182.9，DP電壓-49伏，CE 電壓-13伏，CXP電壓-2伏。芍藥苷分子量479.3，碎片分子量121.1，DP電壓-60伏，CE電壓-22伏，CXP電壓-8伏。

4 制備及標準曲線的繪制

4.1 標準品的制備

稱取一定量的京尼平苷酸[1]和桃葉珊瑚苷用甲醇溶解，配成濃度為1毫克/毫升的混合標準品標準液。稱取一定量的芍藥苷，用甲醇溶解，配成濃度為100納克/毫升的標準液。用200微克的空白血漿、100毫升的芍藥苷標準液、100毫升的混合標準品標準液（經(jīng)稀釋），混合后使得混合標準品的濃度分別為0.192，0.96，4.8，24，120，600，3000納克/毫升。渦旋30秒后12000轉/分離心10分鐘取上清液。

4.2 血樣的制備

血漿樣品制備血樣于12000轉/分離心10分鐘后取血漿200微克，加入100毫升的混合標準品溶液，100毫升芍藥苷，渦旋30 秒，12 000 轉/分離心10分鐘，取上清液進行血漿中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的LC-MS/MS測定。

4.3 標準曲線的繪制

用內(nèi)標法繪制京尼平苷算和桃葉珊瑚苷[2]的標準曲線，芍藥苷為內(nèi)標。

5 大鼠給藥

大鼠以每克體重給藥1毫克的給藥量進行口服給藥，取血時間為0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12，24h。根據(jù)標準曲線測出血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的含量，繪制藥時曲線。

6 實驗結果

6.1 標準曲線

圖1 京尼平苷酸標準曲線

根據(jù)測得京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷和混合標準品也內(nèi)標芍藥苷相應的濃度及峰面積，繪制出相應標準曲線圖1、圖2。其中京尼平苷酸的標準曲線為y=2.041x + 0.1482，R2 = 0.9999，桃葉珊瑚苷的標準曲線為y = 7.9851x + 0.5673，R2 = 0.9998。

圖2桃葉珊瑚苷標準曲線

6.2 給藥后血樣中含量的測定

圖3京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷藥時曲線

根據(jù)所繪制的京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標準曲線，對大鼠口服給藥后血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷對應的時間點和濃度作藥時曲線圖。

7 結論

原料經(jīng)處理后給藥，從藥時曲線中可以看出，京尼平苷酸最大濃度可達大概45納克/毫升，而桃葉珊瑚苷只能達到25納克/毫升左右，濃度值略低，可考慮使用氯仿或四氯化碳等其他常見有機溶劑進行萃取。

參考文獻

[1]彭婕，錢之玉，等.京尼平苷和西紅花酸保肝利膽作用的比較.中國新藥雜志，2003（2）.

[2]成龍，楊紅軍，等.京尼平苷及京尼平的藥代動力學研究—排泄動力學.第六次全國中西醫(yī)結合中青年學術研討會. 2009.

作者簡介：馬宇亮，黑龍江工業(yè)學院環(huán)境工程系，碩士研究生，研究方向：生物及生物制藥。

摘要：實驗確定了京尼平苷酸、桃葉珊瑚苷和芍藥苷的質譜和液相的檢測方法。繪制出了京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標準曲線和藥時曲線。

關鍵詞：京尼平苷酸；桃葉珊瑚苷；芍藥苷

中圖分類號： S571.1 文獻標識碼： A 文章編號： 1674-0432（2014）-02-23-2

杜仲茶具有一定的降壓效果，其中京尼平甘酸、桃葉珊瑚苷等成分具有很顯著功能活性，而且含量較高。我們就是要建立一套完整的提取、檢測方法，為以后的藥代動力學研究作理論基礎。

1 實驗材料

1.1 儀器與試劑

市售杜仲茶，產(chǎn)地為湖南張家界。

正丁醇，J&K Chemical Ltd。

乙醇，J&K Chemical Ltd。

甲醇，J&K Chemical Ltd。

去離子水，選用哈爾濱市文景蒸餾水廠的。

高速中藥粉碎機，選用浙江永康溪岸藥具廠的。

Waters高效液相色譜儀，選用美國Waters公司的。

BS210S電子天平，選用北京賽多利斯有限公司的。

DT200A電子天平，選用江蘇常熟長青儀器儀表廠的。

22R型高速離心機，選用德國Heaerussepatech公司的。

KQ-250DB型臺式數(shù)控超聲波清洗器，選用昆山市超聲儀器有限公司的。

Agilent 1100高效液相色譜儀，選用美國AB公司的。

京尼平苷酸標準品，選用Sigma公司的。

桃葉珊瑚苷標準品，選用Sigma公司的。

芍藥苷標準品，選用Sigma公司的。

1.2 實驗動物

SD大鼠，雌雄各半，體重（240±20）克，清潔級，由哈爾濱醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院實驗動物中心提供。

2 原料處理

稱取杜仲茶50克，粉碎，溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。然后過濾，濾渣溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。過濾后，將兩次濾液混合在一起。用等體積正丁醇萃取3次，將3次萃取液混合。混合后的萃取液用旋轉蒸發(fā)儀處理，溫度60℃，每次時間不超過30分鐘。將最后得到的固體樣品凍干，保存待用。

3 方法

3.1 液相方法

安捷倫C18 色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm），流動相組成是水和甲醇，比例為57%水和43%甲醇，流速1.0毫升/分鐘，進樣量10微克。

3.2 質譜方法

質譜條件掃描方式采用負離子多離子反應監(jiān)測模式MRM電壓-4 500伏，離子源霧化溫度300℃，霧化氣82.7 千帕，氣簾氣68.9千帕。京尼平苷酸分子量373.2，碎片分子量211.1，DP電壓-77伏，CE電壓-18.5伏，CXP電壓-10伏。桃葉珊瑚苷分子量345.2，碎片分子量182.9，DP電壓-49伏，CE 電壓-13伏，CXP電壓-2伏。芍藥苷分子量479.3，碎片分子量121.1，DP電壓-60伏，CE電壓-22伏，CXP電壓-8伏。

4 制備及標準曲線的繪制

4.1 標準品的制備

稱取一定量的京尼平苷酸[1]和桃葉珊瑚苷用甲醇溶解，配成濃度為1毫克/毫升的混合標準品標準液。稱取一定量的芍藥苷，用甲醇溶解，配成濃度為100納克/毫升的標準液。用200微克的空白血漿、100毫升的芍藥苷標準液、100毫升的混合標準品標準液（經(jīng)稀釋），混合后使得混合標準品的濃度分別為0.192，0.96，4.8，24，120，600，3000納克/毫升。渦旋30秒后12000轉/分離心10分鐘取上清液。

4.2 血樣的制備

血漿樣品制備血樣于12000轉/分離心10分鐘后取血漿200微克，加入100毫升的混合標準品溶液，100毫升芍藥苷，渦旋30 秒，12 000 轉/分離心10分鐘，取上清液進行血漿中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的LC-MS/MS測定。

4.3 標準曲線的繪制

用內(nèi)標法繪制京尼平苷算和桃葉珊瑚苷[2]的標準曲線，芍藥苷為內(nèi)標。

5 大鼠給藥

大鼠以每克體重給藥1毫克的給藥量進行口服給藥，取血時間為0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12，24h。根據(jù)標準曲線測出血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的含量，繪制藥時曲線。

6 實驗結果

6.1 標準曲線

圖1 京尼平苷酸標準曲線

根據(jù)測得京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷和混合標準品也內(nèi)標芍藥苷相應的濃度及峰面積，繪制出相應標準曲線圖1、圖2。其中京尼平苷酸的標準曲線為y=2.041x + 0.1482，R2 = 0.9999，桃葉珊瑚苷的標準曲線為y = 7.9851x + 0.5673，R2 = 0.9998。

圖2桃葉珊瑚苷標準曲線

6.2 給藥后血樣中含量的測定

圖3京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷藥時曲線

根據(jù)所繪制的京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標準曲線，對大鼠口服給藥后血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷對應的時間點和濃度作藥時曲線圖。

7 結論

原料經(jīng)處理后給藥，從藥時曲線中可以看出，京尼平苷酸最大濃度可達大概45納克/毫升，而桃葉珊瑚苷只能達到25納克/毫升左右，濃度值略低，可考慮使用氯仿或四氯化碳等其他常見有機溶劑進行萃取。

參考文獻

[1]彭婕，錢之玉，等.京尼平苷和西紅花酸保肝利膽作用的比較.中國新藥雜志，2003（2）.

[2]成龍，楊紅軍，等.京尼平苷及京尼平的藥代動力學研究—排泄動力學.第六次全國中西醫(yī)結合中青年學術研討會. 2009.

作者簡介：馬宇亮，黑龍江工業(yè)學院環(huán)境工程系，碩士研究生，研究方向：生物及生物制藥。

摘要：實驗確定了京尼平苷酸、桃葉珊瑚苷和芍藥苷的質譜和液相的檢測方法。繪制出了京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標準曲線和藥時曲線。

關鍵詞：京尼平苷酸；桃葉珊瑚苷；芍藥苷

中圖分類號： S571.1 文獻標識碼： A 文章編號： 1674-0432（2014）-02-23-2

杜仲茶具有一定的降壓效果，其中京尼平甘酸、桃葉珊瑚苷等成分具有很顯著功能活性，而且含量較高。我們就是要建立一套完整的提取、檢測方法，為以后的藥代動力學研究作理論基礎。

1 實驗材料

1.1 儀器與試劑

市售杜仲茶，產(chǎn)地為湖南張家界。

正丁醇，J&K Chemical Ltd。

乙醇，J&K Chemical Ltd。

甲醇，J&K Chemical Ltd。

去離子水，選用哈爾濱市文景蒸餾水廠的。

高速中藥粉碎機，選用浙江永康溪岸藥具廠的。

Waters高效液相色譜儀，選用美國Waters公司的。

BS210S電子天平，選用北京賽多利斯有限公司的。

DT200A電子天平，選用江蘇常熟長青儀器儀表廠的。

22R型高速離心機，選用德國Heaerussepatech公司的。

KQ-250DB型臺式數(shù)控超聲波清洗器，選用昆山市超聲儀器有限公司的。

Agilent 1100高效液相色譜儀，選用美國AB公司的。

京尼平苷酸標準品，選用Sigma公司的。

桃葉珊瑚苷標準品，選用Sigma公司的。

芍藥苷標準品，選用Sigma公司的。

1.2 實驗動物

SD大鼠，雌雄各半，體重（240±20）克，清潔級，由哈爾濱醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院實驗動物中心提供。

2 原料處理

稱取杜仲茶50克，粉碎，溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。然后過濾，濾渣溶解在500毫升水中，溫度60℃熱回流提取30分鐘。過濾后，將兩次濾液混合在一起。用等體積正丁醇萃取3次，將3次萃取液混合?；旌虾蟮妮腿∫河眯D蒸發(fā)儀處理，溫度60℃，每次時間不超過30分鐘。將最后得到的固體樣品凍干，保存待用。

3 方法

3.1 液相方法

安捷倫C18 色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm），流動相組成是水和甲醇，比例為57%水和43%甲醇，流速1.0毫升/分鐘，進樣量10微克。

3.2 質譜方法

質譜條件掃描方式采用負離子多離子反應監(jiān)測模式MRM電壓-4 500伏，離子源霧化溫度300℃，霧化氣82.7 千帕，氣簾氣68.9千帕。京尼平苷酸分子量373.2，碎片分子量211.1，DP電壓-77伏，CE電壓-18.5伏，CXP電壓-10伏。桃葉珊瑚苷分子量345.2，碎片分子量182.9，DP電壓-49伏，CE 電壓-13伏，CXP電壓-2伏。芍藥苷分子量479.3，碎片分子量121.1，DP電壓-60伏，CE電壓-22伏，CXP電壓-8伏。

4 制備及標準曲線的繪制

4.1 標準品的制備

稱取一定量的京尼平苷酸[1]和桃葉珊瑚苷用甲醇溶解，配成濃度為1毫克/毫升的混合標準品標準液。稱取一定量的芍藥苷，用甲醇溶解，配成濃度為100納克/毫升的標準液。用200微克的空白血漿、100毫升的芍藥苷標準液、100毫升的混合標準品標準液（經(jīng)稀釋），混合后使得混合標準品的濃度分別為0.192，0.96，4.8，24，120，600，3000納克/毫升。渦旋30秒后12000轉/分離心10分鐘取上清液。

4.2 血樣的制備

血漿樣品制備血樣于12000轉/分離心10分鐘后取血漿200微克，加入100毫升的混合標準品溶液，100毫升芍藥苷，渦旋30 秒，12 000 轉/分離心10分鐘，取上清液進行血漿中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的LC-MS/MS測定。

4.3 標準曲線的繪制

用內(nèi)標法繪制京尼平苷算和桃葉珊瑚苷[2]的標準曲線，芍藥苷為內(nèi)標。

5 大鼠給藥

大鼠以每克體重給藥1毫克的給藥量進行口服給藥，取血時間為0，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，8，10，12，24h。根據(jù)標準曲線測出血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的含量，繪制藥時曲線。

6 實驗結果

6.1 標準曲線

圖1 京尼平苷酸標準曲線

根據(jù)測得京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷和混合標準品也內(nèi)標芍藥苷相應的濃度及峰面積，繪制出相應標準曲線圖1、圖2。其中京尼平苷酸的標準曲線為y=2.041x + 0.1482，R2 = 0.9999，桃葉珊瑚苷的標準曲線為y = 7.9851x + 0.5673，R2 = 0.9998。

圖2桃葉珊瑚苷標準曲線

6.2 給藥后血樣中含量的測定

圖3京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷藥時曲線

根據(jù)所繪制的京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷的標準曲線，對大鼠口服給藥后血樣中京尼平苷酸和桃葉珊瑚苷對應的時間點和濃度作藥時曲線圖。

7 結論

原料經(jīng)處理后給藥，從藥時曲線中可以看出，京尼平苷酸最大濃度可達大概45納克/毫升，而桃葉珊瑚苷只能達到25納克/毫升左右，濃度值略低，可考慮使用氯仿或四氯化碳等其他常見有機溶劑進行萃取。

參考文獻

[1]彭婕，錢之玉，等.京尼平苷和西紅花酸保肝利膽作用的比較.中國新藥雜志，2003（2）.

[2]成龍，楊紅軍，等.京尼平苷及京尼平的藥代動力學研究—排泄動力學.第六次全國中西醫(yī)結合中青年學術研討會. 2009.

作者簡介：馬宇亮，黑龍江工業(yè)學院環(huán)境工程系，碩士研究生，研究方向：生物及生物制藥。