溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦白斑綜合征病毒的抑制作用

朱衛(wèi)衛(wèi)，邱德全， 甘　楨， 魯義善，簡紀常

（廣東海洋大學 水產(chǎn)學院 // 廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟動物病原生物學及流行病學重點實驗室 // 廣東省教育廳水產(chǎn)經(jīng)濟動物病害控制重點實驗室，廣東　湛江　524025 )

溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦白斑綜合征病毒的抑制作用

朱衛(wèi)衛(wèi)，邱德全， 甘楨， 魯義善，簡紀常

（廣東海洋大學 水產(chǎn)學院 // 廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟動物病原生物學及流行病學重點實驗室 // 廣東省教育廳水產(chǎn)經(jīng)濟動物病害控制重點實驗室，廣東湛江524025 )

從患病凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）體內(nèi)提取白斑綜合征病毒（WSSV），PCR證實WSSV毒性，將病毒粗提液稀釋10-2、10-3、10-4和10-5倍，攻毒實驗表明，最佳攻毒劑量為10-4倍稀釋液。對凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）分別注射0.05、0.10、0.15 mg/mL的溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）肽聚糖，免疫24 h后感染W(wǎng)SSV，測定其免疫保護率和肝胰腺的免疫學指標，探討溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦抗WSSV的影響。結(jié)果表明：對蝦的保護率隨著肽聚糖的濃度增大而增大，與對照組相比，0.05、0.10、0.15 mg/mL組的保護率分別為36.67%、46.67%、56.67%；實驗組凡納濱對蝦肝胰腺中的酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）和一氧化氮合成酶（NOS）活力與對照組相比的差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.01）。溶藻弧菌肽聚糖可有效增強凡納濱對蝦自身的非特殊性免疫能力，提高抗WSSV的能力。

肽聚糖；抑制作用；凡納濱對蝦；白斑綜合癥病毒；免疫指標

1993年，對蝦養(yǎng)殖暴發(fā)了白斑綜合征（WSS），對產(chǎn)業(yè)造成嚴重的損失[1-2]。隨著對白斑綜合征病毒（White Spot Syndrome Virus，WSSV）研究的深入以及相應(yīng)措施的實施，WSSV發(fā)病率從90%降至5%，但至今仍無控制WSSV的有效手段。研究表明，中草藥及其制劑[3-6]、葡聚糖[7]、黃芪多糖[8]和肽聚糖[9]可提高蝦類機體自身免疫能力，有抗菌或抗病毒作用。肽聚糖作為一種免疫多糖，普遍存在于革蘭陽性和陰性菌，可被肽聚糖識別蛋白等模式識別蛋白識別，激起機體的酚氧化酶原（proPO）等非特異性免疫系統(tǒng)，發(fā)生黑化作用和凝結(jié)作用[10]。郭玉娟等研究表明，注射A3α肽聚糖后可增強（Carassius auratus）免疫應(yīng)答[11]和滅活嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）疫苗免疫效果[12]，提高凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）的成活率及產(chǎn)量[13]。陳國福等[9]指出，A3α肽聚糖可一定程度上提高凡納濱對蝦磷酸酶及酚氧化酶的活性。本研究從溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus，革蘭陰性菌）細胞壁中提取肽聚糖，并以3個質(zhì)量濃度梯度（0.05、0.10、0.15 mg/mL）分別免疫凡納濱對蝦，研究肽聚糖對凡納濱對蝦抗WSSV及機體內(nèi)免疫指標的影響，為肽聚糖提高機體免疫能力和抗病毒能力研究提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1肽聚糖提取參照劉春曉[14]方法，從溶藻弧菌中提取并純化肽聚糖。稱取所提取肽聚糖（純度98.5%）0.05、0.10和0.15 g，溶入10 mL 平衡鹽溶液（BSS緩沖液，組分：NaCl 18.0 g/L，KCl 0.7 g/L，NaHCO30.5 g/L，KH2PO40.54 g/L，調(diào)整pH至7.2），用超聲波溶解，配成0.05、0.10和0.15 mg/mL的肽聚糖溶液。

1.1.2引物設(shè)計登陸NBCI搜索得到WSSV的vp28基因（GenBank：DQ681069）的全mRNA序列，用Premier 5軟件設(shè)計上游引物為：5′ -GCGTCATGG ATCTTTCTTTCAC-3′ ，下游引物為：5′ -CACGAT TTATTTACTCGGTCTC-3′ ，引物由上海生工生物工程公司合成。

1.1.3實驗用蝦凡納濱對蝦（Litoprnaeus vannamei），體長（9.5±0.3）cm，體質(zhì)量（11.0 ±0.6）g，取自湛江市東海島東南庵里湛江騰飛實業(yè)有限公司對蝦養(yǎng)殖場，經(jīng)PCR檢測，確認未攜帶白斑綜合癥病毒（WSSV），在1.0 m × 1.0 m × 0.8 m的水槽中暫養(yǎng)7 d，鹽度為24，水溫為28～32 ℃，每日投喂配合飼料3次，投喂量為對蝦體質(zhì)量的10%，連續(xù)充氣，日換水量約為1/3。

1.1.4WSSV病毒粗提液原液由廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟動物病原生物學及流行病學重點實驗室- 80 ℃超低溫保存。

1.2方法

1.2.1WSSV提取取保存的WSSV原液，融化后由凡納濱對蝦第2、3腹節(jié)之間往心臟方向注射到體內(nèi)。取癥狀明顯的對蝦，去除甲殼取鰓組織，放入Ependoff管中，按 1∶1（m∶V）加入高鹽磷酸緩沖液PBS（230 mg/mL NaCl），置冰上勻漿。對勻漿液以4℃、7 000 r/min的條件離心15 min。吸取上清液，加入蔗糖至終質(zhì)量分數(shù)為30%，以4 ℃、16 000 r/min的條件超速離心50 min。棄上層清液，沉淀用BSS緩沖液重懸，重懸液過孔徑0.45 μm的濾膜，于- 80 ℃冰箱儲存，備用。

取1 μL病毒粗提液作為PCR模板，反應(yīng)體系（25 μL）：10 × Ex Taq Buffer 2.5 μL，2.5 mmol/L dNTPs 各0.5 μL，10 μmol/L上、下游引物各1.0 μL，病毒粗提液1.0 μL，5 U/μL Ex Taq 0.2 μL，ddH2O 17.3 μL。反應(yīng)條件：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，54 ℃45 s， 72 ℃ 1 min，30循環(huán)；72 ℃ 10 min。取10 μL PCR產(chǎn)物用10 mg/mL瓊脂糖凝膠電泳檢測病毒DNA片段大小。

1.2.2WSSV毒性檢測實驗設(shè)對照組（XS0）、實驗組（XS1），每組設(shè)3個平行組，每個平行組放養(yǎng)凡納濱對蝦30尾。對照組每尾對蝦肌肉注射100 μL的BSS緩沖液，實驗組每尾肌肉注射同量1.2.1提取的WSSV粗提液。連續(xù)觀察7 d，記錄每天凡納濱對蝦死亡數(shù)量。取死亡凡納濱對蝦鰓，用PCR檢測WSSV。

1.2.3WSSV最佳攻毒濃度的確定將1.2.1提取得到WSSV粗提液，用BSS緩沖液以10倍梯度稀釋，配成10-2、10-3、10-4和10-5倍的WSSV粗提液。設(shè)XS2、XS3、XS4、XS5等4組，每組3個平行組，每平行組放養(yǎng)凡納濱對蝦30尾。采用肌肉注射法，每尾注射100 μL。XS2 - XS5組分別注射10-2- 10-5倍的WSSV粗提液。每日投喂配合飼料3次，連續(xù)充氣，日換水量約為1/3，定時吸出排泄物，及時取出死亡對蝦。連續(xù)觀察7 d，記錄每天凡納濱對蝦死亡尾數(shù)。

1.2.4不同濃度肽聚糖對凡納濱對蝦抗WSSV感染效果實驗設(shè)5個組，分別記為PSA、PSB、PSC、PS、D組，每組設(shè)3個平行組，每個平行組放養(yǎng)凡納濱對蝦30尾。PSA、PSB、PSC組分別在凡納濱對蝦第3腹節(jié)注射質(zhì)量濃度為0.05、0.10、0.15 mg/mL的肽聚糖，每尾注射0.1 mL；PS組為陰性對照組，每尾注射0.1 mL的BBS緩沖液。D為不做任何處理的空白對照組。于注射后0、6、12 h，1、2、3、4、5 d采集PSA、PSB、PSC、PS和D組的肝胰腺，每次取蝦5尾，檢測免疫指標。

于免疫后24 h，分別對PSA、PSB、PSC、PS、D組在同一地方注射10-4倍的WSSV粗提液0.1 mL。連續(xù)觀察7 d，記錄凡納濱對蝦死亡的情況，計算其免疫保護率。

1.2.5免疫指標測定肝胰腺粗酶液的提取與濃度測定：取肝胰腺稱重，加入體積為肝胰臟質(zhì)量5倍的0.05 mol/mL Tris-HCl緩沖液（pH 7. 4），超聲波冰浴勻漿（工作時間5 s，間隔時間7 s，5次），勻漿液置于4 ℃冰箱中16 h，于0 ℃以下以12 000 r/min 離心15 min 取上清液，于-20 ℃保存，備用。使用南京建成的Bradford法蛋白檢測試劑盒試劑盒參照說明書測定粗酶液濃度。

酸性磷酸酶（ACP）和堿性磷酸酶（AKP）活力測定參照南京建成的ACP和AKP活力測定試劑盒的說明書進行。超氧化物歧化酶（SOD）和一氧化氮合成酶（NOS）活力測定參照南京建成的測總SOD和測總NOS活力試劑盒的說明書進行。

ACP、AKP活力定義：每克組織蛋白在37 ℃下與基質(zhì)作用15 min產(chǎn)生1 mg酚為1個金氏單位。

SOD活力定義：每毫克組織蛋白在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達50%時所對應(yīng)的SOD量為一個SOD活力單位（U）。

NOS活力定義：每毫克組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NO 定義為一個 NOS 活力單位。

1.2.6數(shù)據(jù)處理所得數(shù)據(jù)采用SPSS20.0進行單因素方差分析和Duncan多重分析比較，用Excel作圖。

2　結(jié) 果

2.1WSSV提取、毒性檢測及最佳攻毒濃度確定

攻毒試驗后，經(jīng)PCR電泳檢測，死亡對蝦的病毒粗提液擴增得大小為650 bp的片段，與WSSV原液擴增結(jié)果一致（圖1），表明從死亡對蝦提取的病毒粗提液為WSSV粗提液。

圖1　白斑綜合征病毒PCR鑒定結(jié)果Fig. 1　PCR identification of WSSV

毒性檢測及最佳攻毒濃度實驗結(jié)果如表1所示。

表1　WSSV粗提液稀釋度對凡納濱對蝦死亡率的影響Table 1　Effects of concentration of WSSV crude extracts on mortality of Litopenaeus vannamei

表1可見，與對照組XS0相比，XS1組的凡納濱對蝦在注射100 μL病毒原液的24 h后，對蝦出現(xiàn)大量死亡，2 d后全部死亡，說明重新提取的病毒粗提液對對蝦致死率極高。

XS2和XS3組對蝦1 d后開始出現(xiàn)死亡，2 d時死亡數(shù)最多，5 d內(nèi)全死亡。7 d內(nèi)，XS4組死亡率達90%，XS5組僅46.67%。一般情況下，取7 d內(nèi)死亡率為90%左右的病毒濃度為實驗攻毒濃度，因此，取稀釋度10-4為最佳攻毒濃度，后繼攻毒實驗的病毒為稀釋度為10-4的WSSV病毒粗提液。

2.2溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦感染W(wǎng)SSV后存活率的影響

用稀釋度10-4的病毒粗提液注射經(jīng)不同質(zhì)量濃度肽聚糖免疫的凡納濱對蝦，各組對蝦存活率見表2。表2可見，PS組和D組對蝦死亡率接近100%，PSA組的保護率為36.67%，PSB組為46.67%，PSC組為56.67%。表明肽聚糖對對蝦的保護率隨肽聚糖質(zhì)量濃度的增加而增加。

表2　溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦存活率的影響Table 2　Effects of VibrIo alginolyticus peptidoglycan on Litopenaeus vannamei survival

2.3溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦肝胰腺ACP和AKP活力的影響

用不同質(zhì)量濃度肽聚糖免疫凡納濱對蝦，對蝦肝胰腺ACP活力隨實驗時間的變化情況如圖2所示。圖2可見，PSA組肝胰腺ACP酶活力在48 h時達到最大值，與D、PS、PSB組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）；PSB組肝胰腺ACP酶活力在24 h時達到最大值，與PSA、PSC組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），之后降至對照組水平，但在120 h時又有一個峰值；在12 h時，PSC組與D、PS、PSB、PSC組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05)，肝胰腺中ACP酶活力達到最大值，之后降低，120 h時升高，并接近最大值。

圖2　溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦肝胰腺中ACP活力的影響Fig. 2　Effects of VibrIo alginolyticus peptidoglycan on the activity of ACP in the hepatopancreas of Litopenaeus vannamei

用不同質(zhì)量濃度的肽聚糖免疫凡納濱對蝦，對蝦肝胰腺AKP活力隨實驗時間的變化情況見圖3。圖3可見，在12 h時，PSB和PSC組的肝胰腺中AKP酶活力均達最大值，與D、PS組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05)，之后逐漸降至與對照組相近水平。PSA組的肝胰腺中AKP酶活力在24 h時達到最大值，與D、PS、PSB、PSC組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），在72 h時有另一峰值，與D、PS、 PSB組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），之后逐漸降低。

圖3 溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦肝胰腺中AKP活力的影響Fig. 3 Effects of Vibrio alginolyticus peptidoglycan on the activity of AKP in the hepatopancreas of Litopenaeus vannamei

2.4 溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦肝胰腺SOD活力的影響

用不同質(zhì)量濃度肽聚糖免疫凡納濱對蝦體，對蝦肝胰腺SOD活力隨實驗時間的變化情況如圖4所示。圖4可見，PSA組在注射肽聚糖后，肝胰腺SOD活力逐步上升，在48 h時達最大值，并與D、PS、PSB組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05)，之后降低，但在120 h時又有一峰值，與D、PS、PSC組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05)。PSB組的肝胰腺SOD活力分別在12 h時和72 h時達到一峰值，與D、PS、PSA組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05)，在此時間段內(nèi)維持較高的SOD酶活力；PSC組的肝胰腺SOD活力在12 ~ 72 h時保持較高水平，之后逐漸降低。

圖4 溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦肝胰腺中SOD活力的影響Fig.4 Effects of Vibrio alginolyticus peptidoglycan on the activity of SOD in the hepatopancreas of Litopenaeus vannamei

2.5 溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦肝胰腺中NOS活力的影響

用不同質(zhì)量濃度的肽聚糖免疫凡納濱對蝦，對蝦肝胰腺中的NOS活力隨實驗時間的變化情況如圖5所示。圖5可見，PSA組在注射肽聚糖后，SOD活力逐步上升，在24 h時達最大值，并與D、PSB、PSC組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），之后降低，在72 h時有另一峰值，與PSB、PSC組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。PSB組在12 h時達到最大值，與D、PS、PSA組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05)，之后逐漸降低，但在96 h時又有一峰值。PSC組在6 h時即達最大值，與D、PS、PSA、PSB組差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05)，在12 ~ 48 h時降低，72 h時升高，之后降低，在120 h時又升高。

3　討論與分析

3.1 溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦抗WSSV的影響

實驗開始前需驗證-80 ℃保存WSSV病毒粗提液原液對對蝦是否有致死效果。PCR檢測結(jié)果顯示陽性，證明死亡對蝦是由于感染W(wǎng)SSV而死亡，同時確定后續(xù)實驗的攻毒濃度為10-4倍稀釋的WSSV粗提液。

圖5 溶藻弧菌肽聚糖對凡納濱對蝦肝胰腺中NOS活力的影響Fig. 5 Effects of Vibrio alginolyticus peptidoglycan on the activity of NOS in the hepatopancreas of Litopenaeus vannamei

有研究[15]提出，口服肽聚糖可增強凡納濱對幼體抗WSSV感染能力。謝警鴻等[16]研究顯示，注射一定濃度的溶藻弧菌肽聚糖，凡納濱對蝦可抵抗溶藻弧菌感染，并認為機體免疫力高低與肽聚糖添加量在一定范圍內(nèi)呈正比關(guān)系。本研究亦有類似結(jié)果，PSA組保護率為36.67%，PSB實驗組為46.67%，PSC實驗組為56.67%，說明凡納濱對蝦經(jīng)過肽聚糖免疫后，隨著肽聚糖質(zhì)量濃度的增加，對蝦因感染W(wǎng)SSV的死亡率逐漸降低，肽聚糖質(zhì)量濃度在0.05 ～ 0.15 mg/mL時與保護率呈正比關(guān)系，進一步證實肽聚糖可增強對蝦機體抗WSSV感染能力。

3.2肽聚糖對凡納濱對蝦肝胰腺中免疫指標的影響

酸性磷酸酶（ACP）和堿性磷酸酶（AKP）是機體內(nèi)溶酶體酶的主要組成成分，在機體內(nèi)起直接殺菌作用，并調(diào)節(jié)細胞吞噬，催化含磷底物水解，參與含磷基團的代謝與轉(zhuǎn)移，是機體重要的解毒體系。已有研究證明，ACP和AKP酶活性在不同組織中差異顯著，尤其是肝臟中活性最高[17-18]。用多糖作為免疫增強劑，采用不同的刺激方式，凡納濱對蝦幼蝦經(jīng)A3α-肽聚糖免疫后，血清中ACP和AKP活力明顯提高[19]；從酵母細胞壁中提取免疫多糖，凡納濱對蝦注射用生理鹽水配制的20 mg/mL的免疫多糖后，肝胰腺中的ACP和AKP活力明顯提高[18]。本研究顯示，凡納濱對蝦受肽聚糖免疫刺激后，肝胰腺的ACP和AKP活力顯著提高，同時最大值出現(xiàn)時間隨著注射肽聚糖濃度的增加而提前。這些研究均說明肽聚糖可增強對蝦機體內(nèi)免疫功能，進而增強抵抗外源病害的能力。

超氧化物歧化酶（SOD）可去除體內(nèi)活性氧自由基，消減呼吸爆發(fā)中產(chǎn)生的高活性氧物質(zhì)對細胞的毒性，防御機體的衰老以及生物分子的損傷。一氧化氮合成酶（NOS）作為生物效應(yīng)信使分子，可抑制和殺滅細菌、病毒、寄生蟲等。對蝦體內(nèi)NOS能催化L-精氨酸產(chǎn)生NO，抵御病原微生物侵入和調(diào)控免疫[20]。因此，把SOD和NOS酶活力作為體現(xiàn)對蝦免疫狀況的重要指標。研究指出，對蝦在注射脂多糖（LPS）或肽聚糖（PG）后，血清中SOD或NOS酶活力顯著提高[16,18]，表明免疫增強劑LPS或PG可增強對蝦機體免疫功能。本研究中，在不同質(zhì)量濃度肽聚糖注射免疫刺激后，凡納濱對蝦肝胰腺SOD酶和NOS酶活力提高顯著。PSB和PSC組的SOD酶活力均在12 h時達到最大值，說明肽聚糖注射濃度達一定值后對對蝦的免疫效果幾近相同；而NOS酶活力出現(xiàn)最大值時間大小依次是PSC、PSB、PSA，說明對蝦受肽聚糖免疫后，NOS酶活力隨肽聚糖注射濃度的增加，出現(xiàn)最大值時間提前。這為研究對蝦肝胰腺中SOD和NOS酶活力有借鑒作用。

本研究顯示，對蝦在攻毒后 48 h出現(xiàn)大量死亡，死亡率 D 組為 60%，PS 組為 46.7%，而 PSA組為 30%，PSB 組為 26.7%，PSC組為23.3%；此時對蝦肝胰腺中ACP、AKP、SOD、NOS的酶活力均高于對照組。之后的5 d內(nèi)，對蝦每天死亡數(shù)逐漸降低，這與對蝦肝胰腺中NOS和SOD在12和72 h之間維持較高水平有關(guān)，即溶藻弧菌肽聚糖提高了機體免疫水平，增強了NOS、SOD活力，對病毒W(wǎng)SSV進入機體數(shù)量得到一定控制，說明當機體內(nèi)的非特異性免疫因子活力明顯提高時，可明顯增強對蝦抗病力。添加肽聚糖的餌料投喂日本對蝦（Penaeus japonicus）后，對蝦的成活率在 85%～100 %之間，均顯著高于對照組的15%～30%[21]，凡納濱對蝦經(jīng)肽聚糖免疫后發(fā)病率為 0～40%，低于對照池（發(fā)病率80%～100%）[22]，這些均證實了肽聚糖對對蝦的免疫保護作用。本研究中，凡納濱對蝦受肽聚糖免疫刺激后，7 d內(nèi)累積死亡率在43.3%～63%，與文獻[21-22]基本吻合。肽聚糖不僅對對蝦有免疫效果，對大黃魚（Larimichthys crocea）[23]、刺參（Apostichopus japonicus）[24]、和花鱸（Lateolabrax japonicus）[25]亦有免疫保護作用，說明肽聚糖是一種有效的免疫增強劑，在水產(chǎn)養(yǎng)殖有廣闊應(yīng)用前景。

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（責任編輯：劉慶穎）

Antivirus Effects of Vibrio alginolyticus Peptidoglycan on Litopenaeus vannamei against White Spot Syndrome Virus

ZHU Wei-wei, QIU De-quan, GAN Zhen, LU Yi-shan, JIAN Ji-chang
（College of Fishery, Guangdong Ocean University // Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals // Key Laboratory of Control for Disease of Aquatic Animals of Guangdong Higher Education Institutes, Zhanjiang 524025, China）

White Spot Syndrome Virus (WSSV) was extracted from Litopenaeus vannamei suffering from White Spot Syndrom, and WSSV toxicity was confirmed by PCR. The virus crude extract was diluted 10-2, 10-3, 10-4and 10-5times, respectively, and the best attack dose of 10-4fold dilution was ascertained after challenge with WSSV. Peptidoglycan at the concentration of 0.05, 0.10 and 0.15 mg/mL was injected into L. vannamei, respectively. 24 hours later, WSSV were injected into shrimps, and the immune protection rate and the immunological indexes in hepatopancreas were measured to investigate the influence of Vibrio alginolyticus peptidoglycan in shrimps against WSSV. The results showed that the immune protection rate increased with the increase of peptidoglycan concentration, and they reached 36.67%, 46.67% and 56.67%, respectively, compared with the control group. The activities of acid phosphatase (ACP), alkaline phosphatase (AKP), superoxide dismutase (SOD) and nitrogen monoxide synthetic enzyme (NOS) in hepatopancreas had statistical differences from the control (P < 0.05). The V. alginolyticus peptidoglycan could effectively enhance the L. vannamei non-specific immunity and promise approaches to protect the shrimp from WSSV infection.

peptidoglycan; Litopenaeus vannamei; white spots syndrome virus; immune index

S941.41

A

1673-9159（2015）06-0040-07

10.3969/j.issn.1673-9159.2015.06.008

2015-06-29

廣東省海洋漁業(yè)科技推廣專項項目(A201100D03)，廣東省海洋經(jīng)濟創(chuàng)新發(fā)展區(qū)域示范專項項目(GD2012-A03-012)，湛江市科技計劃項目(2013A03021)

朱衛(wèi)衛(wèi)（1986－），男，碩士研究生，研究方向為水產(chǎn)經(jīng)濟動物免疫與病害控制。E-mail：zhuweiwei320@163.com

邱德全，男，教授，研究方向為水產(chǎn)經(jīng)濟動物免疫與病害控制。E-mail：qmsld@163.com