綠僵菌對(duì)油茶象幼蟲林間控制效果

何學(xué)友，蔡守平，詹祖仁，曾麗瓊，韓國(guó)勇，林延生

(1.福建省林業(yè)科學(xué)研究院、國(guó)家林業(yè)局南方山地用材林培育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350012；2.尤溪縣林業(yè)局，福建 尤溪 365100； 3.福州植物園，福建 福州 350012)

綠僵菌對(duì)油茶象幼蟲林間控制效果

何學(xué)友1，蔡守平1，詹祖仁2，曾麗瓊1，韓國(guó)勇3，林延生1

(1.福建省林業(yè)科學(xué)研究院、國(guó)家林業(yè)局南方山地用材林培育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350012；2.尤溪縣林業(yè)局，福建 尤溪 365100； 3.福州植物園，福建 福州 350012)

利用2個(gè)對(duì)油茶象(CurculiochinensisChevrolat)幼蟲具有高致病力的金龜子綠僵菌FJMa201101和FJMa201205菌株培養(yǎng)的菌劑，采用林間地表噴菌的方式(引入試蟲后第5天噴菌、噴菌后當(dāng)天引入試蟲、噴菌后第5天引入試蟲、噴菌后第15天引入試蟲4個(gè)處理方式)對(duì)其進(jìn)行防治試驗(yàn)。結(jié)果表明，噴菌后油茶象幼蟲校正死亡率隨著時(shí)間的推移逐漸升高；施菌后30 d油茶象幼蟲校正死亡率為34%～56%，噴菌后引入試蟲的防治效果好于引入試蟲后再噴菌的處理，F(xiàn)JMa201101菌株處理的油茶象幼蟲死亡率比FJMa201205略高；噴菌后180 d，油茶象幼蟲校正死亡率均超過(guò)70%，不同處理間的差異不顯著；噴菌后300 d，油茶象幼蟲校正死亡率均超過(guò)了80%，但不同處理間差異不顯著，且2個(gè)菌株處理的幼蟲校正死亡率也沒(méi)有顯著差異。說(shuō)明綠僵菌對(duì)油茶象幼蟲具有持續(xù)控制的效能。

油茶象；綠僵菌；林間試驗(yàn)；校正死亡率

油茶泛指山茶屬(CamelliaL.)中種子含油率較高、有栽培經(jīng)濟(jì)價(jià)值的一類植物的總稱，是我國(guó)特有的木本食用油料樹種[1-2]，目前主栽培的是普通油茶(C.oleifera)，其次為小果油茶(C.meiocarpa)。近年來(lái)，隨著國(guó)家相關(guān)部門對(duì)糧油安全生產(chǎn)的重視，油茶市場(chǎng)前景看好，其產(chǎn)業(yè)進(jìn)入快速、穩(wěn)步發(fā)展時(shí)期。至2013年我國(guó)油茶總面積已達(dá)383萬(wàn)hm2，油茶產(chǎn)業(yè)產(chǎn)值由2008年的110億元增加到390億元[3]。

前人研究表明，經(jīng)營(yíng)管理粗放的油茶林落花落果率常達(dá)70%～80%，其中約1/3是由病蟲害引起的[2，4]。油茶象(CurculiochinensisChevrolat)又名茶籽象甲、油茶中華實(shí)象，為象甲科象甲屬，是危害油茶果實(shí)最為嚴(yán)重的一種害蟲[5-8]，系目前油茶害蟲種類中唯一的全國(guó)林業(yè)危險(xiǎn)性有害生物[9]，該蟲在我國(guó)大多數(shù)油茶產(chǎn)區(qū)都有分布，主要以幼蟲危害油茶果實(shí)，引起果實(shí)大量脫落或?qū)⒎N仁取食殆盡[2，5]，極大地影響油茶的產(chǎn)量和品質(zhì)。探尋防治油茶象安全、無(wú)公害的途徑是油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展迫切需要解決的問(wèn)題。金龜子綠僵菌(Metarhiziumanisopliae)是研究和應(yīng)用最廣的蟲生真菌之一，因其能在土壤中長(zhǎng)期宿存[10]，使其成為防治地下害蟲較為有效的真菌殺蟲劑，尤其對(duì)蠐螬、桃小食心蟲等在土壤中生活周期長(zhǎng)的地下害蟲防治中得到了較為廣泛的應(yīng)用[10-14]。針對(duì)油茶象老熟幼蟲從油茶果中鉆出掉落入土壤，滯育1 a以上才化蛹羽化為成蟲出土的特性，防治土壤中油茶象幼蟲相較于其他生活史階段的更為容易。因此，本研究在前期篩選出對(duì)油茶象幼蟲具有高致病的2株金龜子綠僵菌菌株的基礎(chǔ)上[15]，開展了綠僵菌對(duì)油茶象幼蟲林間控制效果的初步研究，旨在為大面積推廣應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試蟲來(lái)源

于2014年11月油茶果采收期，分別在福建省的福州北峰、古田黃田國(guó)有林場(chǎng)和尤溪縣農(nóng)家油茶果曬場(chǎng)，收集從新鮮油茶果中鉆出的油茶象老熟幼蟲，并置于事先裝有經(jīng)高溫蒸汽滅菌土壤的養(yǎng)蟲盒中，帶回實(shí)驗(yàn)室備用。

1.2 供試菌株及菌劑制備

供試菌株為具有高致病力的金龜子綠僵菌優(yōu)良菌株：FJMa201101和FJMa201205[15]，經(jīng)SDY培養(yǎng)基液體發(fā)酵后，接入以麥麩、米粉、谷殼(按體積比1∶1∶3配比并混合均勻后，按每500 g固體培養(yǎng)基加入400 mL水的比例加水后進(jìn)行高溫蒸汽滅菌)為主要成分的固體培養(yǎng)基中，經(jīng)固體發(fā)酵培養(yǎng)產(chǎn)孢、干燥后，用振動(dòng)篩將固體培養(yǎng)物中的綠僵菌孢子分離出來(lái)，供防治試驗(yàn)用。綠僵菌粉孢子含量為400億孢子·g-1。

1.3 林間防治試驗(yàn)方法

試驗(yàn)處理：設(shè)置①引入試蟲后第5天噴菌、②噴菌后當(dāng)天引入試蟲、③噴菌后第5天引入試蟲、④噴菌后第15天引入試蟲等4個(gè)處理方式(2個(gè)菌株共8個(gè)處理)，每個(gè)處理設(shè)置9個(gè)樣方(9個(gè)重復(fù))；另在相鄰油茶林地選取面積667 m2樣地，以噴滅過(guò)菌的0.03%吐溫-80溶液為對(duì)照，對(duì)照區(qū)域中設(shè)置9個(gè)樣方。

樣地設(shè)置：2014年11月上旬，在福州北峰國(guó)有林場(chǎng)前洋工區(qū)油茶林中選取試驗(yàn)樣地面積667 m2，在林冠層下挖20 cm×20 cm×20 cm(長(zhǎng)×寬×深)的小坑，鋪墊細(xì)密尼龍網(wǎng)，然后將原土打碎后回填耙平，即成一個(gè)樣方，表面噴水讓其恢復(fù)自然狀態(tài)5 d后開始試驗(yàn)，各樣方隨機(jī)排列。

噴菌方式：將FJMa201101和FJMa201205菌株生產(chǎn)的孢子粉，用滅菌的0.03%吐溫-80溶液配制成108孢子·mL-1的孢子懸浮液，共配置50 L，稀釋2倍后，用機(jī)動(dòng)噴霧器對(duì)樣地土表進(jìn)行均勻噴菌液，噴至表土略濕潤(rùn)為準(zhǔn)。

引入試蟲：選取30頭健康油茶象幼蟲小心放在每個(gè)樣方的土表，讓其自然鉆入土壤中，1 h內(nèi)不能鉆入的則替換試蟲，模擬油茶象幼蟲自油茶果實(shí)中爬出自然掉落林間并鉆入土壤中滯育的過(guò)程。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)在DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)平臺(tái)上進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多重比較采用Duncan′s新復(fù)極差法。

2 結(jié)果與分析

2.1 處理30 d后綠僵菌對(duì)林間土壤中油茶象幼蟲的控制效果

林間土表噴菌后30 d，不同時(shí)期引入試蟲時(shí)綠僵菌對(duì)油茶象幼蟲的控制效果見表1。從表1可以看出，F(xiàn)JMa201101菌株處理的油茶象幼蟲死亡率比FJMa201205略高，同時(shí)先噴菌再引入試蟲處理的控制效果明顯好于引入試蟲后再噴菌的處理。引入試蟲后5 d噴菌，F(xiàn)JMa201101、FJMa201205菌株處理的油茶象幼蟲校正死亡率分別為(41.1±4.8)%、(34.1±2.7)%，均顯著低于先噴菌再引入試蟲的處理，這可能與噴菌后引入試蟲比先引入試蟲入土再噴菌而接觸綠僵菌的機(jī)率更高，感染致病死亡時(shí)間更快有關(guān)，而且隨著噴菌后引入幼蟲時(shí)間的推遲而死亡率逐漸降低。

表1 不同處理后30 d林間土壤中油茶象幼蟲的死亡率 %

2.2 處理180 d后綠僵菌對(duì)林間土壤中油茶象幼蟲的控制效果

噴菌后180 d，不同處理綠僵菌對(duì)油茶象幼蟲的控制效果見表2。從表2可以看出，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，不同處理下油茶象幼蟲的死亡率比處理30 d時(shí)顯著提高，除噴施FJMa201205菌液15 d后引入試蟲的校正死亡率為68.7%外，其余處理的油茶象幼蟲校正死亡率均超過(guò)70%，但不同處理間的效果差異不顯著，且無(wú)明顯的規(guī)律。

表2 不同處理后180 d林間土壤中油茶象幼蟲的死亡率 %

2.3 處理300 d后綠僵菌對(duì)林間土壤中油茶象幼蟲的控制效果

噴菌后300 d，不同處理油茶象幼蟲死亡情況見表3。從表1～表3可以看出，隨著時(shí)間的推移，油茶象幼蟲的死亡率逐漸提高，表明綠僵菌對(duì)油茶象的持續(xù)控制效果逐漸顯現(xiàn)，無(wú)論何種處理或是何時(shí)引入試蟲，油茶象幼蟲校正死亡率均超過(guò)80%，但不同處理間的差異不顯著，且2個(gè)菌株對(duì)幼蟲的校正死亡率間也沒(méi)有顯著差異?？梢姡诹珠g噴施綠僵菌菌液后，對(duì)油茶象幼蟲具有長(zhǎng)期持續(xù)控制的效果。

表3 不同處理后300 d林間土壤中油茶象幼蟲的死亡率 %

2.4 綠僵菌對(duì)油茶象幼蟲的感染情況

試驗(yàn)過(guò)程中在不同時(shí)期進(jìn)行防治效果檢查，噴菌后30 d時(shí)，發(fā)現(xiàn)油茶象幼蟲僵蟲的概率較大，僵蟲率達(dá)30%～45%，而對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)僵蟲。但到噴菌后180 d或300 d檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)，僵蟲的概率小于7%，可能是由于試驗(yàn)跨2個(gè)年度，周期較長(zhǎng)，2015年春、夏季雨水較多，有時(shí)甚至暴雨積水直接浸泡土壤，土壤長(zhǎng)期保持較高的濕度，使得已經(jīng)感染的幼蟲僵蟲可能被破壞或被其他微生物分解，從而較難發(fā)現(xiàn)僵蟲，但這反而會(huì)促進(jìn)土壤中綠僵菌孢子的進(jìn)一步定殖擴(kuò)散，總體上有利于綠僵菌對(duì)土壤害蟲的感染[16]，這也是綠僵菌能夠在土壤中長(zhǎng)期宿存的一個(gè)重要因素。

3 結(jié)論與討論

本研究利用篩選出的2個(gè)對(duì)油茶象幼蟲具有高致病力的綠僵菌菌株培養(yǎng)的菌劑進(jìn)行林間防治試驗(yàn)，結(jié)果表明，林間噴施綠僵菌后，油茶象幼蟲死亡率隨著時(shí)間的推移效果逐漸提高，其中噴菌后30 d，不同處理的油茶象幼蟲校正死亡率達(dá)34%～56%，噴菌后引入試蟲的感染效果比引入試蟲后再噴菌的處理好。噴菌后180 d，平均校正死亡率超過(guò)70%；至噴菌后300 d，平均校正死亡率超過(guò)80%。但各處理間差異不顯著。可見綠僵菌對(duì)油茶象幼蟲具有顯著的控制效果，這對(duì)生產(chǎn)上利用綠僵菌防治油茶象幼蟲具有現(xiàn)實(shí)的指導(dǎo)意義。

通過(guò)模擬油茶象幼蟲自然鉆入土壤的過(guò)程，在其之前和之后噴菌開展防治試驗(yàn)，以死亡率為指標(biāo)評(píng)價(jià)其防治效果。噴菌后30 d檢查效果時(shí)，發(fā)現(xiàn)噴菌后引入試蟲的感染效果比噴菌前引入試蟲的處理效果好，這可能是由于引入試蟲后進(jìn)行地表噴菌，其孢子多數(shù)分布在表土層，試蟲與綠僵菌孢子的接觸機(jī)率相對(duì)較?。欢乇韲娋笤僖朐囅x，幼蟲在自然鉆入土壤過(guò)程中接觸到表土層內(nèi)綠僵菌孢子的機(jī)率更高。但噴菌后180 d、300 d的油茶象幼蟲死亡率情況看，不同處理間的校正死亡率差異不顯著，并隨著時(shí)間延長(zhǎng)，校正死亡率逐漸提高。這可能是隨著時(shí)間的推移，更多綠僵菌孢子會(huì)隨著雨水滲入更深層土壤從而接觸蟲體，或者前期感染的僵蟲孢子在土壤中成功定殖且逐漸擴(kuò)散，從而起到了對(duì)幼蟲的持續(xù)感染作用。

許多研究表明，綠僵菌在土壤中宿存期較長(zhǎng)[10-11，13，16]，對(duì)降低局部害蟲蟲口密度、控制土棲害蟲的潛力很大[16]。有學(xué)者指出，評(píng)價(jià)蟲生真菌的作用，不應(yīng)以衡量化學(xué)農(nóng)藥對(duì)靶標(biāo)害蟲的直接影響來(lái)簡(jiǎn)單衡量，其價(jià)值更在于其持效性[17]，Samueles等[18]研究表明利用綠僵菌防治蠐螬時(shí)，菌后200 d仍有足夠的帶菌量將蠐螬控制在較低水平，樊美珍等[11，16]研究綠僵菌對(duì)桃小食心蟲的控制潛力時(shí)也發(fā)現(xiàn)，盡管綠僵菌的分生孢子在土壤中隨著時(shí)間大幅下降，但直至接種后131 d仍有90%以上的死亡率。綠僵菌在土壤中的這種宿存能力不僅延長(zhǎng)了它的存活期，也保持了其較強(qiáng)的對(duì)靶標(biāo)害蟲的致病力。油茶象雖然是蛀果害蟲，但其老熟幼蟲出果后在土壤中滯育時(shí)間長(zhǎng)達(dá)1 a以上直至第3年化蛹羽化出成蟲[5，15]，能在羽化前控制其林間蟲口密度，對(duì)減輕油茶象的危害有重要作用。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，綠僵菌對(duì)油茶象幼蟲具有持續(xù)控制的效能。生產(chǎn)上最好掌握在老熟幼蟲鉆出果實(shí)掉落林下自然入土的高峰期之前進(jìn)行噴撒綠僵菌防治，或結(jié)合油茶林墾復(fù)等措施適時(shí)施菌，可望取得良好的控制效果。由于油茶是異花蟲媒授粉樹種，自花和風(fēng)媒授粉坐果率很低，僅為0%～3%[2]。因此，不論何時(shí)施菌，一定要避開油茶花期，以免影響傳粉昆蟲。關(guān)于林間最佳施菌時(shí)期的確定，菌液或菌粉等不同用菌方式的控制效果仍有待進(jìn)一步深入研究。

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Study on Sustainable Control ofCurculiochinensisLarvae byMetarhiziumanisopliaein Field

HE Xue-you1，CAI Shou-ping1，ZHAN Zu-ren2，ZENG Li-qiong1，HAN Guo-yong3，LIN Yan-sheng1

(1.FujianAcademyofForestry，TheKeyLaboratoryofTimberForestBreedingandCultivationforMountainousAreasinSouthern，F(xiàn)uzhou350012，F(xiàn)ujian，China； 2.YouxiForestryBureau，Youxi365100，F(xiàn)ujian，China； 3.FuzhouBotanicalGarden，F(xiàn)uzhou350012，F(xiàn)ujian，China)

In this paper，formulation of two screenedMetarhiziumanisopliaestrains with high virulence againstCurculiochinensis，was used as control agent in the field for testing control effect using four methods.The results showed that，afterM.anisopliaesuspension was sprayed on the soil，the adjusted mortality ofC.chinensislarvae in the soil were increased with time.The adjusted mortality ofC.chinensislarvae 30 days after the suspension sprayed were 34%～56% for different treatment，the control effect of the treatment that larvae were introduced to soil after spraying conidia suspension were significantly higher than the treatment that larvae were introduced before spraying.The adjusted mortality of different treatments 180 days after the suspension sprayed were over 70%，and there were no significant different between different treatment.The adjusted mortality of different treatments 300 days after the suspension sprayed were over 80%，and there were no significant different between different treatments.And there were no significant difference between the two superior strains.The results of field test showed thatM.anisopliaehas the potential of sustainable control ofC.chinensislarvae in the soil.

Curculiochinensis；Metarhiziumanisopliae；field test；adjusted mortality

2015-09-22；

2015-11-16

福建省自然基金項(xiàng)目(金龜子綠僵菌對(duì)油茶象幼蟲致病力的研究，2013J01094)；福建省省屬公益類科研院所基本科研專項(xiàng)(2014R1011-2、閩林研[2013]38號(hào))

何學(xué)友(1963—)，男，四川大竹人，福建省林業(yè)科學(xué)研究院教授級(jí)高級(jí)工程師，從事森林病蟲害綜合控制研究。E-mail：fjhexueyou@126.com。

10.13428/j.cnki.fjlk.2015.04.004

S763.306.4；S794.4

A

1002-7351(2015)04-0018-05