MiR-126在大鼠心肌缺血再灌注早期的表達(dá)及抗凋亡作用

鄭華峰 陶晶 張斌 王純 吳淳

MiR-126在大鼠心肌缺血再灌注早期的表達(dá)及抗凋亡作用

鄭華峰 陶晶 張斌 王純 吳淳

目的 探討miR-126在大鼠心肌缺血再灌注（I/R）早期的表達(dá)及抗凋亡作用。方法 48只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)（Sham）、I/R 2 h、I/R 4 h、I/R 6 h組，每組12只大鼠，比較各組缺血區(qū)心肌細(xì)胞凋亡蛋白水平及miR-126表達(dá)水平。構(gòu)建重組腺病毒rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126載體，24只SD大鼠隨機(jī)分為：①I/R組：大鼠轉(zhuǎn)染空白病毒后I/R 2 h；②I/R+miR-126組：大鼠轉(zhuǎn)染 rAAV9-ZsGreen-premiR-126后I/R 2 h，再次比較各組缺血區(qū)心肌細(xì)胞凋亡蛋白水平。結(jié)果 與Sham組相比，I/R 2 h、4 h、6 h組大鼠心肌缺血區(qū)miR-126表達(dá)進(jìn)行性降低（P<0.05），非缺血區(qū)miR-126表達(dá)進(jìn)行性升高（P<0.05）；心肌凋亡蛋白BAX及CASPASE-3表達(dá)水平升高（P<0.05），抗凋亡蛋白BCL-2表達(dá)水平降低（P<0.05）。與I/R組相比，I/R+miR-126干預(yù)組心肌凋亡蛋白BAX及CASPASE-3表達(dá)水平明顯減少，抗凋亡蛋白BCL-2表達(dá)水平增加（P<0.05）。結(jié)論 在I/R早期大鼠心肌缺血區(qū)miR-126表達(dá)隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)進(jìn)行性下降，并伴隨心肌細(xì)胞凋亡進(jìn)展；過(guò)表達(dá)miR-126可減少I/R導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡，發(fā)揮保護(hù)心功能的作用。

miR-126；心肌缺血再灌注；心肌缺血區(qū)；凋亡蛋白；細(xì)胞凋亡

缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）損傷可以加重組織、器官的功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷。探索I/R損傷的機(jī)制，做到既能盡早恢復(fù)缺血組織的血流，又減輕或防止I/R損傷的發(fā)生，是包括冠心病在內(nèi)的缺血性疾病治療中急需解決的重要問(wèn)題[1,2]。I/R損傷中細(xì)胞凋亡是最重要環(huán)節(jié)之一[3]。1994年Gottlieb等[4]首次報(bào)道在兔心肌I/R損傷模型中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡；隨后Fliss等[5]報(bào)道持續(xù)缺血過(guò)程存在細(xì)胞凋亡，但I(xiàn)/R過(guò)程中細(xì)胞凋亡尤為顯著。細(xì)胞凋亡的水平一定程度上反映I/R損傷的嚴(yán)重程度，抑制I/R過(guò)程中細(xì)胞凋亡的發(fā)生發(fā)展，則可能防止或減輕I/R損傷的發(fā)生，從而為冠心病的治療帶來(lái)新的希望。MicroRNA（miRNA）分子是一類內(nèi)源性、非編碼、單鏈RNA，通過(guò)結(jié)合靶基因的mRNA的3非翻譯區(qū)（3′-UTR），介導(dǎo)靶基因mRNA降解，抑制或增強(qiáng)其蛋白質(zhì)翻譯，從而調(diào)控轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá)[6-8]。目前研究已發(fā)現(xiàn)許多miRNAs參與細(xì)胞增殖、分化、發(fā)育及凋亡等復(fù)雜的生物進(jìn)程[9-11]。 MiR-126是一種來(lái)源于Egfl7第7個(gè)內(nèi)含子的保守型內(nèi)含子miRNA，主要在哺乳動(dòng)物的內(nèi)皮細(xì)胞（endothelial cells，ECs）及漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（plasmacytoid dendritic cells，pDCs）內(nèi)表達(dá)，參與血管的生成及癌細(xì)胞的增殖和遷移[12-14]。Nazari-Jahantigh等[15]觀察到大鼠缺血30 min再灌注4 h的心肌組織中miR-126表達(dá)下降。以上研究提示，miR-126在I/R早期心肌表達(dá)異常，并可能參與I/R過(guò)程中的細(xì)胞凋亡。

本研究以心肌I/R早期大鼠模型為研究對(duì)象，觀察I/R早期心肌細(xì)胞中miR-126的表達(dá)變化及心肌細(xì)胞凋亡水平。進(jìn)一步通過(guò)構(gòu)建重組腺病毒rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126載體，過(guò)表達(dá)rniR-126表達(dá)后觀察其對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響，從而為臨床I/R損傷的治療提供新的思路。

1 材料與方法

1.1試劑和儀器總RNA提取試劑Trizol（Invitrogen，USA）、反轉(zhuǎn)錄試劑盒 TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit（Ambion，Austin，TX），Quanti－Tect SYBR Green PCR Kit（Qiagen，German），QuantiTect SYBR Green PCR Kit（Takara，Japan），PCR擴(kuò)增引物由Invitrogen廣州公司合成，重組腺病毒rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126載體及空白對(duì)照病毒載體購(gòu)自蘇州吉瑪公司，兔抗大鼠CASPASE-3、BAX、BCL-2及GAPDH單克隆抗體購(gòu)自Abcam。普通 PCR 儀（BIO-RAD，USA），NanoDrop 2000c紫外 分 光 光 度 計(jì)（ThermoScientific，USA），LightCycler480熒光定量 PCR 儀（Roche，Germany）等。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 SPF級(jí)雄性SD大鼠72只，體重220～250 g，由南京大學(xué)動(dòng)物模式研究所提供并在該中心飼養(yǎng)。飼養(yǎng)環(huán)境為清潔級(jí)，溫度維持在20℃～22℃。動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，每籠2只，飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水，每周換塾料、消毒籠具2次。動(dòng)物使用符合南京大學(xué)動(dòng)物管理委員會(huì)管理?xiàng)l例。隨機(jī)分組為（n=15）：①Sham組：SD大鼠僅開胸，不進(jìn)行冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎，6 h后處死；②I/R 2 h組：SD大鼠開胸并進(jìn)行I/R，2 h后處死；③I/R 4 h組：SD大鼠開胸并進(jìn)行I/R，4 h后處死；④I/R 6 h組：SD大鼠開胸并進(jìn)行I/R，6 h后處死；⑤I/R組：大鼠轉(zhuǎn)染空白病毒后I/R 2 h；⑥I/R+miR-126組：大鼠轉(zhuǎn)染rAAV9-ZsGreen-premiR-126后I/R 2 h。

1.3 動(dòng)物模型制備 參考文獻(xiàn)建立心肌缺血再灌注模型[16,17]。行頸部正中切開術(shù)分離氣管，插氣管插管連接動(dòng)物呼吸機(jī)（BL-420生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司），同時(shí)測(cè)定心率（HR）、心律和心電圖（ECG）ST段。沿胸骨正中線切開皮膚，從胸骨左緣剪斷第3、4兩肋骨，用小開心器撐開切口，暴露心臟，在肺動(dòng)脈圓錐與左心房間找出左冠狀動(dòng)脈前降支，用無(wú)創(chuàng)縫合絲線置于左冠狀動(dòng)脈前降支起始部下2 mm處備用，將絲線兩端套一小塑料墊片，再穿入一聚乙烯小管以形成環(huán)路，穩(wěn)定10 min后輕輕抽緊絲線兩端，推套管緊貼心壁以阻斷左冠狀動(dòng)脈血流，以心電圖Q導(dǎo)聯(lián)上ST段弓背上抬 0.1 mV或T波高聳、心尖部心肌顏色變暗紅色為完全結(jié)扎標(biāo)志。

1.4 RNA提取步驟 在每1 ml Trizol試劑加入100 mg組織標(biāo)本中，冰上充分裂解，移液槍輕輕吹打細(xì)胞。將裂解后的組織標(biāo)本加入eppendorf管中，劇烈震蕩30 s，靜置5 min。加入氯仿0.2 ml，充分混勻后室溫靜置5 min。在4℃，以12 000 r/min離心15 min，吸去上清后轉(zhuǎn)入新的eppendorf中，加入異丙醇0.5 ml，混勾后放置于4℃冰箱10 min，再次在4℃，12 000 r/min條件下離心10 min，去上清后留取沉淀。加入1 ml 75%已經(jīng)預(yù)冷的乙醇，震蕩洗滌沉淀RNA，12 000 r/min離心5 min，吸去上清后空氣干燥10 min。加入4℃ DEPC水以充分溶解。

1.5 Quantitative real-time PCR（qRT-PCR）檢測(cè)大鼠心肌 miR-126、Caspase-3、Bcl-2及 Bax的表達(dá)量 按照QuantiTect SYBR Green PCR Kit試劑盒說(shuō)明書，以合成的cDNA作為模版在LightCycler480Ⅱ熒光定量PCR儀上進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)。PCR反應(yīng)體系為：模版cDNA 1 μl，miR-126特異性引物0.4 μl，10×miScript Universal Primer 2 μl，2×QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix 10 μl，miR-126上游引物為 5′-TACCAAAAGTAATAATGTGCTG-3′，下游引物為Qiagen公司試劑盒提供的通用引物；以 U6為作為內(nèi)參，U6上游引物為 5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′， 下游 引 物 為 5′-ACGCTTCACGAATTTGCGT-3′，加 RNase-free water 7.4 μl至總體積 20 μl。

按照SYBR premix Ex TaqTMⅡ PCR Kit試劑盒說(shuō)明書，以合成的cDNA作為模版在LightCycler480Ⅱ熒光定量PCR儀上進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)。普通基因反應(yīng)體系為：模版 cDNA 1 μl，SYBR premix Ex TaqTM Ⅱ PCR Mix 10 μl，正、反向引物（20 μmol） 共 1.6 μl，Caspase-3、Bcl-2 及 Bax 上下游引物見表1，加RNase-free water 7.4 μl至總體積20 μl。反應(yīng)條件為：95 ℃ 30 s，隨后 95 ℃ 5 s，55 ℃30 s，72℃ 15 s，共40個(gè)循環(huán)。采用 ΔΔCT分析方法計(jì)算qPCR儀所得數(shù)據(jù)[18]。

表1 基因引物信息

1.6 Western blot檢測(cè)心肌細(xì)胞CASPASE-3、BAX及BCL-2蛋白的表達(dá)特征 配制組織裂解緩沖液［0.1 mol/L Tris Cl（pH 7.4），EDTA 1 mmol/L，1%的 Triton X-100，0.3 mol/L Aprotinin，1 mmol/L PMSF］。分別將液氮內(nèi)凍存的各組心肌組織取出120～150 mg，在液氮內(nèi)研磨成粉末后倒入一塑料管中，加入1 ml溶液懸浮，冰上勻漿3次，每次10 s，超聲處理3次。13 000 r/min離心30 min，上清即為所需蛋白。蛋白定量后進(jìn)行SDS-PAGE電泳并轉(zhuǎn)膜。蛋白轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，以5%脫脂奶粉TBS配制液封閉后，膜置于含兔抗大鼠CASPASE-3抗體（ab17815，1∶500 稀釋）、BAX 抗體（ab32503，1∶1000稀釋）及 BCL-2抗體（ab117115，1∶500稀釋）溶液中，室溫?fù)u床反應(yīng) 2 h，TBST［154 mmol/L NaCl，10 mmol/L Tris（pH 9.5），0.05%聚山梨酯］洗膜，并將膜置于相應(yīng)二抗溶液中室溫?fù)u床反應(yīng)2 h，用ECL試劑盒顯色，X線膠片顯影。用 NIH Image軟件對(duì)X線膠片上陽(yáng)性條帶實(shí)施掃描，測(cè)定吸光度值。所有實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 17.0。所有計(jì)量資料均以±s表示，不同實(shí)驗(yàn)組間比較采用兩個(gè)樣本獨(dú)立t檢驗(yàn)。結(jié)果判斷以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 缺血再灌注大鼠建模情況 左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎部位以下心肌顏色變蒼白，搏動(dòng)減弱，心電圖ST段明顯抬高（圖1）。缺血45 min后解開活結(jié)，恢復(fù)前降支血流，30 min后可觀察到室性早搏、室性心動(dòng)過(guò)速、室顫等再灌注心律失常，發(fā)生率為72%。手術(shù)大鼠共72只，存活60只，存活率83%。死于心室顫動(dòng)5只，死于心臟驟停3只，死于腹腔大出血2只，死于麻醉過(guò)量1只，死于術(shù)后急性左心衰1只。

2.2 I/R大鼠心肌不同區(qū)域miR-126表達(dá)特征采用qRT-PCR方法檢測(cè)miR-126的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在缺血區(qū)I/R 2 h、4 h、6 h組miR-126的表達(dá)分別為 Sham 組的（0.82±0.18）倍、（0.60±0.15）倍、（0.42±0.08）倍（P<0.05），見圖 2A；在非缺血區(qū)則隨著再灌注時(shí)間延長(zhǎng)，miR-126表達(dá)逐漸升高，I/R 2 h、4 h、6 h miR-126的表達(dá)分別是Sham組的（1.38±0.14）倍、（1.89±0.15）倍、（2.43±0.25）倍，與 Sham 組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見圖2B。上述結(jié)果提示，在心肌缺血區(qū)miR-126的表達(dá)量隨時(shí)間依賴性降低，而非缺血區(qū)心肌miR-126的表達(dá)量隨時(shí)間依賴性增加。

2.3 I/R大鼠心肌凋亡調(diào)控相關(guān)因子BCL-2、BAX及CASPASE-3的表達(dá)特征 與Sham組比較，I/R 2 h、4 h、6 h后大鼠心肌缺血區(qū)Bcl-2 mRNA表達(dá)下調(diào)分別為（0.85±0.15）倍（P<0.05）、（0.65±0.11）倍（P<0.05）、（0.43±0.08）倍（P<0.05），見圖 3A；Bax mRNA表達(dá)上調(diào)分別為（1.57±0.11）倍（P<0.05）、（2.46±0.24）倍（P<0.05）、（3.21±0.33）倍（P<0.05），見圖3B；Caspase-3 mRNA表達(dá)上調(diào)分別為（1.31±0.08）倍（P<0.05）、（1.95±0.28）倍（P<0.05）、（2.78±0.38）倍（P<0.05），見圖 3C。經(jīng) Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，I/R大鼠心肌凋亡調(diào)控相關(guān)因子BCL-2、BAX及CASPASE-3蛋白的表達(dá)與mRNA一致，見圖3D。

2.4 轉(zhuǎn)染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126前后大鼠心肌miR-126的特征 I/R組大鼠心肌組織檢測(cè)到較低水平miR-126表達(dá)。與I/R組比較，轉(zhuǎn)染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126 14 d后心肌組織可觀察到 miR-126的表達(dá)明顯升高，見圖4A。經(jīng)qRT-PCR方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染 rAAV9-ZsGreenpre-miR-126后大鼠心肌miR-126的表達(dá)量為轉(zhuǎn)染前的（12.21±0.58）倍，見圖 4B。

2.5 I/R大鼠轉(zhuǎn)染 rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126前后心肌凋亡調(diào)控相關(guān)因子BCL-2、BAX及CASPASE-3的表達(dá)特征 與I/R組比較，轉(zhuǎn)染rAAV9-ZsGreen-premiR-126后大鼠心肌缺血區(qū)Bcl-2 mRNA 水平表達(dá)增高為（2.67±0.38）倍（P<0.05），Bax mRNA 表達(dá)水平下調(diào)為（0.46±0.08）倍（P<0.05），Caspase-3 mRNA 表達(dá) 水 平 下 調(diào) 為（0.62±0.12）倍（P<0.05），見圖 5A。經(jīng) Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染 rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126前后I/R大鼠心肌凋亡調(diào)控相關(guān)因子BCL-2、BAX及CASPASE-3蛋白的表達(dá)與mRNA一致，見圖5B。

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道I/R早期即可出現(xiàn)細(xì)胞凋亡，細(xì)胞凋亡是I/R損傷過(guò)程的重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞凋亡的水平一定程度上反映I/R損傷的嚴(yán)重程度，因此抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生、發(fā)展，是減輕I/R損傷的重要手段。本研宄發(fā)現(xiàn)，Sham組大鼠心肌形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)清晰，心肌纖維排列整齊有序；而I/R處理后缺血區(qū)大鼠心肌組織細(xì)胞漿深染，細(xì)胞核不規(guī)則，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，且上述改變隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)而進(jìn)展，而非缺血區(qū)組織形態(tài)未見異常改變，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。Caspase-3是經(jīng)典的細(xì)胞凋亡的指標(biāo)，當(dāng)I/R發(fā)生時(shí)，細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)傳遞信號(hào)，激活調(diào)控細(xì)胞凋亡的基因，細(xì)胞即按死亡程序自動(dòng)走向死亡[19,20]。本研究發(fā)現(xiàn)，在缺血45 min再灌注2 h后即可觀察到心肌缺血區(qū)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，抑制凋亡作用的Bcl-2水平降低，促凋亡因子Caspase-3及Bax表達(dá)升高，提示I/R 2 h后即可出現(xiàn)細(xì)胞凋亡，且隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)Bcl-2水平進(jìn)一步降低，Caspase-3及Bax水平進(jìn)一步升高，提示再灌注時(shí)間延長(zhǎng)缺血區(qū)細(xì)胞凋亡加重，而非缺血區(qū)再灌注未有明顯細(xì)胞凋亡。

本研究以rAAV9為載體，ZsGreen為焚光標(biāo)記，pre-miR-126為目的基因在體內(nèi)轉(zhuǎn)染大鼠心肌。實(shí)驗(yàn)觀察到rAAV9轉(zhuǎn)染后7 d左右miR-126開始表達(dá)，14 d為表達(dá)高峰，與文獻(xiàn)[21]報(bào)道一致。本研究結(jié)果提示，rAAV9可以高效、穩(wěn)定地在心肌表達(dá)，且作用安全。

前期研究報(bào)道m(xù)iR-126在I/R損傷中表達(dá)異常。Tang等[22]觀察到，在大鼠缺血30 min再灌注24 h心肌組織中miR-126表達(dá)下降。Ren等[23]則報(bào)道，小鼠缺血30 min再灌注24 h時(shí)miR-126表達(dá)則上調(diào)。本研究發(fā)現(xiàn)，大鼠缺血45 min再灌注心肌缺血區(qū)miR-126表達(dá)降低，且在2 h、4 h、6 h呈進(jìn)行性下降，并伴隨細(xì)胞凋亡進(jìn)展。因此我們?cè)O(shè)想，I/R早期缺血區(qū)miR-126降低可能參與了細(xì)胞凋亡過(guò)程。MiR-126在腫瘤領(lǐng)域被廣泛報(bào)道參與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，在腎臟的I/R研宄中也被報(bào)道參與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡[24-26]。Dong等[27]觀察到進(jìn)行缺血預(yù)處理后，再結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈6 h，之前觀察到梗死區(qū)miR-126降低的趨勢(shì)得以改善，梗死區(qū)凋亡細(xì)胞減少，梗死區(qū)面積減少。Cheng等[28]報(bào)道將大鼠心肌缺血預(yù)適應(yīng)處理后，心肌組織miR-126的表達(dá)增加，抑制miR-126表達(dá)后，缺血預(yù)適應(yīng)的心肌保護(hù)作用減弱。上述研究一致發(fā)現(xiàn)體內(nèi)過(guò)表達(dá)miR-126，可明顯改善心肌細(xì)胞凋亡。這進(jìn)一步支持我們的設(shè)想，即I/R早期在大鼠心肌缺血區(qū)，rniR-126表達(dá)降低可能與細(xì)胞凋亡有關(guān)。

綜上所述，miR-126在急性心肌I/R損傷中的保護(hù)作用可能來(lái)自對(duì)缺血心肌細(xì)胞凋亡的抑制，并且效應(yīng)具有劑量依賴性，miR-126的抗凋亡效應(yīng)影響了Caspase-3的激活。其具體的分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

圖1 正常與I/R大鼠心電圖

圖2 I/R大鼠心肌不同區(qū)域miR-126的表達(dá)的特征

圖3 I/R大鼠心肌凋亡調(diào)控相關(guān)因子BCL-2、BAX及CASPASE-3的表達(dá)特征

圖4 轉(zhuǎn)染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126前后大鼠心肌miR-126的特征

圖5 I/R大鼠轉(zhuǎn)染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126前后心肌凋亡調(diào)控相關(guān)因子BCL-2、BAX及CASPASE-3的表達(dá)特征

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The expression and effect of anti-apoptosis of microRNA-126 in rat myocardium during early phase of ischemia reperfusion

ZHENG Hua-feng，TAO Jing，ZHANG Bin，et al.Department of Cardiology，Peking University Shenzhen Hospital，Shenzhen 518036，China

Objective To investigate the expression of microRNA-126 （miR-126）and its protective effects in rat myocardium during early phase of ischemia-reperfusion.Methods 48 SD rats were randomly divided into Sham group（control group），I/R 2 h group，I/R 4 h group，I/R 6 h group（n=12）.To compare the expression level of miR-126 and level of cell apoptosis between Sham group and the different I/R time point groups.rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126 was successfully constructed and 24 SD rats were divided into two groups randomly（n=12）：⑴I/R group：rats were treated with I/R after transfected with rAAV9-ZsGreen by coronary injection.⑵I/R+miR-126 group：rats were dealt with I/R after transfected with rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126 by coronary injection.To compare again the expression level of miR-126 and level of cell apoptosis in the two groups.Results MiR-126 was down-regulated in the ischemic area after I/R compared with the Sham group at 2 h，4 h and 6 h，but it was up-regulated in the non-ischemic area（P<0.05）.The level of CASPASE-3 and BAX was increased in the I/R group than the Sham group at 2 h，4 h and 6 h after I/R，but the level of BCL-2 was decreased when compared with the Sham group.After tranfected with rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126，the level of CASPASE-3 and BAX were decreased in I/R+miR-126 group by comparing with the I/R group，while the level of BCL-2 was increased when compared with the I/R group.Conclusion The expression of miR-126 was downregulated and cell apoptosis was increased in ischemic area at the early phase of I/R.Over-expression of miR-126 can inhibit cell apoptosis and protect cardiac function.

MiR-126；I/R；Ischemic area；Apoptosis protein；Cell apoptosis

WU Chun，E-mail：wuchun2012@163.com

2015-07-16）

518036 廣東省深圳市，北京大學(xué)深圳醫(yī)院心內(nèi)科

吳淳，E-mail：wuchun2012@163.com

10.3969/j.issn.1672－5301.2015.11.020

Q95-33；R542.2

A

1672-5301（2015）11-1041-06