桃擬莖點(diǎn)霉對(duì)孕酮的生物轉(zhuǎn)化研究

杜　剛，王忠誠，楊紅梅，張廣求，楊海英*（.云南民族大學(xué) 民族藥資源化學(xué)國家民族事務(wù)委員會(huì) 教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500；.云南民族大學(xué) 化學(xué)與環(huán)境學(xué)院，云南 昆明 650500）

桃擬莖點(diǎn)霉對(duì)孕酮的生物轉(zhuǎn)化研究

杜剛1，王忠誠1，楊紅梅2，張廣求1，楊海英2*
（1.云南民族大學(xué) 民族藥資源化學(xué)國家民族事務(wù)委員會(huì) 教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650500；2.云南民族大學(xué) 化學(xué)與環(huán)境學(xué)院，云南 昆明 650500）

研究了一株桃擬莖點(diǎn)霉（Phomopsis amygda1e）對(duì)孕酮的生物轉(zhuǎn)化，并對(duì)該轉(zhuǎn)化菌株的形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)進(jìn)行鑒定，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物經(jīng)分離純化后，運(yùn)用核磁共振（NMR）、質(zhì)譜（MS）、紅外光譜（IR）分析進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。該菌株轉(zhuǎn)化孕酮得到2個(gè)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物分別為15β-羥基孕酮和6β，15β-二羥基孕酮。結(jié)果表明，桃擬莖點(diǎn)霉具有轉(zhuǎn)化甾體的能力，對(duì)孕酮進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化的主要產(chǎn)物是15β-羥基甾體衍生物。

生物轉(zhuǎn)化；桃擬莖點(diǎn)霉；孕酮；鑒定

甾體藥物是全世界僅次于抗生素的第二大類藥物，現(xiàn)已批準(zhǔn)的甾體藥物超過300種，孕酮為甾體藥物中的孕激素類，具有促進(jìn)子宮壁發(fā)育和促進(jìn)乳腺發(fā)育等作用。1952年美國普強(qiáng)公司利用黑根霉轉(zhuǎn)化孕酮進(jìn)行11位羥基化并實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，這一工作使可的松大規(guī)模應(yīng)用于臨床成為可能。

微生物轉(zhuǎn)化具有高效、專一及反應(yīng)條件溫和的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥原料的合成與功能修飾［1］。微生物轉(zhuǎn)化甾體化合物羥基化，具立體選擇性和區(qū)域選擇性，微生物轉(zhuǎn)化在甾體藥物工業(yè)的研究及生產(chǎn)中具有重要的地位［2-3］。在甾體微生物轉(zhuǎn)化中羥基化主要由真菌完成，側(cè)鏈降解則主要利用細(xì)菌［4］。文獻(xiàn)報(bào)道15α-羥基甾體有重要的生理活性和藥用價(jià)值，它是合成避孕藥的重要中間體，用雅致小克銀漢霉轉(zhuǎn)化非那雄胺15α-羥基化產(chǎn)率達(dá)80%，15α-羥基化的非那雄胺可作為生產(chǎn)4-aza-steroids的醫(yī)藥中間體，4-aza-steroids為5α-還原酶抑制劑，是一類重要的治療良性前列腺增生、男性禿頂、女性多毛等癥狀的藥物［5-6］。甾體化合物15β-羥基化的研究較少，PEART P C等［7］以絲狀真菌轉(zhuǎn)化睪酮15β-羥基化，JANECZKO T等［8］以Didymosphearia igniariaKCH 6670轉(zhuǎn)化孕酮15β-羥基化，但專一性較差。

發(fā)掘新的轉(zhuǎn)化菌株是甾體工業(yè)發(fā)展的重要課題，本研究從滇重樓根狀莖中分離篩選到一株能轉(zhuǎn)化甾體化合物的桃擬莖點(diǎn)霉（Phomopsis amygda1e），對(duì)孕酮的15β-羥基化具有較好專一性。目前少見桃擬莖點(diǎn)霉生物轉(zhuǎn)化甾體化合物的報(bào)道，通過新甾體轉(zhuǎn)化菌株的發(fā)掘，研究結(jié)果可為設(shè)計(jì)和開發(fā)甾體藥物提供技術(shù)支持。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

1.1.1實(shí)驗(yàn)菌株

轉(zhuǎn)化菌株分離自滇重樓根狀莖，為實(shí)驗(yàn)室保藏菌株，轉(zhuǎn)化菌株實(shí)驗(yàn)室編號(hào)：YNCA1557。

1.1.2試劑

孕酮：江蘇省鹽城信誼醫(yī)藥化工有限公司，經(jīng)核磁共振（nuc1ear magnetic resonance，NMR）及高效液相色譜（high performance 1iquid chromatography，HPLC）檢測(cè)，純度＞98%；聚合酶鏈反應(yīng)（po1ymerase chain reaction，PCR）試劑：上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司；其他常用試劑為國產(chǎn)分析純。

1.1.3培養(yǎng)基

斜面培養(yǎng)基采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂（potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯20.0%，葡萄糖2.0%，瓊脂2.0%，pH自然。

種子培養(yǎng)基：馬鈴薯20.0%，蔗糖2.0%，pH自然。

孕酮轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基：NaNO30.3%，K2HPO40.1%，MgSO4·7H2O 0.05%，KC10.005%，F(xiàn)eSO4·7H2O0.0001%，葡萄糖2.0%，孕酮0.1%，吐溫-80 0.2%，pH自然。

1.2儀器與設(shè)備

SW-CJ-ZFD超凈工作臺(tái)：蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；LDZX-40BI電熱壓力蒸汽滅菌器：上海申安醫(yī)療器械廠；HP-900恒溫培養(yǎng)箱：上海一恒科技有限公司；ZHWY-2102恒溫培養(yǎng)振蕩器：上海智城分析儀器制造有限公司；AR224 CN電子天平：奧豪斯國際貿(mào)易上海有限公司；KS-600D超聲波清洗器：寧波科勝儀器廠；RⅡ旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：瑞士BUCHI公司；Agi1ent 1100分析型高效液相色譜儀：美國安捷倫公司；FTS-135型紅外光譜儀：美國Bio-Rad公司；240PC UV/vis光譜儀：日本島津公司；VG Auto Spec-3000型質(zhì)譜儀：英國VG公司；Bruker AV-400型核磁共振儀：德國布魯克公司。

1.3方法

1.3.1菌株鑒定

形態(tài)學(xué)鑒定：以PDA培養(yǎng)基通過插片培養(yǎng)，對(duì)轉(zhuǎn)化菌株進(jìn)行形態(tài)特征觀察，參考真菌鑒定手冊(cè)［9］和真菌志［10］進(jìn)行分類鑒定。

分子鑒定：按十六烷基三甲基溴化銨（hexadecy1trimethy-1ammonium bromide，CTAB）法提取脫氧核糖核酸（deoxyribonuc1eic acid，DNA）［11］，用1%瓊脂糖凝膠檢測(cè)DNA樣品的質(zhì)量和濃度。DNA樣品擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，送Invitrogen公司進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果在GeneBank進(jìn)行BLAST比對(duì)，登錄號(hào)為KF308686。結(jié)合形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)結(jié)果，確定轉(zhuǎn)化菌株的分類地位。

1.3.2ITS序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建

通過比較分子序列的同源性構(gòu)建進(jìn)化樹［12-13］。用B1ast軟件將測(cè)得的序列在GenBank數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行相似性搜索，選用同源性比較高的典型菌株的ITS序列作為參比對(duì)象，采用鄰接法（Neighbor-Joining）用MEGA 5軟件以ITS序列構(gòu)建鑒定菌株與參比菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.3.3放大發(fā)酵培養(yǎng)及轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的提取

配制5 L轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基，用250 mL錐形瓶分裝，每瓶加入100 mL培養(yǎng)基，經(jīng)121℃滅菌鍋滅菌后冷卻至室溫。將斜面培養(yǎng)基上的菌絲刮下，接種入種子培養(yǎng)基，置于恒溫?fù)u床，30℃、220 r/min培養(yǎng)5 d。將每10 mL種子培養(yǎng)基接種入轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基，置于恒溫?fù)u床，30℃、220 r/min培養(yǎng)7 d。

發(fā)酵液經(jīng)減壓抽濾后分為濾液和菌絲體兩個(gè)部分，用乙醇浸泡超聲提取菌絲體3次，過濾、合并乙醇浸提液，減壓濃縮；用乙酸乙酯萃取濾液3次，合并乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮；合并濾液液與菌絲體的粗提物，得到轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的總提取物。

1.3.4高效液相色譜（HPLC）分析檢測(cè)方法

發(fā)酵提取物孕酮轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的HPLC分析：稱取0.05 g總提取物，加入1 mL甲醇溶解，用0.45 μm過濾膜過濾。

HPLC分析檢測(cè)條件：Agi1ent Ec1ipse XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；檢測(cè)器：二級(jí)管陣列檢測(cè)器（diode array detector，DAD）；流動(dòng)相：甲醇/水=65∶35；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長：243 nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：5 μL。

1.3.5轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的分離與鑒定

將轉(zhuǎn)化產(chǎn)物提取物用甲醇溶解，利用硅膠柱層析進(jìn)行分離，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯體系。分離得到的化合物以核磁共振、紅外光譜（infrared spectrum，IR）、質(zhì)譜（mass spectrum，MS）分析等手段進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。

2　結(jié)果與分析

2.1轉(zhuǎn)化菌株的形態(tài)學(xué)鑒定

經(jīng)鑒定轉(zhuǎn)化菌株為擬莖點(diǎn)霉屬（Phomopsis），該菌的菌落及菌絲形態(tài)見圖1。由圖1可知，轉(zhuǎn)化菌株在PDA培養(yǎng)基生長5 d，已長滿平板（9 cm）。菌落較大，生長速度快，菌絲緊密，干燥，不透明，白色絮狀菌絲，分枝少，不易挑??；PDA培養(yǎng)基未產(chǎn)生孢子，在促孢培養(yǎng)基上也未產(chǎn)生孢子。

圖1　轉(zhuǎn)化菌株菌落及菌絲顯微形態(tài)Fig.1 Microstructure of colony and hyphae of the transformation strains

2.2菌株16S r RNA基因序列鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析

PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果見圖2。

圖2　桃擬莖點(diǎn)霉PCR擴(kuò)增電泳圖Fig.2 PCR amplification electrophoretogram ofP.amygdale

由圖2可知，桃擬莖點(diǎn)霉PCR擴(kuò)增轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（interna1 transcribed spacer，ITS）序列介于500～750 bp之間。ITS序列測(cè)序后進(jìn)行建樹分析，結(jié)果見圖3，經(jīng)成對(duì)系統(tǒng)發(fā)育距離（pairwise distance）計(jì)算，轉(zhuǎn)化菌株與桃擬莖點(diǎn)霉（Phomopsis amygda1e）SBJP Y007同源率100%，與桃擬莖點(diǎn)霉（Phomopsis amygda1e）P-090618同源率98%，與桃擬莖點(diǎn)霉（Phomopsis amygda1e）ATCC 42610同源率94%。轉(zhuǎn)化菌株與桃擬莖點(diǎn)霉P.amygda1iSBJP Y007同源性達(dá)到100%，因此確定轉(zhuǎn)化菌株為擬莖點(diǎn)霉屬的桃擬莖點(diǎn)霉（Phomopsis amygda1e）。

圖3　轉(zhuǎn)化菌株ITS序列的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 Phylogenetic tree of the transformation strain ITS sequence

2.3轉(zhuǎn)化結(jié)果HPLC分析

對(duì)桃擬莖點(diǎn)霉轉(zhuǎn)化孕酮發(fā)酵液的粗提物進(jìn)行高效液相色譜分析，結(jié)果見圖4。

圖4　桃擬莖點(diǎn)霉轉(zhuǎn)化孕酮發(fā)酵液的HPLC色譜圖Fig.4 HPLC chromatograms of progesterone fermentation broth by P.amygdali

由圖4可知，轉(zhuǎn)化反應(yīng)新出現(xiàn)2個(gè)主要峰，分別為2.253 min（Ⅰ號(hào)峰）和3.274min（Ⅱ號(hào)峰），底物孕酮出現(xiàn)在17.432 min（Ⅲ號(hào)峰），說明孕酮經(jīng)桃擬莖點(diǎn)霉轉(zhuǎn)化后生成新的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。

2.4轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)鑒定

將轉(zhuǎn)化產(chǎn)物提取物用甲醇溶解，正相硅膠（200～300目）30∶1裝柱上樣，石油醚：乙酸乙酯（體積比為10∶1、8∶1、6∶1、4∶1、2∶1、0∶1）梯度洗脫，分別得到化合物1和化合物2。

化合物1和化合物2經(jīng)核磁共振、質(zhì)譜、紅外光譜、紫外光譜分析，結(jié)果如下。

化合物1：白色粉末，收率62.1%，熔點(diǎn)204～205℃；紫外光譜最大吸收波長241 nm；紅外光譜主要基團(tuán)頻率為3 462 cm-1、1 698 cm-1、1 657 cm-1；核磁共振氫譜化學(xué)位移為5.74（1H，s，H-4），4.32（1H，m，H-15α），2.14（3H，s，H-21），1.21（3H，s，H-19），0.92（3H，s，H-18）；核磁共振碳譜化學(xué)位移為35.6（t，C-1），32.6（t，C-2），199.5（C=O，C-3），124.8 （d，C-4），171.1（s，C-5），32.6（t，C-6），31.0（t，C-7），31.6（d，C-8），54.9（d，C-9），38.6（s，C-10），20.8（t，C-11），40.0（t，C-12），44.5（s，C-13），64.6（d，C-14），70.1（d，C-15），36.1 （t，C-16），60.2（d，C-17），17.2（q，C-18），15.8（q，C-19），208.3 （C=O，C-20），31.4（q，C-21）；高分辨質(zhì)譜質(zhì)荷比為353 ［M+Na］+。分子式C21H30O3。與文獻(xiàn)［14］對(duì)照，化合物1鑒定為15β-羥基孕酮（15β-hydroxyprogesterone）。

化合物2：白色粉末，收率10.3%，熔點(diǎn)268～270℃；紫外光譜最大吸收波長242 nm。紅外光譜主要基團(tuán)頻率為3 623 cm-1、3 451 cm-1、1 696 cm-1、1 635 cm-1；核磁共振氫譜化學(xué)位移為6.03（1H，s，H-4），4.89（1H，t，J=5.9×（2），5.3；H-15α），4.82（1H，t，J=6.0×（2），H-6α），2.16（3H，s，H-21），1.27（3H，s，H-18），1.11（3H，s，H-19）；核磁共振碳譜化學(xué)位移為36.3（t，C-1），34.8（t，C-2），198.4（C=O，C-3），127.0 （d，C-4），169.9（s，C-5），67.4（d，C-6），42.3（t，C-7），36.9（d，C-8），45.8（d，C-9），39.3（s，C-10），21.5（t，C-11），40.4（t，C-12），44.3（s，C-13），55.9（d，C-14），69.6（d，C-15），37.4 （t，C-16），64.5（d，C-17），16.5（q，C-18），17.1（q，C-19），208.5 （C=O，C-20），31.8（q，C-21）；高分辨質(zhì)譜質(zhì)荷比為369 ［M+Na］+。分子式C21H30O4。與文獻(xiàn)［15-16］對(duì)照，化合物2鑒定為6β，15β-二羥基孕酮（6β，15β-dihydroxypregesterone）。

3　討論

從桃擬莖點(diǎn)霉菌株轉(zhuǎn)化孕酮的結(jié)果分析可以看出，孕酮被大部分轉(zhuǎn)化為15β-羥基孕酮，轉(zhuǎn)化專一性較好。孕酮發(fā)生羥基化的位置主要是15β位，還有少量發(fā)生在6β位上。轉(zhuǎn)化過程先出現(xiàn)15β-羥基孕酮，然后產(chǎn)生6β，15β-二羥基孕酮，推測(cè)6β，15β-二羥基孕酮是在15β-羥基孕酮的基礎(chǔ)上轉(zhuǎn)化形成的。在HPLC圖上仍可看到底物，可能是由于250 mL錐形瓶發(fā)酵的轉(zhuǎn)化過程不同步，而部分錐形瓶中的轉(zhuǎn)化不完全，以后的工作中將嘗試用發(fā)酵罐進(jìn)行轉(zhuǎn)化研究，保證轉(zhuǎn)化過程的同步性。同時(shí)作為15β-羥基的轉(zhuǎn)化，6β，15β-二羥基孕酮是轉(zhuǎn)化的副產(chǎn)物，需通過轉(zhuǎn)化過程的優(yōu)化，增強(qiáng)孕酮15β-羥基轉(zhuǎn)化專一性。

桃擬莖點(diǎn)霉轉(zhuǎn)化孕酮具有引入15β-羥基的立體選擇性，這在傳統(tǒng)的化學(xué)轉(zhuǎn)化中較難實(shí)現(xiàn)，很可能因?yàn)閮?nèi)生菌與宿主植物長期共生，由于其特殊的生活環(huán)境導(dǎo)致某些特殊的酶系產(chǎn)生，進(jìn)而可以催化特殊的反應(yīng)［17］。15β-羥基化的研究較少，微生物轉(zhuǎn)化甾體化合物15-羥基化更傾向發(fā)生α構(gòu)型，因此對(duì)15β-羥基甾體化合的活性研究較少，本研究尚需以該菌株對(duì)不同的甾體化合進(jìn)行轉(zhuǎn)化研究，以明確該菌株轉(zhuǎn)化甾體化合物的特點(diǎn)，為甾體藥物的研究和開發(fā)提供更多的選擇。

4　結(jié)論

本研究從實(shí)驗(yàn)室保藏菌株中篩選到一株能轉(zhuǎn)化甾體化合物的菌株，經(jīng)形態(tài)觀察和分子鑒定，鑒定為擬莖點(diǎn)霉屬桃擬莖點(diǎn)霉（P.amygda1e）；首次用桃擬莖點(diǎn)霉對(duì)孕酮進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化研究，發(fā)現(xiàn)桃擬莖點(diǎn)霉對(duì)孕酮的羥基化反應(yīng)具有立體選擇性，主要發(fā)生15β-羥基化反應(yīng)。后期將繼續(xù)開展該菌株對(duì)其他甾體化合物的生物轉(zhuǎn)化研究，同時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化及中試實(shí)驗(yàn)，為尋找和開發(fā)新的甾體藥物提供技術(shù)支持。

［1］李洋，邱智東，王偉楠.中藥生物轉(zhuǎn)化技術(shù)研究進(jìn)展［J］.中國釀造，2015，34（7）：15-19.

［2］BHATTI H N，KHERA R A.Bio1ogica1 transformations of steroida1 compounds:A review［J］.Steroids，2012，77（12）:1267-1290.

［3］FARAMARZI M A，SADIGHI A.Insights into biogenic and chemica1 productionofinorganicnanomateria1sandnanostructures［J］.Adv Colloid Interfac Sci，2013，189-190（3）:1-20.

［4］NASSIRI-KOOPAEI N，F(xiàn)ARAMARZI M A.Recent deve1opments in the funga1 transformation of steroids［J］.Biocatal Biotransfor，2015，33（1）: 1-28.

［5］SCHLOSSER D，IRRGANG S，SCHMAUDER H P.Steroid hydroxy1ation with free and immobi1ized ce11s of penici11ium-raistrickii in the presence of beta-cyc1odextrin［J］.Appl Microbiol Biotechnol，1993，39（1）: 16-20.

［6］MAO S，HU X，HUA B，et a1.15α-Hydroxy1ation of a steroid（13-ethy1-gon-4-en-3，17-dione）byPenici11ium raistrickiiinan ionic 1iquid/aqueous biphasic system［J］.Biotechnol Lett，2012，34（11）:2113-2117.

［7］PEART P C，REYNOLDS W F，REESE P B.The faci1e bioconversion of testosterone by a1ginate-immobi1ised fi1amentous fungi［J］.J Mol Catal B-Enzym，2013，95（11）:70-81.

［8］JANECZKO T，SWIZDOR A，DMOCHOWSKA-GLADYSZ J，et a1. Nove1 metabo1ites of dehydroepiandrosterone and progesterone obtained inDidymosphearia igniariaKCH 6670 cu1ture［J］.J Mol Catal B-Enzym，2012，82（2）:24-31.

［9］魏景超.真菌鑒定手冊(cè)［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1979.

［10］戚佩坤，姜子德，向梅梅.中國真菌志第三十四卷（擬莖點(diǎn)霉屬）［M］.北京：科學(xué)出版社，2007.

［11］BANJARA N，SUHR M J，HALLEN-ADAMS H E.Diversity of yeast and mo1d species from a variety of cheese types［J］.Curr Microbiol，2015，70（6）:792-800.

［12］JURJEVIC Z，PRTERSON S W，HORN B W.Aspergi11ussection versico1ores:ninenewspeciesandmu1ti1ocusDNAsequencebasedphy1ogeny ［J］.IMA Fungus，2012，3（1）:59-79.

［13］PEREIRA C G，SILVA J R O，BATISTA L R.Iso1ation and identification of toxigenic and non-toxigenic fungi in samp1es of medicina1 p1ants from the market［J］.Rev Bras Plant Med，2015，17（2）:262-266.

［14］CHOUDHARY M I，BATOOL I，SHAH S A，et a1.Microbia1 hydroxy-1ation of pregneno1one derivatives［J］.Chem Pharm Bull（Tokyo），2005，53（11）:1455-1459.

［15］FARAMARZI M A，TABATABAEI Y M，AMINI M，et a1.Microbia1 hydroxy1ation of progesterone withAcremonium strictum［J］.FEMS Microbiol Lett，2003，222（2）:183-186.

［16］MCMORRIS T C，LE P H，PREUS M W，et a1.Synthesis of dehydro-oogonio1，afema1e-activating hormone ofAch1ya:the progesterone route［J］.Steroids，1989，53（3-5）:345-361.

［17］付少彬，楊峻山，崔晉龍，等.藥用植物內(nèi)生菌對(duì)烏蘇酸的微生物轉(zhuǎn)化篩選［J］.中國藥學(xué)雜志，2011，46（16）：1225-1228.

Biotransformation of progesterone byPhomopsis amygda1i

DU Gang1，WANG Zhongcheng1，YANG Hongmei2，ZHANG Guangqiu1，YANG Haiying2*
（1.Key Laboratory of Chemistry in Ethnic Medicina1 Resources，State Ethnic Affairs Commission&Ministry of Education，Yunnan Minzu University，Kunming 650500，China；2.Schoo1 of Chemistry and Environment，Yunnan Minzu University，Kunming 650500，China）

Progesterone was transformed byPhomopsis amygda1e，whichwere identified with morpho1ogy and mo1ecu1ar bio1ogy.The transformed products were separated and purified，and their structures were identified by nuc1ear magnetic resonance，mass spectrum and infrared spectroscopy ana1ysis.Progesterone was transformed by the strain into 15β-hydroxy progesterone and 6β，15β-dihydroxy progesterone.The resu1ts showed that P.amygda1ehad the abi1ity of steroid transformation，and the main biotransformation products from progesterone were 15β-hydroxy steroida1 derivatives.

biotransformation；Phomopsis amygda1e；progesterone；identification

Q815

A

0254-5071（2015）12-0093-04

10.11882/j.issn.0254-5071.2015.12.020

2015-10-27

云南省教育廳科學(xué)研究基金重點(diǎn)項(xiàng)目（2013Z038，2015Z111）；國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（21462051）

杜剛（1973-），男，副教授，博士，研究方向?yàn)槲⑸锇l(fā)酵。

楊海英（1975-），女，副教授，碩士，研究方向?yàn)樘烊凰幬锛吧镛D(zhuǎn)化研究。