成人血細胞分析參考區(qū)間適用性驗證探討

楊銀芳，張 磊，何 超，李 琳，李燕平

（蘭州大學(xué)第一醫(yī)院檢驗科，甘肅蘭州730000）

在臨床實際工作中，臨床檢驗已經(jīng)成為醫(yī)生對臨床疾病的診斷、治療和預(yù)后進行判斷的重要監(jiān)測手段，檢驗項目的參考區(qū)間是臨床上進行相關(guān)疾病診斷及健康評估的重要依據(jù)。但其受種族、地域分布、環(huán)境、遺傳、飲食及年齡、性別等諸多因素的影響。因而參考區(qū)間的準(zhǔn)確性、可靠性、適用性與臨床疾病的診斷效率密切相關(guān)。實驗室只有給臨床科室提供一個準(zhǔn)確可靠的檢測項目參考區(qū)間，才能保證臨床醫(yī)生對健康體檢者或患者進行明確的診斷和有效的治療［1］，否則將會導(dǎo)致臨床醫(yī)生對疾病的誤診，甚至給予錯誤的治療。因此建立準(zhǔn)確、適用、可靠的參考區(qū)間，對于實驗室而言意義重大［2］。但參考區(qū)間的建立工作量和成本巨大，對參考個體的選擇也有嚴(yán)格的要求，僅依靠單個實驗室建立參考區(qū)間很難。美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）C28－A3［3］文件推薦臨床實驗室可以對生產(chǎn)廠商提供的或由其他實驗室制定的參考區(qū)間進行引用、轉(zhuǎn)移，并通過進行參考區(qū)間的適用性驗證，從而建立適合于本實驗室的參考區(qū)間。本研究采用WS／T 402［4］中的推薦方法對WS／T 405－2012［5］血細胞分析參考區(qū)間在臨床實驗室的適用性進行驗證、探討。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 嚴(yán)格按照納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，進行相關(guān)問卷調(diào)查、實驗室檢查、體格檢查及肝、膽、脾超聲檢查等［6－7］，共選取2014年8月蘭州大學(xué)第一醫(yī)院體檢中心的健康參考個體共40例，其中男20例、女20例，年齡20～60歲。本次研究只對成年人的生物參考區(qū)間進行探討。

1.2 儀器與試劑 Sysmex XE－2100血細胞分析儀（已經(jīng)過性能驗證和校準(zhǔn)）及原裝配套試劑、質(zhì)控物、校準(zhǔn)物。

1.3 方法

1.3.1 健康參考個體的選擇［8］納入條件：（1）自覺健康，無任何影響血細胞檢測結(jié)果的相關(guān)生理指征；（2）近期未進行飲食治療或服用藥物；（3）精神正常，無營養(yǎng)不良，無肝、膽、腎、胰、心血管和肺等器質(zhì)性疾患；（4）近期無輸血、獻血和手術(shù)史；（5）婦女不在月經(jīng)期、妊娠期及哺乳期；（6）無大量飲酒史。無其他一切對檢驗結(jié)果有影響的因素。初步確定符合要求后，進行全面體檢，綜合所有體檢結(jié)果，最終選擇合格參考個體40例。

1.3.2 合格參考個體的確認(rèn) 檢查并剔除離群值，選擇符合要求的合格參考個體。離群值檢驗采用Dixon方法［5－7］：首先按照一定順序?qū)λ袡z測結(jié)果進行排序并計算全距R，然后再分別計算出最大值、最小值與其相鄰數(shù)據(jù)的差值D；如果D／R≥1／3，則考慮此最大值或最小值為離群值并將其剔除。重復(fù)上述步驟對余下的數(shù)據(jù)進行檢驗。

1.3.3 標(biāo)本檢測 按照本院臨床檢驗中心采集、處理、分析樣品的標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程（SOP）文件，收集40例健康參考個體的血液標(biāo)本，在Sysmex XE－2100血細胞分析儀上檢測標(biāo)本的18項血細胞分析相關(guān)指標(biāo)［WBC、RBC、血紅蛋白（HGB）、血細胞比容（HCT）、紅細胞平均體積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白量（MCH）、平均血紅蛋白濃度（MCHC）、血小板（PLT）等］。

1.3.4 參考區(qū)間的驗證 按照WS／T 405－2012［5］有關(guān)規(guī)定進行：判斷參考區(qū)間適宜引用的標(biāo)準(zhǔn)為R≥90%，R＝落在引用參考區(qū)間內(nèi)的檢測值的參考個體數(shù)／總的參考個體數(shù)×100%。將健康參考個體（40例）的檢驗結(jié)果與衛(wèi)生部頒布的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)血細胞分析參考區(qū)間值進行比較，如果超出參考區(qū)間的數(shù)據(jù)比例不超過10%（4例）則說明驗證通過；否則需要重新選擇至少20名健康參考個體，按照前述的判斷標(biāo)準(zhǔn)進行驗證。若驗證結(jié)果符合參考區(qū)間適宜引用標(biāo)準(zhǔn)要求，則實驗室可以直接使用此參考區(qū)間，否則需要進一步分析查找原因［5，7］。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用Excel2003軟件對40例健康參考個體標(biāo)本的檢測結(jié)果進行記錄；按照CLSI參考區(qū)間使用指南剔除離群值（Dixon法則即1／3規(guī)則）；使用統(tǒng)計軟件SPSS19.0對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計描述分析。

2 結(jié) 果

2.1 40例健康參考個體標(biāo)本的檢測 在已經(jīng)過性能驗證和校準(zhǔn)的Sysmex XE－2100血細胞分析儀上進行測定，根據(jù)Dixon法則判斷40例健康參考個體檢測結(jié)果有無離群值存在（以WBC為例，其中D＝0.1，R＝5.0，D／R＝0.02＜1／3）。40例健康參考個體的檢測結(jié)果均在衛(wèi)生部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的參考區(qū)間內(nèi)［WBC：（3.5～9.5）×109／L］，R＝100%，允許值大于或等于90%。參與本次參考范圍驗證的40例健康參考個體的檢測結(jié)果均落在WS／T 405－2012血細胞分析參考區(qū)間范圍內(nèi)，見表1。

表1 健康參考個體的部分檢測項目的結(jié)果

2.2 驗證結(jié)果分析 本次研究中血細胞分析指標(biāo)WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、PLT 等18 項檢測指標(biāo)的參考區(qū)間驗證允許值R≥90%，視為參考區(qū)間驗證通過，故本實驗室可以使用WS／T 405 血細胞分析參考區(qū)間。見表2。

表2 健康參考個體檢測結(jié)果

3 討 論

臨床檢驗項目參考區(qū)間是解釋臨床檢驗結(jié)果、判斷疾病診斷、進行健康評估的重要依據(jù)，準(zhǔn)確、可靠的參考區(qū)間與臨床醫(yī)生對疾病的診斷效率密切相關(guān)。參考區(qū)間的不確定性會導(dǎo)致臨床醫(yī)生對疾病的誤診、漏診，給患者帶來不必要的心理和經(jīng)濟負擔(dān)。目前臨床實驗室所用參考區(qū)間來源于《全國臨床檢驗操作規(guī)程》、教科書、儀器廠家說明書、實驗室自己制定、其他實驗室確定等，這些數(shù)據(jù)多來源于其他國家二三十年前參考區(qū)間或小樣本局部地區(qū)人群或數(shù)據(jù)庫參考區(qū)間的研究結(jié)果，而隨著經(jīng)濟、社會的發(fā)展，人民生活水平的提高，人體的生理狀態(tài)發(fā)生了明顯的改變，各項指標(biāo)也發(fā)生了相應(yīng)的改變，許多項目參考區(qū)間不再適用。因此實驗室建立血細胞分析參考區(qū)間的意義重大。但根據(jù)《醫(yī)學(xué)實驗室——質(zhì)量和能力的專用要求》［9］的要求，臨床實驗室需要建立適合于自己本實驗室的參考區(qū)間，同時必須進行定期評審。由于研究的人群覆蓋范圍小、項目涉及少，我國地域廣袤，人群之間可能會存在較大的生物學(xué)變異，使用某家或某幾家單位或組織建立的相同參考區(qū)間并非合理，參考區(qū)間驗證更具科學(xué)的說服力。

本實驗室擬采用WS／T 405－2012［5］推薦的血細胞分析參考區(qū)間。然而由于不同種族、年齡、性別、生長發(fā)育和地理位置等諸多因素的影響，加之不同實驗室其所使用的檢測系統(tǒng)、檢測方法不同，同一檢測項目采用不同的檢測系統(tǒng)也會導(dǎo)致檢測結(jié)果間的差異；或同一檢測方法，由于所使用的檢測儀器、試劑來源不同，也會導(dǎo)致檢測結(jié)果不一致［8］。因此，臨床實驗室在使用新的參考區(qū)間之前，必須對其進行驗證，同時應(yīng)注意對存在性別差異的檢測指標(biāo)進行分性別驗證［6，10］。按照臨床檢驗項目參考區(qū)間適宜引用標(biāo)準(zhǔn)要求，當(dāng)所選健康參考個體其檢測結(jié)果有90%或以上在擬使用參考區(qū)間內(nèi)，此參考區(qū)間才可以被引用，即認(rèn)為此次參考區(qū)間驗證有效。否則實驗室應(yīng)對所使用的檢測系統(tǒng)的性能、整個檢測程序進行進一步調(diào)查，查找分析原因，重新選擇新的參考區(qū)間［6］。

本次全血細胞計數(shù)相關(guān)檢測指標(biāo)檢測數(shù)據(jù)表明，參與驗證的檢測項目其驗證結(jié)果落在WS／T 405［5］的參考范圍內(nèi)的比例均達到90%或以上，說明本實驗室可以引用衛(wèi)生部頒布的WS／T 405－2012血細胞分析參考區(qū)間。

［1］馮仁豐.臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)文獻出版社，2003：1－136.

［2］陳桂山，楊志釗，何秀嫻，等.血細胞分析指標(biāo)生物參考區(qū)間適用性驗證探討［J］.實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2009，27（2）：151－152.

［3］Clinical and Laboratory Standards Institute.C28－A3Defining，establishing，and verifying reference intervals in theclinical laboratory：approved guideline［S］.Wayne，PA，USA：CLSI，2008.

［4］衛(wèi)生部臨床檢驗標(biāo)準(zhǔn)委員會.WS／T 402－2012 臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

［5］衛(wèi)生部臨床檢驗標(biāo)準(zhǔn)委員會.WS／T 405－2012 血細胞分析參考區(qū)間［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

［6］王秋菊，楊改平.血細胞分析指標(biāo)生物參考區(qū)間在山西省臨汾地區(qū)適用性驗證［J］.實用醫(yī)技雜志，2014，21（8）：819－821.

［7］韓臨鳳.血細胞生物參考區(qū)間適用性驗證分析［J］.實用醫(yī)技雜志，2014，21（7）：751－752.

［8］馮新平，張保平，董莉，等.性激素六項的生物參考區(qū)間在呼和浩特地區(qū)的驗證分析［J］.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，33（3）：253－255.

［9］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB／T 22576－2008醫(yī)學(xué)實驗室——質(zhì)量和能力的專用要求［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010.

［10］Sinton TJ，Cowley DM，Bryant SJ.Reference intervals for Calcium，phosphate，and alkaline phosphatase as derived on the basis of multichannel－analyzer profiles［J］.Clin Chem，1986，32（1Pt 1）：76－79.