烏司他丁在大鼠慢性阻塞性肺疾病中對(duì)肺的保護(hù)作用及其機(jī)制

龍曉莉，　鄒凡文，　冉茂娟，　龐　科，　劉麗萍（.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院內(nèi)科，重慶　永川　4060；.湖南省人民醫(yī)院　小兒心臟科，湖南　長(zhǎng)沙　4000）

烏司他丁在大鼠慢性阻塞性肺疾病中對(duì)肺的保護(hù)作用及其機(jī)制

龍曉莉1，鄒凡文1，冉茂娟1，龐科1，劉麗萍2
（1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院內(nèi)科，重慶永川402160；2.湖南省人民醫(yī)院小兒心臟科，湖南長(zhǎng)沙410001）

目的：探究烏司他丁在慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺損傷中的保護(hù)機(jī)制，為治療慢性阻塞性肺疾病用藥提供依據(jù).方法：將大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，烏司他丁實(shí)驗(yàn)組（n＝10）.除正常對(duì)照組外，所有大鼠均采用煙熏加氣管滴注脂多糖復(fù)合造模的方法建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型.正常對(duì)照組和模型常規(guī)治療組均給予正常生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組給予烏司他丁.觀察癥狀、體征及肺組織學(xué)變化并且測(cè)定肺功能.采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清細(xì)胞因子的變化，免疫組織化學(xué)法、RT-PCR及western blot分別檢測(cè)JAK/STAT通路、MMP-9及基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1（MMPs inhibitor1，TIMP1）的表達(dá)變化.結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠肺組織受損，肺功能降低.此外，白細(xì)胞介素-1β、干擾素γ和IL-6的含量模型對(duì)照組高于正常對(duì)照組，而IL-4和IL-10模型對(duì)照組低于正常對(duì)照組.肺組織中JAK1、STAT3、p-STAT3和MMP-9的mRNA和蛋白水平模型對(duì)照組高于正常對(duì)照組，而TIMP1的mRNA和蛋白水平模型對(duì)照組低于正常對(duì)照組.治療后，與模型對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組炎性細(xì)胞因子的表達(dá)降低，JAK/STAT信號(hào)通路、基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)降低.與模型對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組大鼠肺功能較好，JAK1、STAT3和p-STAT3蛋白表達(dá)降低，而TIMP1在實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)升高.結(jié)論：烏司他丁可能通過(guò)調(diào)節(jié)JAK1/STAT3通路與MMP9/TIMP1表達(dá)改善慢性阻塞性肺疾病的癥狀.

烏司他??；慢性阻塞性肺疾病；肺損傷；信號(hào)通路

慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmona-ry disease，COPD）是以不完全可逆的氣流受限為特征的一種慢性疾病狀態(tài)，氣流受限往往呈進(jìn)行性加重，且主要與肺部對(duì)有害顆粒或氣體的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)［1］.在全世界范圍內(nèi)，無(wú)論是發(fā)病率還是死亡率仍然在逐年增加［2］.中國(guó)在未來(lái)的半個(gè)世紀(jì)將會(huì)每年有150萬(wàn)人死于COPD，預(yù)計(jì)到2020年，COPD將成為全球第3位死亡原因［3］.吸煙被認(rèn)為是COPD的最主要危險(xiǎn)因素，由于至今仍然沒(méi)有明確有效的藥物可以阻止疾病的發(fā)生發(fā)展，戒煙被認(rèn)為是預(yù)防和控制疾病的最主要的方法，然后停止吸煙后，肺部的炎癥反應(yīng)卻并沒(méi)有中止［4－6］.到目前為止，這種異常的炎癥反應(yīng)在COPD發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制仍然不是十分清楚.因此，進(jìn)一步深入COPD中的炎癥反應(yīng)顯得非常重要［7－11］.

COPD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，但信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子（JAK）/轉(zhuǎn)錄激活因子（STAT）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和蛋白酶/抗蛋白酶系統(tǒng)起著重要的作用.慢性阻塞性肺疾病也與基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPS）和金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMPs）有關(guān).研究表明JAK和STAT信號(hào)通路可以導(dǎo)致大量炎性細(xì)胞因子積累，加重炎癥反應(yīng).氣道損傷的直接結(jié)果是肺組織損傷，引起咳嗽、哮喘和肺功能降低.基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）和金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMP）的表達(dá)失衡導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)沉積癥退化，導(dǎo)致氣道損傷及肺氣腫［12］.

烏司他丁是近年來(lái)研究的高效廣譜蛋白酶抑制劑，已廣泛應(yīng)用于臨床治療，大量的藥理藥效學(xué)研究和臨床研究表明，烏司他丁具有抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶和纖維蛋白酶的性質(zhì)，能穩(wěn)定溶酶體酶膜的破裂和減少心肌抑制因子的產(chǎn)生，抑制炎癥介質(zhì)的過(guò)度釋放，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-8（IL-8）、內(nèi)皮素等以及清除氧自由基等多種特殊的藥理作用［13－15］.烏司他丁還可以降低毛細(xì)血管通透性、改善組織水腫及清除氧自由基等；對(duì)肝臟、腎臟、小腸、胰腺、心臟和腦組織等臟器的缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用；其對(duì)COPD急性期患者保護(hù)作用主要是通過(guò)抑制TNF-α等炎性因子釋放，阻止細(xì)胞炎性因子與白細(xì)胞間的相互作用，防止白細(xì)胞過(guò)度激活，減輕白細(xì)胞對(duì)組織損傷，從而阻止肺損傷發(fā)展，減少炎癥引起肺功能損害［16－18］.本實(shí)驗(yàn)通過(guò)探究烏司他丁在慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺損傷中的保護(hù)機(jī)制，為臨床治療慢性阻塞性肺疾病用藥提供科研依據(jù).

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

30只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（180～200克）由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.所有的動(dòng)物在無(wú)特定病原（SPF）條件自由采食和取水.本研究得到中國(guó)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn).

1.2模型建立與分組

采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠隨機(jī)分為3組，每組10只：正常對(duì)照組，模型對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組.正常對(duì)照組大鼠呼吸新鮮空氣.采用宋一平的方法并加以改良建立大鼠慢性阻塞性肺疾病模型如下：在室溫環(huán)境中，第1、14 d大鼠麻醉后氣管內(nèi)滴脂多糖，將大鼠逐一稱質(zhì)量，按50 mg/kg體質(zhì)量腹腔注射質(zhì)量濃度為4 g/L戊巴比妥鈉溶液，待大鼠麻醉后，將其固定于解剖臺(tái)上，頭低位暴露聲門，將靜脈套管針沿氣管走行快速插入氣管，拔出針芯，接1mL注射器，1s內(nèi)注入溶于注射用生理鹽水的質(zhì)量濃度為1 g/L的脂多糖0.2mL（200μg），將大鼠直立，左右旋轉(zhuǎn)，使脂多糖在肺內(nèi)均勻分布.第2～28 d給予大鼠2次/d香煙煙熏，每次點(diǎn)燃煙絲的質(zhì)量為9.03g（每支煙煙絲質(zhì)量為0.645 g），持續(xù)時(shí)間大約1 h，間隔4 h（滴脂多糖當(dāng)天不煙熏）.被動(dòng)吸煙方法：將大鼠放入自制的有機(jī)玻璃染毒箱（100 cm×80 cm×50 cm）內(nèi)，香煙點(diǎn)燃后，用60mL注射器吸滿煙霧，然后通過(guò)三通管將香煙煙霧快速注入染毒箱內(nèi)（此操作頻率為20次/min），進(jìn)行大鼠被動(dòng)吸煙染毒.為減少香煙燃燒所產(chǎn)的水蒸氣對(duì)大鼠的影響，在箱底放置適量硅膠干燥劑.模型對(duì)照組：給予吸氧、祛痰、應(yīng)用抗生素、改善通氣等常規(guī)治療.實(shí)驗(yàn)組：在對(duì)照組治療基礎(chǔ)上給予注射用烏司他丁（廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H19990133，5萬(wàn)u/支）10萬(wàn)u＋生理鹽水100mL，靜脈滴注，2次/d，連用7d［19－20］.

1.3觀察記錄指標(biāo)

記錄大鼠體質(zhì)量、活動(dòng)、反應(yīng)時(shí)間、毛發(fā)、糞便、死亡率、呼吸速率、咳嗽、呼吸道分泌物、痰和其他慢性阻塞性肺疾病的癥狀和體征.

1.4肺功能評(píng)價(jià)

利用小動(dòng)物肺功能檢測(cè)裝置進(jìn)行檢測(cè)，用力肺活量、平均呼氣流量和呼氣峰流速納入記錄.

1.5大鼠肺組織形態(tài)學(xué)

48h后用體積分?jǐn)?shù)為10%甲醛固定，對(duì)組織進(jìn)行常規(guī)沖洗、脫水、石蠟包埋、切成5 μm序列切片，然后將切片脫蠟、脫水、HE染色及光鏡觀察，對(duì)支氣管和肺組織形態(tài)學(xué)改變進(jìn)行分析.

1.6酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清干擾素-γ、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、IL-6和白細(xì)胞介素-10（IL-10）.操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行.

1.7免疫組織化學(xué)檢測(cè)

肺組織免疫組織化學(xué)檢測(cè)MMP-9，TIMP-1，JAK1和STAT3.操作嚴(yán)格按照免疫組化步驟進(jìn)行.

1.8qRT-PCR檢測(cè)

實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、金屬蛋白酶組織抑制劑-1（TIMP-1）、JAK1和STAT3 mRNA.選用β-actin作為內(nèi)參基因.使用 Transgen Biotech公司qPCR and qRT-PCR SuperMix，Bio-Rad公司CFX，每組3個(gè)復(fù)孔，反應(yīng)條件為：94℃30 s，94℃5 s，55℃15 s，72℃10 s，共45個(gè)循環(huán).由儀器配套專用軟件進(jìn)行結(jié)果分析，通過(guò)與內(nèi)參對(duì)比檢測(cè)各組組織中MMP-9，TIMP1，JAK1，STAT3 mRNA的表達(dá)情況.β-actin上游引物：CGTTGACATCCGTAAAGACC；下游引物：GCTAGGAGCCAGGGCAGTA.MMP-9上游引物：GATCCCCAGAGCGTTACTCG；下游引物：GTTGTG-GAAACTCACACGCC.TIMP1上游引物：ACGCTAG-AGCAGATACCACG；下游引物：GCCCTTATAACCAG-GTCCGAG.JAK1上游引物：ATGGAGTTTCTGCCT-TCGGG；下游引物：CTCCGGAGCGTACCAAAACA.STAT3上游引物：AAAGTATTGTCGCCCCGAGA；下游引物：CAGGTCGTTGGTGTCACACAG.引物由上海生工所設(shè)計(jì)合成.

1.9Western blot檢測(cè)

Western blot檢測(cè)肺組織中JAK1/STAT3信號(hào)通路、MMP-9和TIMP1蛋白的表達(dá).將肺組織用Ly-sis Buffer（北京碧云天生物科技有限公司）裂解后檢測(cè)蛋白表達(dá).β-actin及辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗（抗兔、抗鼠）均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；JAK1/STAT信號(hào)通路、MMP-9和TIMP1D蛋白抗體購(gòu)自Cell Signaling公司.

1.10統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 20.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均值和標(biāo)準(zhǔn)差（珋x±s）表示，對(duì)所有樣本進(jìn)行正態(tài)檢驗(yàn)，采用方差分析法進(jìn)行組間比較.P＜0.05為差異有顯著性.

2　結(jié)果

2.1生物學(xué)觀測(cè)

對(duì)照組中，食物的攝入量和體質(zhì)量逐漸增加.大鼠呼吸頻率穩(wěn)定，無(wú)呼吸道分泌物，無(wú)痰.實(shí)驗(yàn)組大鼠食欲減退，毛發(fā)脫落，體質(zhì)量低于對(duì)照組（P＜0.05）.實(shí)驗(yàn)組大鼠呼吸急促，呼吸頻率（2.12± 0.69）顯著高于對(duì)照組（1.42±0.39）.此外，實(shí)驗(yàn)組鼻腔和口中有分泌物，有咳嗽，呼吸道有痰液，表明該組肺功能減低.烏司他丁治療組癥狀明顯好于模型對(duì)照組，體質(zhì)量和呼吸頻率優(yōu)于模型對(duì)照組，（P ＜0.05），見(jiàn)表1.

表1　各組間大鼠體重和呼吸頻率的比較Table 1　Comparison of body weight and respiratory fre-quency in rats?。╪＝10±s）

表1　各組間大鼠體重和呼吸頻率的比較Table 1　Comparison of body weight and respiratory fre-quency in rats　（n＝10±s）

1）P＜0.05

分組　體質(zhì)量/（g）　呼吸頻率/（Hz）正常對(duì)照組210g±16.6　1.4±0.4模型對(duì)照組　197±15.3　2.1±0.31）烏司他丁實(shí)驗(yàn)組　206±14.7　1.7±0.31）

2.2肺功能的改變

與對(duì)照組相比，肺功能指標(biāo)如用力呼氣流量（FEV）、用力肺活量（FVC）模型對(duì)照組明顯降低（P＜0.05）.實(shí)驗(yàn)組FEV、FVC明顯優(yōu)于模型對(duì)照組，（P＜0.05），見(jiàn)表2.

表2　各組間大鼠肺功能參數(shù)的比較Table 2　Comparison of lung function parameters in rats　（n＝10，珋x±s）

2.3肺組織形態(tài)學(xué)變化

對(duì)照組氣管柱狀上皮細(xì)胞，纖毛排列整齊，氣管和支氣管杯狀細(xì)胞為主，沒(méi)有腺體增生及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn).模型對(duì)照組中，氣管上皮脫落，杯狀細(xì)胞和腺體肥大，炎性細(xì)胞浸潤(rùn).此外，支氣管粘膜皺襞改變，中性粒細(xì)胞出現(xiàn)，呼吸性細(xì)支氣管和肺泡管有囊性擴(kuò)張，泡壁變薄，有小葉中央型肺氣腫.烏司他丁實(shí)驗(yàn)組，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)少見(jiàn)，肺泡間隔破壞也相對(duì)較少，氣管粘膜纖毛受損減少，柱狀上皮細(xì)胞完整，見(jiàn)圖1.

圖1　肺組織形態(tài)學(xué)變化（HE，×200）A：Normal control group；B：postive control group；C：Ulinastatin groupFig.1　The morphological changes in lung tissue（HE，×200）

2.4血清細(xì)胞因子的變化

與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組IL-4、IL-10表達(dá)降低，而IFN-γ和IL-6的表達(dá)明顯升高.與模型對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組IL-4和IL-10的表達(dá)明顯升高，而IFN-γ和IL-6的表達(dá)降低，見(jiàn)圖2.

圖2　大鼠血清IFN-γ、IL-4、IL-6和IL-10的表達(dá)Fig.2　Expression of serum IFN-γ，IL-4，IL-6，and IL-10 in rats

2.5肺組織中MMP-9、TIMP-1、JAK1和STAT3的光密度值

與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組肺組織中MMP-9、JAK1和STAT3的光密度值均較高，而TIMP1的光密度值較低.與模型對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組MMP-9、JAK1和STAT3的光密度值均較低，而TIMP的光密度值較高.

肺組織的JAK1/STAT3信號(hào)通路、MIMP-9、TIMP1基因和蛋白在肺組織的表達(dá)

RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，模型對(duì)照組JAK1、STAT3，肺組織中MMP-9mRNA表達(dá)升高（P＜0.05），MMP-9、JAK1、p-JAK1、STAT3和p-STAT3蛋白均表達(dá)升高，而TIMP1 mRNA和蛋白表達(dá)均降低.（P＜0.05）.與模型對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組JAK1、MMP-9 mRNA的表達(dá)和JAK1、p-JAK1、MMP-9和p-STAT3蛋白的表達(dá)均較低，但TIMP1 mRNA和蛋白表達(dá)均較高，見(jiàn)圖3、4及表3、4.

圖3　各組JAK1和STAT3信號(hào)通路、MMP-9、TIMP1 mRNA水平的表達(dá)1：Normal control group；2：postive control group；3：Ulinastatin groupFig.3　Expression of JAK1/STAT3 signaling pathway，and MMP-9，TIMP1 mRNA in each group

圖4　各組JAK1/STAT3信號(hào)通路、MMP-9、TIMP1蛋白水平的表達(dá)1：Normal control group；2：postive control group；3：Ulinastatin groupFig.4　Expression of JAK1/STAT3 signaling pathway，and MMP-9，TIMP1 protein in each group

表3　肺組織MMP-9、TIMP1、JAK1和STAT3 mRNA水平的比較Table 3　Comparison of MMP-9，TIMP1，JAK1，and STAT3 mRNA in lung tissue（珋x±s）/（ng·μL－1）

表4　各組間肺組織　MMP-9、TIMP1、JAK1和STAT3蛋白水平的差異性Table 4　Comparison of MMP-9，TIMP1，JAK1，and STAT3 protein in lung tissue （珋x±s）/（ng·μL－1）

2.6相關(guān)性分析

JAK1 mRNA、STAT3蛋白與IL-6正相關(guān).MMP-9 mRNA與FEV和IL-10負(fù)相關(guān).p-STAT3蛋白與IFN-γ正相關(guān).TIMP1蛋白和PEF正相關(guān).STAT3蛋白與FEV呈負(fù)相關(guān).MMP-9蛋白與PEF顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.05）.JAK1、STAT3和p-STAT3與MMP-9呈正相關(guān).STAT3和p-JAK1正相關(guān)，MMP-9和TIMP-1負(fù)相關(guān)，見(jiàn)表5、6.

表5　JAK1/STAT3信號(hào)通路、MMP-9和 TIMP1在 COPD模型中的關(guān)聯(lián)性分析Table 5　Relationships between the JAK1/STAT3 pathway，MMP-9，and TIMP1 in COPD

表6　JAK1/STAT3信號(hào)通路與 MMP-9、TIMP蛋白相關(guān)性分析Table 6　Correlation between JAK1/STAT3 pathway and MMP-9，TIMP1 protein

3　討論

慢性阻塞性肺疾病呈進(jìn)行性發(fā)展，細(xì)胞因子趨化炎癥細(xì)胞導(dǎo)致肺組織遷移活化，釋放各種酶及氧化產(chǎn)物，促使肺功能逐步惡化.烏司他丁是近年來(lái)研究的高效廣譜蛋白酶抑制劑，已廣泛應(yīng)用于臨床治療.烏司他丁還可以降低毛細(xì)血管通透性、改善組織水腫及清除氧自由基等；對(duì)肝臟、腎臟、小腸、胰腺、心臟和腦組織等臟器的缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用；其對(duì)COPD急性期患者保護(hù)作用主要是通過(guò)抑制TNF-α等炎性因子釋放，阻止細(xì)胞炎性因子與白細(xì)胞間的相互作用，防止白細(xì)胞過(guò)度激活，減輕白細(xì)胞對(duì)組織損傷，從而組織肺損傷發(fā)展，減少炎癥引起肺功能損害［11］.

本研究建立氣管滴入脂多糖COPD大鼠模型，該模型可以模擬氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)導(dǎo)致氣道粘液高分泌的COPD臨床病理學(xué).該模型還通過(guò)被動(dòng)吸煙導(dǎo)致氣道重塑、肺氣腫和其他結(jié)果的改變.結(jié)果表明，呼吸急促和呼吸頻率加快明顯加劇了呼吸道分泌物的流出，模型中還表現(xiàn)為咳嗽和呼吸道痰液流出.因此，該模型復(fù)合慢性阻塞性肺疾病的臨床病理學(xué)特點(diǎn)［5，9－10］.

大鼠慢性阻塞性肺疾病模型可見(jiàn)氣道炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肺組織病理改變，肺功能下降.脂多糖可以直接或間接刺激巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，從而誘導(dǎo)JAK1在JAK1/STAT3信號(hào)通路中JAK1磷酸化.JAK1活化能迅速激活STAT3磷酸化.該信號(hào)通路的激活參與細(xì)胞增殖、分化和凋亡.IL-6是一種在慢性阻塞性肺疾病肺上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞上調(diào)節(jié)JAK1/STAT3重要調(diào)節(jié)因子.IL-6可直接激活STAT3，并伴有STAT3的活化［12］.

研究表明，在COPD患者這MMP-9表達(dá)升高，而TIMP-1表達(dá)降低.本組發(fā)現(xiàn)，MMP-9與炎性細(xì)胞因子呈正相關(guān).進(jìn)一步相關(guān)性分析表明，JAK1、STAT3、MMP-9與p-STAT3呈正相關(guān)，STAT3和p-JAK1正相關(guān)，MMP-9和TIMP1負(fù)相關(guān).與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組MMP-9和MMP-9/TIMP-1表達(dá)升高，提示有COPD氣道炎癥.JAK1/STAT3信號(hào)通路的過(guò)度激活能降低TIMP-1的表達(dá)，從而不能抑制MMP-9的表達(dá).MMP-9的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞外機(jī)制作用增強(qiáng)，增加氣道炎癥反應(yīng).研究表明，MMP/JAK/STAT3信號(hào)軸環(huán)氧化酶-2（COX-2）的過(guò)表達(dá)，導(dǎo)致氣道和肺組織的損傷.

綜上所述，烏司他丁能改善COPD癥狀，可能機(jī)制是對(duì)JAK/STAT3調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、MMP-9/TIMP-1和抑制炎癥反應(yīng)相關(guān).

［1］MURRAY C J，LOPEZ A D.Alternative projections of mortality and disability by cause 1990－2020：Global Burden of Disease Study［J］.Lancet，1997，349（9064）：1498－1504.

［2］RABE K F，HURD S，ANZUETO A，et al.Global strat-egy for the diagnosis，management，and prevention of chronic obstructive pulmonary disease：GOLD executive summary［J］.Am J Respir Crit Care Med，2007，176 （6）：532－555.

［3］PAUWELS R A，RABE K F.Burden and clinical fea-tures of chronic obstructive pulmonary disease（COPD）［J］.Lancet，2004，364（9434）：613－620.

［4］YANG W，CHENG H，XIE Y M，et al.Dengzhanxixin injection using character analysis in clinical based on real world HIS database［J］.Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2012，37（18）：2718－2722.

［5］LI Y Y，XIANG Y Y，XIE Y M，et al.Study of analysis 1 390 adverse drug reactions cases of parenterally admin-istered dengzhan xixin based on Chinas spontaneous re-sponse system［J］.Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2013，38（18）：2998－3002.

［6］SHEN H，YANG W，XIE Y M，et al.Exploration of clinical outcomes on coronary heart disease of parenterally administered dengzhan xixin using propensity score［J］.Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2013，38（18）：3166－3171.

［7］SAETTA M，DI S A，MAESTRELLI P，et al.Activated T-lymphocytes and macrophages in bronchial mucosa of subjects with chronic bronchitis［J］.Am Rev Respir Dis，1993，147（2）：301－306.

［8］SAETTA M，BARALDO S，CORBINO L，et al.CD8＋ve cells in the lungs of smokers with chronic obstructive pulmonary disease［J］.Am J Respir Crit Care Med，1999，160（2）：711－717.

［9］WEI X，YE X，XIE Y，et al.Post-marketed re-evalua-tion of fleabane injection and Dengzhan Shengmai capsule study on treatment in patients with ischemic stroke［J］.Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2011，36（20）：2789－2792.

［10］GUO T，LI Y Y.Progresses on pharmacological and toxi-cological effects of Dengzhanxixin injection［J］.Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2012，37（18）：2820－2823.

［11］鄧潔，湯渝玲.BiPAP無(wú)創(chuàng)通氣與常規(guī)治療COPD呼吸衰竭50例觀察［J］.暨南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版），2010，31（6）：601.

［12］MA L，ZHANG H，LIU Y Z，et al.Ulinastatin decreases permeability of blood——brain barrier by inhibiting ex-pression of MMP-9 and t-PA in postoperative aged rats ［J］.Int J Neurosci，2015，25（3）：52.

［13］景炳文.烏司他丁在急危重癥臨床應(yīng)用的進(jìn)展［J］.中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)，2006，28（7）：35.

［14］王紹謙，胡洋，張文田.烏司他丁對(duì)急性肺損傷患者炎癥因子及血?dú)夥治龅挠绊懀跩］.中華實(shí)用診斷與治療雜志，2009，43（5）：68.

［15］范麗麗，于湘友.烏司他丁對(duì)體外循環(huán)患者細(xì)胞黏附分子濃度影響及對(duì)肺損傷保護(hù)作用［J］.中華實(shí)用診斷與治療雜志，2010，63（3）：112.

［16］王化虹，胡伏蓮，林三仁，等.國(guó)產(chǎn)烏司他丁治療急性胰腺炎的療效和安全性［J］.中國(guó)新藥雜志，2001，19（9）：36.

［17］TAIE S，UEKI M，CHUJO K，et al.Urinary trypsin in-hibitor ameliorates renal tissue oxygenation after ischemic reperfusion in rats［J］.J Anesth，2008，22（2）：149－154.

［18］王繼鋒，齊剛，張驊.烏司他丁對(duì)重癥肺炎患者的肺保護(hù)作用的體會(huì)［J］.臨床肺科雜志，2011，76 （8）：97.

［19］LU P F，ZENG X B，XIE Y M，et al.Explore dengzhan xixin injection effecting on outcome of coronary heart dis-ease based on propensity score［J］.Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2013，38（18）：3121－3128.

［20］SHEN H，YANG W，XIE Y M，et al.Exploration of clinical outcomes on coronary heart disease of parenterally administered dengzhan xixin using propensity score［J］.Zhongguo Zhong Yao Za Zhi，2013，38（18）：3166－3171.

［責(zé)任編輯：陳詠梅］

Lung protective effects and mechanism of ulinastatin on chronic obstructive pulmonary disease of rats

LONG Xiaoli1，ZOU Fanwen1，RAN Maojuan1，PANG Ke1，LIU Liping2
（1.Department of Internal Medicine，Yongchuan Hospital，Chongqing Medical University，Yongchuan，Chongqing 402160，China；2.Department of Pediatric Cardiology，Hunan People′s Hospital，Changsha 410001，China）

Aim：To observe effect of ulinastatin on the janus kinase（JAK）/signal transducer and ac-tivator of transcription（STAT）pathway and matrix metallo-proteinases（MMPs）in chronic obstructive pulmonary disease（COPD）rat model.Methods：Rats were randomly divided into a normal group，mod-el group，ulinastatin group（n＝10）.Aside from the normal group，all rats were exposed to smoke plus lipopolysaccharide tracheal instillation to establish the COPD model.Changes in symptoms，signs，and lung histology were observed.Lung function was measured with a spirometer.Serum cytokines were de-tected using enzyme-linked immunosorbent assay，and changes in the JAK/STAT pathway，MMP-9，andMMPs inhibitor 1（TIMP1）were detected by immunohistochemistry，RT-PCR，and western blotting，re-spectively.Results：Compared with the normal group，lung tissue was damaged，and lung function was reduced in the model control group.Additionally，the levels of interleukin（IL）-1β，γ interferon（IFN-γ），and IL-6 were higher，while IL-4 and IL-10 were lower in the model control group than those in the normal group.The expressions of JAK1，STAT3，p-STAT3，and MMP-9 mRNA and protein in lung tis-sue were higher，and TIMP1 mRNA and protein was lower in the model group compared with the normal group.After treatment，compared with the model group，the expression of inflammatory cytokines was lower in each treatment group，and expressions of JAK/STAT pathway，MMPs were lower.Conclusion：ulinastatin can improve the symptoms of COPD possibly by regulating the expression of the JAK1/STAT3 pathway and MMP9/TIMP1.

Ulinastatin；chronic obstructive pulmonary disease；lung injury；signal pathway

R446.9

A

1000－9965（2015）06－0496－07

10.11778/j.jdxb.2015.06.010

2015－10－10

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（30971105）

龍曉莉（1979－），女，醫(yī)師，研究方向：全科醫(yī)學(xué)

鄒凡文，女，主任醫(yī)師，Mobile：13368120166；E-mail：2968182323＠qq.com