咳喘膏穴位貼敷對哮喘豚鼠氨茶堿藥代動力學(xué)影響的研究*

徐　昕，沈　鈞，熊湘明，張秀麗，郭玉莉（.天津市公安醫(yī)院，天津30004；.天津醫(yī)科大學(xué)，天津300070）

·中藥研究·

咳喘膏穴位貼敷對哮喘豚鼠氨茶堿藥代動力學(xué)影響的研究*

徐昕1，沈鈞2，熊湘明1，張秀麗1，郭玉莉1
（1.天津市公安醫(yī)院，天津300042；2.天津醫(yī)科大學(xué)，天津300070）

［目的］研究中藥咳喘膏穴位貼敷對哮喘豚鼠氨茶堿藥代動力學(xué)的影響，探討其可能機制。［方法］將30只豚鼠隨機分為5組，分別為正常組、模型組、咳喘膏高、中、低劑量組，每組6只。采用卵蛋白致敏-霧化激發(fā)方法復(fù)制豚鼠支氣管哮喘模型。豚鼠均予氨茶堿灌胃，咳喘膏高、中、低劑量組予咳喘膏穴位貼敷，按設(shè)定時點經(jīng)豚鼠內(nèi)眥取血，高效液相色譜法檢測氨茶堿血藥濃度，DAS2.0藥代動力學(xué)軟件計算氨茶堿藥代動力學(xué)參數(shù)。［結(jié)果］咳喘膏高劑量組與正常組、模型組及低劑量組比較，氨茶堿半衰期（T1/）2延長（P=0.007，P=0.022，P=0.028）、消除速率常數(shù)（Ke）減低（P= 0.005，P=0.012，P=0.015），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；咳喘膏中劑量組與正常組比較，氨茶堿T1/2延長（P=0.029）、Ke減低（P= 0.047），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。［結(jié)論］咳喘膏穴位貼敷可影響氨茶堿藥代動力學(xué)，使氨茶堿T1/2延長，Ke減低?？梢酝ㄟ^調(diào)控咳喘膏藥物顆粒直徑的方法，減小咳喘膏穴位貼敷對氨茶堿藥代動力學(xué)影響。

咳喘膏；哮喘；豚鼠；氨茶堿；藥代動力學(xué)

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2015.07.12

支氣管哮喘是臨床常見病，具有患病率高、病程長、反復(fù)發(fā)作等特點。本院運用咳喘膏穴位貼敷治療支氣管哮喘已有40余年歷史，臨床觀察總有效率達90%以上。臨床咳喘膏穴位貼敷與氨茶堿聯(lián)合用藥的情況經(jīng)常出現(xiàn)［1］，研究表明年齡、性別及多種藥物可以影響氨茶堿藥代動力學(xué)［2-8］，并有研究確切表明［9-10］，中藥復(fù)方對氨茶堿藥代動力學(xué)存在影響。本研究探討咳喘膏穴位貼敷對哮喘豚鼠氨茶堿藥代動力學(xué)的影響，為咳喘膏安全用藥提供實驗依據(jù)。

1　材料

1.1實驗動物清潔級白色雄性豚鼠體質(zhì)量（300±20）g，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所動物中心提供，動物生產(chǎn)許可證號SCXK（津）2005-0001。

1.2藥品及試劑咳喘膏：主要成分為白芥子、延胡索、地龍、半夏、細辛、麝香等。天津市公安醫(yī)院制劑室提供（制劑號：TJZB-Z2007010278）；雞卵清白蛋白，美國Sigma公司；氨茶堿注射液，天津金耀氨基酸有限公司；氨茶堿標(biāo)準(zhǔn)品、內(nèi)標(biāo)咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品，中國藥品生物制品檢定所。

1.3儀器Agilent1100高效液相色譜系統(tǒng)，美國Agilent公司；不銹鋼柱，HypersilODCC18柱（4.6mm× 250mm×5μm）。

2　方法

2.1分組與模型制備將雄性豚鼠30只，按隨機數(shù)字表法隨機分為5組：正常組、模型組、咳喘膏低劑量組、咳喘膏中劑量組、咳喘膏高劑量組。每組6只。參照相關(guān)文獻［11］方法，復(fù)制支氣管哮喘豚鼠模型。實驗第1天，除正常組外分別腹腔注射10%卵蛋白生理鹽水1mL致敏，第8天重復(fù)注射1次加強致敏。第15天起予1%卵蛋白生理鹽水10mL霧化吸入，激發(fā)哮喘，每日1次，連續(xù)7 d。正常組給予等體積生理鹽水腹腔注射及霧化吸入。造模過程中豚鼠均出現(xiàn)呼吸困難，呼吸節(jié)律改變、進食量減少、活動能力下降、體質(zhì)量增長緩慢的表現(xiàn)，符合哮喘臨床癥狀特征，證明動物模型復(fù)制成功。

2.2咳喘膏制備經(jīng)檢索文獻，未發(fā)現(xiàn)中藥外用藥劃分高、中、低劑量組方法的相關(guān)報道。筆者嘗試將天津市公安醫(yī)院制劑室提供的咳喘膏生藥粉等分3份，用研缽充分研細過篩，分別制成80、100、120目（篩孔直徑分別為0.180、0.150、0.125mm）的顆粒，代表低、中、高、劑量。各組藥粉分別與蒸餾水按1∶1（W∶V）混合均勻，制成10mm×10mm×10mm的咳喘膏備用，每劑咳喘膏含咳喘膏生藥粉1g。

2.3給藥與取材末次霧化激發(fā)結(jié)束后24 h，豚鼠背部備皮，參照文獻［12］選取豚鼠肺俞、定喘穴，咳喘膏低、中、高劑量組以相應(yīng)劑量咳喘膏穴位貼敷，正常組及模型組生理鹽水紗布穴位貼敷，根據(jù)本課題組前期研究結(jié)果［13］，貼敷時間確定為180min。各組豚鼠均予氨茶堿40mg/kg灌胃。按參考文獻［14］設(shè)定標(biāo)本留取時點，各組豚鼠分別于灌胃完畢后15、30、60、120、180、240、360、480、600 min經(jīng)內(nèi)眥取血，每次取血0.5 mL，離心后-80℃冰箱保存?zhèn)錅y。

2.4氨茶堿血藥濃度測定本研究采用高效液相色譜法測定豚鼠血清中氨茶堿血藥濃度。按參考文獻［15］方法，制備氨茶堿標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行樣品預(yù)處理及氨茶堿血藥濃度測定。

2.5藥代動力學(xué)參數(shù)計算采用安徽省藥物臨床評價中心研發(fā)的DAS（Drug And Statistics）2.0藥代動力學(xué)軟件擬合氨茶堿藥代動力學(xué)參數(shù)。

2.6統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3　結(jié)果

3.1氨茶堿血藥濃度各組豚鼠在設(shè)定時點氨茶堿血藥濃度均數(shù)，見表1。

3.2咳喘膏對氨茶堿藥代動力學(xué)參數(shù)的影響經(jīng)DAS2.0藥代動力學(xué)軟件分析，氨茶堿在豚鼠體內(nèi)代謝符合一室模型，經(jīng)軟件擬合藥代動力學(xué)參數(shù)，并經(jīng)SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行方差分析，各組氨茶堿藥代動力學(xué)參數(shù)［半衰期（T1/2）、消除速率常數(shù)（Ke）、表觀分布容積（Vd）、清除率（CL）、藥時曲線下面積（AUC）］比較見表2。

結(jié)果顯示，咳喘膏高劑量組與正常組、模型組及低劑量組比較，氨茶堿T1/2延長（P=0.007，P= 0.022，P=0.028）、Ke減低（P=0.005，P=0.012，P= 0.015），差異有統(tǒng)計學(xué)意義；咳喘膏中劑量組與正常組比較，氨茶堿T1/2延長（P=0.029）、Ke減低（P= 0.047），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。咳喘膏低劑量組與正常組和模型組比較，各藥代動力學(xué)參數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。

4　討論

中藥穴位貼敷治療哮喘早在清代《張氏醫(yī)通》即有記載“夏日三伏中，用白芥子涂法，往往獲效。方用白芥子凈末一兩，延胡一兩，甘遂、細辛各半兩，共為細末，入麝香半錢。杵勻姜汁調(diào)涂肺俞、膏肓、百勞等穴”，現(xiàn)作為哮喘冬病夏治的常用療法廣泛使用［16］。本院咳喘膏方中白芥子溫肺豁痰利氣；地龍清肺化痰定喘；細辛辛散溫肺化飲；半夏燥濕化痰平喘；延胡索通行氣血、麝香芳香走竄，以利藥物吸收。諸藥并用直搗哮喘痰飲伏肺之“夙根”起到辛散溫通、化痰平喘的作用［17］。貼敷穴位中肺俞穴屬膀胱經(jīng)，為肺的背俞穴，可補益肺氣、散寒定喘；定喘穴為經(jīng)外奇穴，可通利肺氣、止咳平喘?？却嘌ㄎ毁N敷，藥物與穴位經(jīng)絡(luò)協(xié)同作用，可達到調(diào)節(jié)陰陽、疏通經(jīng)絡(luò)、祛邪扶正的療效。

表1　豚鼠氨茶堿血藥濃度（x±s）Tab.1 Theblood concentration ofam inophylline inguinea pigs（x±s）

表2　氨茶堿藥代動力學(xué)參數(shù)比較（x±s）Tab.2 Com parison ofam inophylline pharmacokineticsparameters（x±s）

隨著咳喘膏穴位貼敷治療哮喘的深入開展，其用藥安全性越來越受到重視。臨床咳喘膏穴位貼敷經(jīng)常與氨茶堿聯(lián)合用藥，而氨茶堿的藥代動力學(xué)受諸多因素影響。本研究表明，咳喘膏穴位貼敷可使哮喘豚鼠氨茶堿T1/2延長、Ke減低，影響了氨茶堿在哮喘豚鼠體內(nèi)的消除過程。根據(jù)研究結(jié)果，臨床兩者聯(lián)合用藥時，應(yīng)適當(dāng)延長氨茶堿的給藥間隔時間，調(diào)整用藥劑量，并注意監(jiān)測氨茶堿血藥濃度，以確保臨床安全用藥。同時可通過調(diào)控咳喘膏藥物劑量，即調(diào)整咳喘膏藥粉顆粒直徑的方法，減少咳喘膏穴位貼敷對氨茶堿藥代動力學(xué)的影響。

筆者推論產(chǎn)生上述影響的可能機制有：1）咳喘膏影響氨茶堿的分布：研究結(jié)果顯示，咳喘膏有使氨茶堿表觀分布容積增加的趨勢，但由于本研究實驗動物樣本量較少差異無統(tǒng)計學(xué)意義。實驗過程中發(fā)現(xiàn)，咳喘膏穴位貼敷后，哮喘豚鼠穴位局部皮膚潮紅、充血、皮溫相對增高，可能為咳喘膏白芥子、細辛、延胡索、麝香等辛溫活血通絡(luò)藥物，使貼敷部位毛細血管充盈擴張、血流增速、進而影響氨茶堿的組織分布，使氨茶堿在一定時期內(nèi)更多地分布于皮膚等外周組織。2）影響氨茶堿生物轉(zhuǎn)化：茶堿主要經(jīng)CYPlA2代謝而失活，屬于肝藥酶依賴性藥物，其轉(zhuǎn)化消除速率主要依賴于酶的活性改變而改變［18］。有研究表明延胡索、地龍、半夏、細辛等咳喘膏所含成分對肝藥酶具有誘導(dǎo)/抑制作用［19-22］，可能影響氨茶堿的生物轉(zhuǎn)化。對于其確切機制筆者將作進一步研究。

同時筆者注意到，模型組及3個治療組AUC與正常組比較雖無統(tǒng)計學(xué)差異，但有增加趨勢。提示哮喘疾病本身或咳喘膏穴位貼敷均可能影響口服氨茶堿的吸收程度，使進入血液循環(huán)的氨茶堿總量增加。而氨茶堿在人體內(nèi)的消除存在零級動力學(xué)與一級動力學(xué)相互轉(zhuǎn)化的情況，氨茶堿在體內(nèi)藥量過多時轉(zhuǎn)為零級消除，致血藥濃度持續(xù)上升，不能保持穩(wěn)態(tài)血藥濃度。故AUC這一參數(shù)雖僅有增加趨勢，仍需提起注意，提示了咳喘膏穴位貼敷與氨茶堿聯(lián)合用藥治療哮喘時，監(jiān)測氨茶堿血藥濃度的必要性。

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（本文編輯：高杉，滕曉東）

Effectofacupoin tapp lication of Kechuan p laster on pharm acokineticsofam inophylline in asthm aticguinea pigs

XUXin1，SHEN Jun2，XIONGXiang-ming1，ZHANGXiu-li1，GUOYu-li1
（1.Tianjin Police Hospital，Tianjin 300042，China；2.Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China）

［Objective］To investigate theeffectofacupointapplication of Kechuan plasteron pharmacokineticsof aminophylline in asthmaticguinea pigs，and to explore its possiblemechanism.［M ethods］The 30guinea pigswere assigned to 5groups random ly，respectively as thenormalgroup，model controlgroup，Kechuan plasterhigh dosegroup，medium dosegroup and low dosegroup，6guinea pigs in eachgroup.Except the normalgroup，all the other 4groupswere injected into the abdominal cavity with OVA to induce allergy reaction，then inhaled OVA forexcitation to prepare theasthmamodelgroups.Allguinea pigswere fed aminophyllinebygavage，Kechuan plasterhigh，medium and low dosegroup was treated with Kechuan plaster acupointapplication according to differentdosage.Blood was taken by inner canthus puncture，according to the set time point.Plasma concentration of aminophyllinewas detected by HPLC.DAS2.0 software wasused to calculate the pharmacokinetics parameters of aminophylline.［Results］Compared with normalgroup，model controlgroup and low dosegroup，plasmahalf-lifeofaminophyllineextended（P=0.007，P=0.022，P=0.028）and elimination rate constantdecreased（P= 0.005，P=0.012，P=0.015）in high dosegroup.Comparedwith normalgroup，plasmahalf-lifeofaminophyllineextended（P=0.029）and elimination rate constantdecreased（P=0.047）inmedium dosegroup.［Conclusion］Kechuan plasteracupointapplication can affect the pharmacokinetics of aminophylline，and it can extend the plasma half-life and decrease the elimination rate constant.The effect of Kechuan plaster could be controlled by changing the drug particles’diameter.

Kechuan plaster；asthma；guinea pig；aminophylline；pharmacokinetics

R562.2

A

1672-1519（2015）07-0428-04

天津市公安局科技基金項目（SJ2009023）。

徐昕（1973-），男，醫(yī)學(xué)碩士，主治醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合治療心血管疾病、呼吸系統(tǒng)疾病的臨床和科研工作。

（2015-02-03）