“活血開(kāi)竅湯”對(duì)MCAO模型大鼠血腦屏障通透性的時(shí)效性影響*

趙金生，孟凡征，殷　韻，李　平

“活血開(kāi)竅湯”對(duì)MCAO模型大鼠血腦屏障通透性的時(shí)效性影響*

趙金生1，2，孟凡征1，殷韻2，李平3

（1.天津市南開(kāi)醫(yī)院腦病科，天津300100；2.天津醫(yī)科大學(xué)，天津300070；3.天津市第三中心醫(yī)院，天津300170）

［目的］探討“活血開(kāi)竅湯”不同給藥時(shí)間對(duì)大腦中動(dòng)脈梗死（MCAO）模型大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)及血腦屏障的時(shí)效性影響。［方法］將48只MCAO模型Wistar大鼠隨機(jī)分為模型組及活血開(kāi)竅湯治療組（Ⅰ組：造模后2 h給藥組；Ⅱ組：造模后24 h給藥組；Ⅲ組：造模后48 h給藥組），每組12只，另有12只大鼠作為假手術(shù)組。采用Zealonga評(píng)分法觀察各組大鼠神經(jīng)功能缺損情況，取材前2 h于尾靜脈注射伊文思藍(lán)（EB）溶液以觀察各組大鼠血腦屏障（BBB）的通透性，免疫組化法觀察各組大鼠腦組織Claudin-5蛋白含量情況。［結(jié)果］各治療組大鼠神經(jīng)功能較模型組均有改善，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?；钛_(kāi)竅湯Ⅱ、Ⅲ組大鼠腦缺血側(cè)紋狀體EB含量低于模型對(duì)照組（P＜0.05），Claudin-5蛋白含量相對(duì)較高（P＜0.05）。而活血開(kāi)竅湯Ⅰ組與模型對(duì)照組相比，活血開(kāi)竅湯Ⅱ組與Ⅲ組相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。［結(jié)論］活血開(kāi)竅湯可通過(guò)減輕BBB通透性，減少Claudin-5蛋白的破壞從而保護(hù)MCAO大鼠血腦屏障，但在急性期對(duì)BBB的保護(hù)作用并不十分明顯，且尚不能證明在非急性期越早給予活血開(kāi)竅湯對(duì)BBB的保護(hù)作用就越顯著。

活血開(kāi)竅湯；大腦中動(dòng)脈梗死；血腦屏障；Claudin-5蛋白

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2015.11.11

“活血開(kāi)竅湯”是由導(dǎo)師李平教授總結(jié)出的治療腦梗死有效的方劑，經(jīng)多年臨床實(shí)踐證明，此方具有活血開(kāi)竅、通絡(luò)補(bǔ)腎的作用，在治療腦梗死方面具有肯定的療效。本課題組早期的實(shí)驗(yàn)［1-2］已證實(shí)，活血開(kāi)竅湯對(duì)大腦中動(dòng)脈缺血再灌注損傷模型大鼠有一定的腦保護(hù)作用，可有效改善模型大鼠的神經(jīng)功能。而本實(shí)驗(yàn)在上述研究的基礎(chǔ)上通過(guò)觀察活血開(kāi)竅湯不同給藥時(shí)間對(duì)大腦中動(dòng)脈缺血模型（MCAO）大鼠血腦屏障（BBB）通透性以及腦組織Claudin-5蛋白含量的影響，來(lái)探討活血開(kāi)竅湯對(duì)MCAO大鼠血腦屏障的保護(hù)作用機(jī)制，以期為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)健康雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量200～230 g，由天津醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度22～25℃，給予普通飼料（天津醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供），自由飲水，相對(duì)濕度40%～60%。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑及儀器伊文思藍(lán)（EB）染料（北京化學(xué)試劑公司），Claudin-5上下游引物（上海生物工程），4%多聚甲醛、肝素液、注射用青霉素鈉、甲酰胺溶液（天津愛(ài)基生公司），造模所需手術(shù)器械（上海金鐘醫(yī)療器械廠），直徑0.26 mm魚(yú)線（日本PATU公司），恒溫冰凍切片機(jī)、SDC-6低溫恒溫槽（Leica公司），低溫離心機(jī)、超聲波粉碎機(jī)、移液槍（Eppendorf公司），BECKMAN超高速離心機(jī)（美國(guó)貝克曼儀器公司），Motic AE31熒光顯微鏡（Motic公司）。

1.3MCAO模型的制備及分組將大鼠飼養(yǎng)3 d后禁食24 h，采用Zea-Longa線栓法［3］制備大鼠左側(cè)MCAO模型：10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）腹腔注射，待大鼠麻醉后，將其腹面向上固定于手術(shù)臺(tái)上，頸部備皮，于頸部正中稍左0.5 cm作一切口，切開(kāi)皮膚及皮下組織，依次暴露并分離大鼠左側(cè)頸總、頸內(nèi)及頸外動(dòng)脈，結(jié)扎頸總及頸外動(dòng)脈，距頸總動(dòng)脈分叉處約5 mm處用眼科剪小心剪開(kāi)一斜行切口，將頭端圓鈍并經(jīng)多聚賴氧酸處理的線栓由切口處插入頸內(nèi)動(dòng)脈，從血管分叉口開(kāi)始計(jì)算，當(dāng)插入深度約18 mm時(shí)，感到手下有輕微阻力后，放慢速度，以防刺破大腦中動(dòng)脈。當(dāng)線栓插入正常長(zhǎng)度后（穿到大腦中動(dòng)脈），結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈，固定線栓后縫合。

排除造模失敗及死亡大鼠后，剩余48只造模成功大鼠。按照隨機(jī)數(shù)字表法將模型大鼠隨機(jī)分為模型組（Model）、活血開(kāi)竅湯Ⅰ組（造模后2 h給藥）、Ⅱ組（造模后24 h給藥）、Ⅲ組（造模后48 h給藥），每組大鼠均12只。另選取12只大鼠作為假手術(shù)組（Sham），Sham組大鼠僅分離頸總、頸內(nèi)及頸外動(dòng)脈，不予以結(jié)扎及插線。

1.4實(shí)驗(yàn)用藥及干預(yù)方案活血開(kāi)竅湯煎劑組成：天麻7.5 g，牛膝15 g，遠(yuǎn)志10 g，葛根15 g，川芎10 g，丹參15 g，蘇合香0.5 g，郁金7.5 g，白僵蠶7.5 g，所煎湯劑濃縮至生藥成分2 g/mL，所用中藥均由天津市南開(kāi)醫(yī)院中藥房提供，由南開(kāi)醫(yī)院藥研室煎制濃縮而成。根據(jù)人鼠給藥劑量換算公式（d大鼠=d人× 0.71/0.11）［4］給予模型大鼠的活血開(kāi)竅湯生藥量為0.21 g/（60 g·d）。活血開(kāi)竅湯Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組分別在造模后2、24、48 h首次給藥，各治療組均連續(xù)灌藥7 d，假手術(shù)組及模型組分別在造模后24 h每天給予等量的生理鹽水連續(xù)灌胃7 d。

1.5觀察指標(biāo)及操作

1.5.1大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分根據(jù)Zea-Longa神經(jīng)功能損傷評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)［3］（0分:無(wú)神經(jīng)缺損癥狀。1分：不能伸展對(duì)側(cè)前爪。2分：行走時(shí)向偏癱側(cè)轉(zhuǎn)圈。3分：向偏癱側(cè)傾倒。4分：不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失動(dòng)）對(duì)各組大鼠神經(jīng)功能缺損情況分別于術(shù)后2 h、24 h、72 h、處死前2 h進(jìn)行評(píng)分。

1.5.2缺血側(cè)紋狀體伊文思藍(lán)（EB）測(cè)定各組大鼠干預(yù)7 d后于尾靜脈注射2%EB溶液（3 mL/kg），2 h后用生理鹽水行心臟灌注以清除血管內(nèi)的EB，斷頭取腦，放入液氮中迅速冰凍后移入-80℃冰箱中保存，將冰凍的腦組織在低溫恒溫槽中切成16～20 μm厚的切片，放入熒光顯微鏡對(duì)缺血側(cè)紋狀體組織進(jìn)行EB含量的測(cè)定。

1.5.3大腦皮質(zhì)Claudin-5陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的測(cè)定免疫組化法檢測(cè)大腦皮質(zhì)Claudin-5的表達(dá)：1）把切片置于37℃烘箱內(nèi)烘2 h，用0.01 mol/L磷酸鹽緩沖溶液（PBS）液漂洗5 min×3次。2）0.3%去離子水浸泡10 min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化酶，0.01 mol/L PBS液漂洗5 min×3次。3）山羊血清37℃封閉1 h，甩干，勿洗。4）加入以1∶200比例稀釋的山羊抗大鼠Claudin-5多克隆抗體4℃孵育過(guò)夜，0.01 mol/L PBS液漂洗5 min×3次。5）加入二抗37℃孵育1 h，取出，用0.01 mol/L PBS漂洗5 min×3次。6）加入辣根素37℃孵育15 min，取出，0.01 mol/L PBS液漂洗5 min×3次。7）二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色：加入0.01%DAB顯色液顯色（3 min，顯微鏡下掌握染色程度），自來(lái)水沖洗。8）蘇木素浸泡30 s復(fù)染、自來(lái)水沖洗。9）1%稀鹽酸分化10s-1%氨水返藍(lán)10 s-乙醇梯度脫水85%-90%-95%-100%，各1 min。10）二甲苯透明3 min×2次，用中性樹(shù)膠封片（陰性對(duì)照片以PBS緩沖液代替一抗，其余操作同前）。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理利用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較若方差齊采用LSD法，若方差不齊采用Dunnett’s T3法，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠神經(jīng)功能缺損比較大鼠約在造模后1～2 h內(nèi)蘇醒，Sham組無(wú)神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，模型組及各實(shí)驗(yàn)組大鼠均出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損癥狀。各實(shí)驗(yàn)組大鼠與模型組比較，神經(jīng)功能缺損評(píng)分差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1　各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能缺損評(píng)分（±s）Tab.1　Neural function defect scale at different time points of each group of rats（±s）分

表1　各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能缺損評(píng)分（±s）Tab.1　Neural function defect scale at different time points of each group of rats（±s）分

注：與Sham組相比，*P＜0.05；與模型組相比，#P＜0.05。

組別造模后2 h造模后24 h造模后48 h造模后7 d Sham組0000模型組5.66±0.72*5.57±0.58*5.47±0.54*5.34±0.68*活血開(kāi)竅湯Ⅰ組5.54±0.45*4.76±0.38*#4.38±0.65*#2.35±0.78*#活血開(kāi)竅湯Ⅱ組5.84±0.54*5.68±0.27*4.91±0.39*#3.74±0.64*#活血開(kāi)竅湯Ⅲ組5.71±0.62*5.68±0.43*5.36±0.75*4.72±0.81*#

2.2各組大鼠缺血側(cè)紋狀體EB含量比較各組大鼠缺血側(cè)紋狀體EB信號(hào)較對(duì)側(cè)明顯增強(qiáng)，而Sham組大鼠腦組織中未觀測(cè)到明顯的EB滲漏。模型組、活血開(kāi)竅湯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組雙側(cè)大腦EB含量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而各實(shí)驗(yàn)組大鼠缺血側(cè)紋狀體EB含量明顯低于模型組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)（P＜0.05），并且，活血開(kāi)竅湯Ⅱ組和Ⅲ組大鼠腦組織中EB濃度較Ⅰ組降低的更為明顯，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

2.3各組大鼠大腦皮質(zhì)Claudin-5陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)的比較Claudin-5在各組大鼠腦組織中呈陽(yáng)性表達(dá)，且染色呈棕黃色，在Sham組大鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)豐富。與假手術(shù)組相比，MCAO模型組和活血開(kāi)竅湯組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)量減少，造模后2 h首次給藥組Claudin-5的表達(dá)水平顯著降低，呈間斷表達(dá)?；钛_(kāi)竅湯Ⅱ組和Ⅲ組Claudin-5表達(dá)水平較模型組增加，不僅表達(dá)于微血管內(nèi)皮細(xì)胞，在微血管周圍的星形膠質(zhì)細(xì)胞亦可見(jiàn)其陽(yáng)性表達(dá)。與模型組比較，活血開(kāi)竅湯Ⅱ組、Ⅲ組腦組織中Claudin-5表達(dá)水平增高，各時(shí)間點(diǎn)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖1、表3。

表2　各組大鼠兩側(cè)大腦紋狀體中EB含量比較（±s）Tab.2　Comparison of EB content in both sides of the brain striatum in each group of rats（±s）μg/g

表2　各組大鼠兩側(cè)大腦紋狀體中EB含量比較（±s）Tab.2　Comparison of EB content in both sides of the brain striatum in each group of rats（±s）μg/g

注：與模型組相比，*P＜0.05；與Sham組相比，#P＜0.05；與活血開(kāi)竅湯I(xiàn)組相比，△P＜0.05。

組別缺血側(cè)非缺血側(cè)Sham組3.24±1.06*4.16±0.97模型組17.03±3.09#4.22±0.51活血開(kāi)竅湯Ⅰ組15.01±2.37#4.24±1.06活血開(kāi)竅湯Ⅱ組9.86±2.83*#△4.13±0.86活血開(kāi)竅湯Ⅲ組7.91±2.46*#△4.07±1.03

表3　各組大鼠大腦皮質(zhì)Claudin-5陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)及免疫組化評(píng)分（±s）Tab.3　Claudin-5 positive cells expression in cerebral cortex and immunohistochemical score in each group of rats（±s）

表3　各組大鼠大腦皮質(zhì)Claudin-5陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)及免疫組化評(píng)分（±s）Tab.3　Claudin-5 positive cells expression in cerebral cortex and immunohistochemical score in each group of rats（±s）

注：與模型組相比，*P＜0.05；與Sham組相比，#P＜0.05。

組別陽(yáng)性細(xì)胞比（%）整合光密度值Sham組26.00±5.36*62.56±25.5*模型組19.25±4.09#30.25±15.5#活血開(kāi)竅湯Ⅰ組21.75±3.37#42.01±15.6#活血開(kāi)竅湯Ⅱ組22.50±3.83*#44.67±7.11*#活血開(kāi)竅湯Ⅲ組23.37±3.46*#46.87±7.03*#

3　討論

腦梗死是指由各種原因引起的腦血流供應(yīng)障礙，進(jìn)而造成相應(yīng)缺血區(qū)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生不可逆性損傷，出現(xiàn)相應(yīng)神經(jīng)功能缺損癥狀的疾病，屬中醫(yī)學(xué)“中風(fēng)”、“偏枯”等范疇，也是目前導(dǎo)致人類死亡的第2大病因［5］。該病具有較高的復(fù)發(fā)率和致殘率，對(duì)患者本人及家屬造成了嚴(yán)重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。中國(guó)每年新發(fā)生腦卒中患者數(shù)在200萬(wàn)以上，每年死于腦卒中的人數(shù)超過(guò)150萬(wàn)；發(fā)生卒中后存活下來(lái)的患者多達(dá)600～700萬(wàn)，其中四分之三留有不同程度的后遺癥［6］。

圖1　各組大鼠大腦皮質(zhì)Claudin-5陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況Fig.1 Claudin-5 positive cells expression in cerebral cortex in each group of rats

歷代醫(yī)家對(duì)中風(fēng)病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)雖各有偏頗，不同流派見(jiàn)仁見(jiàn)智，但無(wú)論是風(fēng)、火、痰、瘀、虛何種病因所致，其病理變化的最終結(jié)局都是脈絡(luò)不通、血脈不暢?？梢哉J(rèn)為血瘀是中風(fēng)病的根本原因，而“瘀阻腦絡(luò)”則是缺血性中風(fēng)的病理本質(zhì)。由此可見(jiàn)，“血瘀閉阻，腦竅不通”是中風(fēng)病的本質(zhì)病機(jī)。因此開(kāi)竅啟閉，祛除瘀、痰、風(fēng)等邪氣則為治療中風(fēng)病的根本大法，活血開(kāi)竅湯即是基于上述對(duì)中風(fēng)病的基本認(rèn)識(shí)而進(jìn)行組方用藥的，并為大量臨床實(shí)踐證明療效顯著。方中川芎、丹參、牛膝活血祛瘀；郁金祛痰開(kāi)郁，并有加強(qiáng)活血化瘀的功效；蘇合香開(kāi)竅辟穢；遠(yuǎn)志祛痰開(kāi)竅，輔以白僵蠶共奏開(kāi)竅辟穢祛痰之功；天麻、白僵蠶合用以熄風(fēng)平肝；葛根升陽(yáng)生津以利腦。諸藥合用，共奏開(kāi)竅活血祛痰之效。

BBB是一個(gè)擴(kuò)散屏障，由腦的微血管系統(tǒng)和周細(xì)胞組成，BBB只允許水和脂溶性小分子自由擴(kuò)散，對(duì)維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)起著重要的作用［7］。在腦缺血后，血腦屏障受到一定的破壞，其對(duì)小分子物質(zhì)EB的通透性會(huì)增加，所以EB滲透率變化是衡量BBB通透性的一個(gè)客觀的指標(biāo)［8］。而血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的緊密連接則是形成BBB的關(guān)鍵因素［9］，緊密連接使大腦形成了一個(gè)擴(kuò)散屏障，維持了中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)。其中，跨膜蛋白Claudin對(duì)BBB的緊密連接起著重要作用。Claudin和相鄰內(nèi)皮細(xì)胞的Claudin相互獨(dú)特地連接在一起，進(jìn)而形成了緊密連接的初級(jí)封口［10］。當(dāng)Claudin蛋白出現(xiàn)結(jié)構(gòu)和功能上的障礙時(shí)，血腦屏障功能都會(huì)隨之改變。而Claudins家族成員，尤其是Claudin-5是決定細(xì)胞旁通透性的一個(gè)重要因素［11］。所以，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察MCAO大鼠缺血腦組織Claudin-5蛋白含量及EB滲透率的變化來(lái)反應(yīng)通竅活血湯對(duì)大鼠BBB通透性的影響是可行的。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，所有實(shí)驗(yàn)組大鼠缺血區(qū)大腦紋狀體中EB含量均低于MCAO模型對(duì)照組，表明實(shí)驗(yàn)組各組MCAO模型大鼠BBB的通透性低于模型對(duì)照組，由此可推斷，活血開(kāi)竅湯發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制與降低大鼠BBB的通透性，最終維持BBB的完整性相關(guān)。并且，相關(guān)的多項(xiàng)研究［12-14］已證實(shí)，活血類藥物對(duì)BBB確有一定的保護(hù)作用，本研究結(jié)果與以上研究結(jié)果基本一致。其中，活血開(kāi)竅湯Ⅱ組和Ⅲ組模型大鼠缺腦血區(qū)紋狀體中EB濃度較Ⅰ組降低的更為明顯（P＜0.05），表明急性期使用活血開(kāi)竅湯對(duì)降低BBB的通透性作用并不十分明顯，而在恢復(fù)期應(yīng)用活血開(kāi)竅湯對(duì)大鼠BBB的通透性改善地更為顯著。同時(shí)，MCAO模型大鼠缺血側(cè)腦組織Claudin-5蛋白表達(dá)明顯減少，活血開(kāi)竅湯組相同區(qū)域陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)雖較假手術(shù)組偏少，但與MCAO模型對(duì)照組相比，Claudin-5陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)量顯著增高（P＜0.05）。并且在活血開(kāi)竅湯3個(gè)亞組中，以Ⅱ組Claudin-5陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)最多，亦說(shuō)明活血開(kāi)竅湯在非急性期使用比在急性期使用對(duì)BBB的保護(hù)作用更為明顯。

4　結(jié)論

活血開(kāi)竅湯可通過(guò)減輕BBB的通透性，降低缺血區(qū)大腦紋狀體中的EB含量，減少Claudin-5蛋白的破壞從而保護(hù)MCAO大鼠血腦屏障，但在急性期應(yīng)用活血開(kāi)竅湯對(duì)BBB的保護(hù)作用并不明顯，且尚不能證明在非急性期越早給予活血開(kāi)竅湯對(duì)大鼠BBB的保護(hù)作用就越顯著。腦梗死是一個(gè)多環(huán)節(jié)、多途徑的復(fù)雜的病理過(guò)程，通過(guò)研究活血開(kāi)竅湯對(duì)BBB的影響來(lái)驗(yàn)證其對(duì)MCAO模型大鼠腦保護(hù)作用，為活血開(kāi)竅湯神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制的研究奠定了一定的基礎(chǔ)。而活血開(kāi)竅湯是否適合在腦缺血急性期使用，以及何時(shí)給藥效果最佳等問(wèn)題還有待于后續(xù)深入的研究。

［1］張麗麗.活血開(kāi)竅湯對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷NO含量及細(xì)胞凋亡的影響［D］.天津:天津醫(yī)科大學(xué)，2013.

［2］李明花.活血開(kāi)竅湯對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠SOD、MDA的影響［D］.天津:天津醫(yī)科大學(xué)，2013.

［3］Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occludion without crainectomy in rats［J］.Stroke，1989，20（1）:8-87，84-91.

［4］Zhu Xu，Li SJ，Hu HH，et al.Neuroprotective effects of Xiao-Xuming decoction against ischemic neuronal injure in vivo and in vitro［J］.J Ethnopharmacol，2010，127（1）:38-46.

［5］常富業(yè)，李云，陳燕，等.中風(fēng)病二級(jí)預(yù)防中醫(yī)藥參與狀況的研究［J］.天津中醫(yī)藥，2010，29（2）:99-100

［6］王文志.中國(guó)腦卒中流行病學(xué)特征和社區(qū)人群干預(yù)［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志（電子版），2009，1（2）:49-53.

［7］Bernacki J，Dobrowolska A，Nierwi?ska K，et al.Physiology and pharmacological role of the blood-brain barrier［J］.Pharmacological Reports，2008，60（5）:600-622.

［8］Strbian D，Durukan A，Pitkonen M，et al.The blood-brain barrier is continuously open for several weeks following transient focal cerebral ischemia［J］.Neuroscience，2008，153（1）:175-81.

［9］李蓉，劉國(guó)龍.大鼠C6膠質(zhì)瘤血腦屏障超微結(jié)構(gòu)與緊密連接蛋白Claudin-5變化的研究［J］.中國(guó)神經(jīng)腫瘤雜志，2008，6（3）: 184-188.

［10］Ballabh P，Braun A，Nedergaard M.The blood-brain barrier:an overviewStructure，regulation，andclinicalimplications［J］. Neurobiology of Disease，2004，16（1）:1-13.

［11］Honda M，Nakagawa S，Hayashi K，et al，Adrenomedullin inproves the blood-brain barrier function through the express of Claudin-5［J］. Cell Mo Neurobiol，2006，26（2）:109-118.

［12］趙連根，劉大全，陳玉玲.活血化瘀注射液I號(hào)對(duì)大鼠高血壓性血-腦屏障破壞的保護(hù)作用［J］.天津中醫(yī)藥，2006，23（1）:67-69.

［13］何銳，王慕真，鄧婉青，等.活血化瘀藥抗大鼠腦缺血-再灌注性血腦屏障損傷的保護(hù)作用［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2003，23（10）: 579-582.

［14］何平平.腦缺血再灌注損傷對(duì)羥基紅花黃色素A透過(guò)血腦屏障的研究［D］.濟(jì)南：山東大學(xué)，2009.

（本文編輯：馬英，滕曉東）

Effects of“Huoxue Kaiqiao”decoction on the behavior and blood-brain barrier in middle cerebral artery occlusion rats

ZHAO Jin-sheng1，2，MENG Fan-zheng1，YIN Yun2，LI Ping3
（1.Department of Neurology，Tianjin Nankai Hospital，Tianjin 300100，China；2.Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China；3.Tianjin Third Central Hospital，Tianjin 300170，China）

［Objective］To investigate the time-effect relationship of“Huoxue Kaiqiao”decoction on the behavior and blood-brain barrier（BBB）in middle cerebral artery occlusion rats.［Methods］The 48 MCAO Wistar model rats were randomly divided into model group and“Huoxue Kaiqiao”decoction groups（group I:administration 2 hours after modeling；group II:administration 24 hours after modeling and group III:administration 48 hours after modeling）.Each group contained 12 rats，and another 12 rats made up sham operation group.Zealonga scoring method was used to observe the neurological deficit situation of rats.Two hours before death from intravenous injection of EB solution in order to observe changes in BBB permeability，and another taking fixed brain to detect Claudin-5 protein content by immunohistochemistry method.［Results］Compared with the control group，nerve function were improved in all treatment groups（P＜0.05）. Cerebral ischemic striatum EB in treatment groupⅡandⅢwere lower than the model group（P＜0.05），but the content of Claudin-5 in these groups were high（P＜0.05）.However，the difference was not statistically significant between groupⅡand groupⅢ，and between group I and model group（P＞0.05）.［Conclusion］Resuscitation promoting blood circulation by reducing BBB permeability soup can reduce damage Claudin-5 protein in rat brain barrier to protect MCAO，but the protective effect in the acute phase of the BBB is not obvious，and yet could not prove that in the non-acute phase sooner promoting blood circulation giving resuscitation BBB decoction of the more remarkable.

“Huoxue Kaiqiao”decoction；MCAO；blood-brain barrier；Claudin-5 protein

R743.32

A

1672-1519（2015）11-0679-05

天津市科技攻關(guān)項(xiàng)目（05YFSZSF02600）。

趙金生（1986-），男，博士研究生，住院醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合腦血管病的防治和循證醫(yī)學(xué)研究工作。

李平，E-mail：lipingtjutcm@sina.com。

（2015-05-29）