HS-SPME-GC/MS法分析連花清瘟膠囊制劑原料中的揮發(fā)性成分*

賈偉娜，王春華，王宏濤，田書(shū)彥，韓　雪，朱　彥

HS-SPME-GC/MS法分析連花清瘟膠囊制劑原料中的揮發(fā)性成分*

賈偉娜1，3，王春華1，3，王宏濤2，田書(shū)彥2，韓雪1，3，朱彥1，3

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津300193；2.石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，石家莊050035；3.天津國(guó)際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院中藥新藥研發(fā)中心，天津300457）

［目的］分析連花清瘟膠囊制劑原料中的揮發(fā)性成分。［方法］采用頂空固相微萃取法（HS-SPME）萃取連花清瘟膠囊制劑原料中的揮發(fā)性成分，通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜法（G C/MS）對(duì)其中所含揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，經(jīng)NIST05質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)自動(dòng)檢索對(duì)未知化學(xué)成分進(jìn)行準(zhǔn)確定性，并采用峰面積歸一化法計(jì)算各個(gè)化學(xué)成分的相對(duì)含量。［結(jié)果］從連花清瘟膠囊制劑原料的揮發(fā)性成分中共鑒定出53種化合物，占總揮發(fā)性成分的98.30%，其中l(wèi)-menthol含量最高，其相對(duì)含量為94.84%，其他含量較高的揮發(fā)性成分為patchoulialcohol（1.101%）、α-bulnesene（0.398%）、α-gurjunene（0.256%）、α-guainene（0.210%）、α-patchoulene（0.171%）和β-patchoulene（0.111%）。［結(jié)論］HS-SPME-GC/MS法可以簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的分析連花清瘟膠囊制劑原料中的揮發(fā)性化學(xué)成分。

連花清瘟膠囊；頂空固相微萃取；氣質(zhì)聯(lián)用分析；揮發(fā)性成分

連花清瘟膠囊是由石家莊以嶺藥業(yè)有限公司研制并開(kāi)發(fā)，由經(jīng)典名方“麻杏石甘湯”和“銀翹散”兩種方劑化裁而來(lái)［1］。連花清瘟膠囊由連翹、金銀花、炙麻黃、炒苦杏仁、生石膏等13味中藥加工制成的膠囊制劑，具有清瘟解毒、宣肺泄熱之功效，常用于治療流行性感冒屬熱毒襲肺證，癥見(jiàn)發(fā)熱或高熱、惡寒、肌肉酸痛等［2］?，F(xiàn)代藥理研究表明，連花清瘟膠囊具有抗病毒、抗菌和抗炎等活性［3-6］，用于治療流行性感冒療效顯著［7-8］。目前，關(guān)于連花清瘟膠囊的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究較少，有關(guān)其揮發(fā)性化學(xué)成分的研究還未見(jiàn)報(bào)道。本研究首次采用頂空固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法（HS-SPME-GC/MS法）鑒定了連花清瘟膠囊制劑原料中的53種揮發(fā)性成分，為連花清瘟膠囊的臨床應(yīng)用與升級(jí)開(kāi)發(fā)提供了科學(xué)研究數(shù)據(jù)［9-11］。

1　材料與方法

1.1原料連花清瘟膠囊制劑原料由石家莊以嶺藥業(yè)有限公司提供（批號(hào)121003）。

1.2儀器Varian 4000 GC-Ion Trap-MS氣相色譜-離子阱-質(zhì)譜儀（Varian，WalnutCreek，CA，美國(guó)），固相微萃取裝置（Supelco Inc.，Bellefonte，美國(guó)），包括手柄、聚二甲氧基硅烷/二乙烯基苯（65μm PDMSDVB）吸附纖維，15mL頂空瓶（德國(guó)CNW公司）。

1．3方法

1.3.1頂空固相微萃取精密稱(chēng)取1.0 g連花清瘟膠囊制劑原料，置于15m L頂空瓶中，將老化好的固相微萃取裝置插入密封頂空瓶中，推出萃取頭（萃取頭距樣品表層約1 cm），于80℃頂空萃取30min，然后將固相微萃取裝置立即插入GC/MS進(jìn)樣口，在250℃下解吸5min進(jìn)行分析［12-13］。

1.3.2氣質(zhì)分析條件氣相色譜條件：色譜柱型號(hào)為VF-5m s（30m×0.25mm×0.25μm），進(jìn)樣口溫度為250℃，分流模式，載氣為氦氣（He），流速為1mL/min。柱箱升溫程序如下：初始溫度為40℃，保持3min，然后以4℃/min的速率升至150℃，保持1min，最后以8℃/min的速率升至250℃，保持6min。

質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源（EI），電力電壓70eV，離子阱和傳輸線(xiàn)溫度分別為220℃和280℃，掃描方式為全掃描，質(zhì)量掃描范圍m/z50-500。

1.3.3定性與定量分析每個(gè)峰的質(zhì)譜圖采用NIST05質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)自動(dòng)檢索進(jìn)行定性分析，單個(gè)化合物的相對(duì)含量用其峰面積相對(duì)于總峰面積的百分比來(lái)表示，相似度大于75%時(shí)即可認(rèn)為是可識(shí)別化合物。

2　結(jié)果

連花清瘟膠囊制劑原料中揮發(fā)性成分經(jīng)萃取及GC/MS分析得到的總離子流圖，見(jiàn)圖1。將各個(gè)色譜峰的質(zhì)譜數(shù)據(jù)與NIST05質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)比并自動(dòng)檢索定性分析，共鑒定出53種化合物，占揮發(fā)性總成分的98.30%，并用峰面積歸一化法確定了各揮發(fā)性成分的相對(duì)百分含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

分析結(jié)果表明，l-me nthol（94.84%）是連花清瘟膠囊制劑原料中的主要揮發(fā)性成分，其他高濃度揮發(fā)性成分為patchoulialcohol（1.101%）、α-bulnesene（0.398%）、α-gurjunene（0.256%）、α-guaiene（0.210%）、α-patchoulene（0.171%）和β-patchoulene（0.111%）。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，這些揮發(fā)性化合物具有良好的抗病毒［14］、抗炎［14］、抗菌［15］等活性，可能與治療病毒性感冒藥效具有相關(guān)性［16-18］。

圖1　連花清瘟膠囊制劑原料中揮發(fā)性成分總離子流圖Fig.1　The total ion chromatogram of volatile com ponents in raw materialsof Lianhua Qingwen preparations

表1　連花清瘟膠囊制劑原料中揮發(fā)性成分分析結(jié)果Tab.1　The analyzed resultsof volatile com ponents from raw materialsof Lianhua Qingwen preparations

3　討論

本研究通過(guò)采用HS-SPME-GC/MS分析連花清瘟膠囊制劑原料中揮發(fā)性成分。該方法操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，樣品用量少，重現(xiàn)性好，萃取的化合物種類(lèi)多，能較好地反映連花清瘟膠囊制劑原料中揮發(fā)性成分組成基本情況，并且可以在沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)樣品的情況下，經(jīng)NIST05質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)自動(dòng)檢索，對(duì)這些未知化合物進(jìn)行準(zhǔn)確定性，同時(shí)采用峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析，為連花清瘟膠囊制劑原料中揮發(fā)性成分檢測(cè)提供了一種新的有效手段，并為連花清瘟膠囊的進(jìn)一步研究與升級(jí)開(kāi)發(fā)提供一定的科學(xué)研究數(shù)據(jù)。

［1］劉春援，李曉強(qiáng)，蔡紹乾.連花清瘟膠囊的藥理與臨床研究進(jìn)展［J］.中藥藥理與臨床，2010，26（6）:84-85.

［2］周沙，周瑩君，馬桂云，等.連花清瘟膠囊穩(wěn)定性的考察［J］.河北化工，2012，35（3）:16-17.

［3］吳以嶺.解讀連花清瘟膠囊［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2005，3（11）:120-121.

［4］黃明朝.連花清瘟膠囊研究進(jìn)展［C］.絡(luò)病學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究（9），2014:417-418.

［5］胡憶芬.連花清瘟膠囊的藥理及臨床療效分析［J］.現(xiàn)代診斷與治療，2013，24（9）:2012.

［6］李佳，宋新波，余保林，等.高效液相色譜法測(cè)定光果甘草中光甘草定的含量［J］.天津中醫(yī)藥，2008，25（2）:157-158.

［7］王新功，崔學(xué)軍，劉新生，等.連花清瘟膠囊治療流行性感冒的臨床療效觀察［J］.中國(guó)藥房，2008，19（27）:2416-2418.

［8］Duan ZP，Jia ZH，Zhang J，etal.NaturalherbalmedicineLianhuaqingwen capsule anti-influenza A（H1N1）trial:a randomized，double blind，positive controlled clinical trial［J］.Chin Med J，2011，124（8）: 2925-2933.

［9］劉時(shí)喬，張新鑫，單淇，等.胡黃連中酚類(lèi)化合物的分離及UPLC-ESI-MS分析［J］.天津中醫(yī)藥，2012，29（6）:583-587.

［10］王健，李錦，孫瑜，等.GC-MS鑒別清熱抗感顆粒中青蒿、荊芥穗和薄荷［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，26（4）:210-212.

［11］趙培莉，吳靜明，張毅，等.氣相色譜法同時(shí)測(cè)定中藥糖漿劑中3種防腐劑含量［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，32（1）:40-42.

［12］降升平，張小紅，張玲玲，等.SPME-GC-MS法分析室內(nèi)空氣中揮發(fā)性有機(jī)物［J］.太原理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，44（3）:272-277.

［13］張軍安，陳波.頂空固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用分析酸棗仁揮發(fā)性成分［J］.中藥材，2012，35（2）:235-240.

［14］Kiyohara H，Ichino C，Kawamura Y，etal.Patchoulialcohol:in vitro directanti-influenza virussesquiterpene in Pogostemon cablin Benth［J］.JNatMed，2012，66（1）:55-61.

［15］劉琥琥，羅集鵬，賴(lài)沛煉.廣東高要與吳川產(chǎn)廣藿香提取物對(duì)腸道致病菌抗菌作用的比較研究［J］.中藥材，1999，22（8）:408-511.

［16］張鏢.中藥復(fù)方研究現(xiàn)狀與思路探析［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，26（2）:104-106.

［17］王以炳，張?zhí)烀?，楊玉梅，?連花清瘟膠囊治療病毒性感冒的有效性與安全性觀察［J］.臨床肺科雜志，2008，13（9）:1118-1119.

［18］羅榮，張貴君.中藥藥效組分的理論與實(shí)踐 （二）［J］.天津中醫(yī)藥，2014，31（2）:121-124.

（本文編輯：高杉，于春泉）

Determ ining volatiles from raw materialsof Lianhua Qingwen preparationsby HS-SPME-GC/MS

JIAWei-na1，3，WANGChun-hua1，3，WANGHong-tao2，TIANShu-yan2，HANXue1，3，ZHUYan1，3
（1．Tianjin Modern ChineseMedicine Key Laboratory-Provinceand Ministry co-established State Key Laboratory Cultivation Base，Instituteof TraditionalChineseMedicine，Tianjin University of TraditionalChineseMedicine，Tianjin 300193，China；2.Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co.，Ltd，Shijiazhuang 050035，China；3.Research and DevelopmentCenter of TraditionalChineseMedicine，Tianjin International JointAcademy of Biotechnology&Medicine，Tianjin 300457，China）

［Objective］To analyze the volatiles from raw materialsof Lianhua Qingwen preparations.［M ethods］Headspace solid-phase micro-extraction（HS-SPME）technique was employed to extract the volatile compounds from raw materials of Lianhua Qingwen preparations.The volatile componentswere isolated and identified successfully by gas chromatography/mass spectrometry（GC/MS）and matched with NIST05 mass spectra library to retrieve the unknown chemical components automatically，the relative contents in percentage of each chemical composition were calculated by peak area normalizationmethod.［Results］Fifty-three volatile compounds were temporarily identified，corresponding to 98.30%of totaloils.Themajor volatile componentwas l-menthol（94.84%），and the other high levelsof ingredientswere patchoulialcohol（1.101%），α-bulnesene （0.398%），α-gurjunene （0.256%），α-guaiene（0.210%），αpatchoulene（0.171%）andβ-patchoulene（0.111%）.［Conclusion］The volatile components from raw materials of Lianhua Qingwen preparations can be simp ly，rapidly and accurately analyzed by HS-SPME-GC/MSmethod.

LianhuaQingwen preparation；SPME；GC/MS；volatile constituent

R284

A

1672-1519（2015）02-0110-03

10.11656/j.issn.1672-1519.2015.02.12

天津市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（13JCZDJC28600、12JCYBJC32400）。

賈偉娜（1989-），女，碩士研究生，主要從事中藥化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究。

王春華，E-mail:pharmwch@126.com。

（2014-09-29）