新型微生態(tài)飼料添加劑的致畸試驗

郝福星　周澤偉　鄭玲敏　張雨梅

摘要：微生態(tài)制劑是飼料及養(yǎng)殖業(yè)中應用比較廣泛的一類添加劑，通過大鼠傳統(tǒng)致畸試驗，評價某生物有限公司研制的新型微生態(tài)飼料添加劑的致畸作用。在Wistar大鼠受孕7～15 d期間，分別對其給予500、100、20 mg/kg劑量的微生態(tài)飼料添加劑進行灌胃，以生理鹽水作為陰性對照；用畸胎率、活胎仔平均畸形率、母體畸胎率等指標評價其致畸作用。結(jié)果表明，受試物各劑量組的孕鼠行為正常，無中毒或死亡情況；受試物各劑量組的吸收胎率、死胎率、畸胎率、活胎仔平均畸形率、母體畸胎率均不高于對照組，且無顯著差異。綜合試驗結(jié)果可知，該飼料添加劑傳統(tǒng)致畸試驗呈陰性，無明顯的致畸作用。

關(guān)鍵詞：微生態(tài)制劑；飼料添加劑；糞腸球菌；致畸試驗；大鼠

中圖分類號： S816.73 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2015）07-0218-02

微生物飼料添加劑也稱微生態(tài)制劑，是當前飼料及養(yǎng)殖業(yè)中應用比較廣泛的一類添加劑，常作為藥物添加劑的有效替代品使用。動物微生態(tài)制劑是由正常菌群微生物制成的一類環(huán)保生物制品，它可通過調(diào)節(jié)機體微生態(tài)平衡來預防疾病、提高飼料轉(zhuǎn)化率、促進動物健康、保護生態(tài)環(huán)境，是無毒、無污染的飼料添加劑產(chǎn)品[1]，在畜牧業(yè)、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中有廣泛應用前景[2-3]。糞腸球菌別稱糞鏈球菌，是乳酸菌中的一種，該菌是一種兼性厭氧菌，是能產(chǎn)多種酶、維生素（主要是B族維生素）的有益菌，在動物體內(nèi)可產(chǎn)生大量乳酸、分解酶、多種促生長因子[4]。作為畜禽飼料添加劑，糞腸球菌可用于防治畜禽因腸道菌群失調(diào)引起的下痢，具有調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)、減少病原菌侵襲、抑制有害菌生長的作用，并且能夠提高飼料轉(zhuǎn)化率、降低生產(chǎn)成本[5-6]。本研究通過大鼠的傳統(tǒng)致畸試驗，考察蛋白質(zhì)修飾糞腸球菌微生態(tài)新制劑作為飼料添加劑使用是否存在致畸作用，以期為該產(chǎn)品的應用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗試劑

試驗試劑為蛋白質(zhì)修飾糞腸球菌粉劑，活菌數(shù) 5×109 CFU/g，由江蘇省某生物有限公司研制。配制不同濃度的水溶液，以10 mL/kg的體積灌胃。

1.2 試驗動物

8周齡Wistar大鼠（清潔級），約100只，購自揚州大學比較醫(yī)學中心。動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（蘇）2012-0004，使用許可證號：SYXK（蘇）2012-0029。分籠飼養(yǎng)，自由采食飲水，室溫（22±3） ℃，自然光照，相對濕度55%～75%。

1.3 試驗方法

1.3.1 孕鼠及劑量設置 雌鼠、雄鼠按1∶1同籠，次日早晨以檢查到陰道栓的為受孕鼠，記為受孕開始。在受孕7 ～15 d，每天經(jīng)口給予微生態(tài)制劑。試驗分3個受試物劑量組和陰性對照組，每組10只大鼠。添加劑劑量分別設為500、100、20 mg/kg，灌胃給藥；陰性對照組用生理鹽水代替。給藥期間隔天稱1次質(zhì)量，并根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整添加劑劑量。

1.3.2 畸形檢查 于孕20 d稱質(zhì)量后處死孕鼠，剖開腹腔，取出子宮。分別檢查并記錄左、右側(cè)的黃體數(shù)、窩質(zhì)量（子宮連胎鼠）、子宮質(zhì)量，計數(shù)活產(chǎn)幼仔數(shù)、死胎、吸收胎數(shù)。根據(jù)農(nóng)業(yè)部1247號公告中《獸藥大鼠傳統(tǒng)致畸試驗指導原則》中的相應方法進行胎鼠外觀畸形、內(nèi)臟畸形、骨骼畸形的檢查，記錄畸胎總數(shù)和畸形總數(shù)[3]，計算死胎率、吸收胎率、畸胎率、活胎仔平均畸形率、母體畸胎率。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

用SPSS 12.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)用“平均值±標準差（x±s）”表示；顯著性分析采用t檢驗或χ2檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 對孕鼠體質(zhì)量的影響

給藥期間孕鼠的一般狀況良好，飲食正常，未出現(xiàn)異常癥狀。試驗期間各劑量組孕鼠體質(zhì)量與陰性對照組比較無顯著性差異，受孕20 d孕鼠體質(zhì)量見表1。

2.2 對大鼠生殖機能的影響

受孕20 d后統(tǒng)計微生態(tài)制劑處理及正常對照組孕鼠的黃體數(shù)、著床數(shù)、活胎數(shù)、吸收胎數(shù)、死胎數(shù)。由表2可見，各處理組吸收胎率、死胎率均低于對照組；黃體數(shù)、著床數(shù)、總仔數(shù)、活胎數(shù)、吸收胎數(shù)、死胎數(shù)與對照組比較差異不明顯。

2.3 對胎鼠發(fā)育的影響

受孕20 d對各試驗組孕鼠進行剖檢，由表3可見，各處理組平均窩仔數(shù)、尾長與對照組無顯著差異；受試物處理組胎鼠體質(zhì)量、體長顯著低于陰性對照組（P<0.05）；100、500 mg/kg 劑量胎盤質(zhì)量顯著低于陰性對照組（P<0.05）。

2.4 對胎鼠畸形的影響

畸形檢查中發(fā)現(xiàn)500 mg/kg劑量處理組有1只胎鼠一側(cè)眼球缺失，20 mg/kg劑量處理組、陰性對照組各有1只一側(cè)腎臟缺失，未發(fā)現(xiàn)骨骼畸形；各劑量組在常見各畸形指標上，與正常對照組無明顯差異，詳見表4。

3 結(jié)論與討論

試驗結(jié)果表明，本新型微生態(tài)飼料添加劑對Wistar大鼠無明顯的致畸作用。本試驗中受試物對大鼠的生殖機能指標如懷孕率、黃體數(shù)、著床數(shù)、窩仔數(shù)、吸收胎率、死胎率等無明顯影響，對胎鼠也無明顯的致畸作用。但受試物處理組胎鼠的體質(zhì)量及體長均低于對照組，是受試物的胚胎毒性還是由于飼料攝入不足導致母體營養(yǎng)水平不夠引起的，還須進一步的試驗研究。受試物組懷孕母鼠體質(zhì)量均稍低于對照組數(shù)據(jù)，可能與受試物添加后飼料適口性不夠好引起攝入減少有關(guān)。如果進行繁殖試驗，特別是多代的繁殖試驗，可以進一步評估對胎兒生長的影響。

參考文獻：

[1]滕 穎，陳先國. 動物微生態(tài)制劑的研究進展[J]. 中國獸藥雜志，2005，39（11）：47-50.

[2]王金合. 微生態(tài)飼料添加劑及其在畜禽生產(chǎn)中的應用研究現(xiàn)狀[J]. 畜牧與飼料科學，2009，30（2）：36-38.

[3]丁昕穎，韓永勝，丁得利，等. 飼用微生態(tài)制劑在畜牧生產(chǎn)中的應用及問題[J]. 中國畜禽種業(yè)，2014（2）：25-27.

[4]王 紅，許玉軍. 動物微生態(tài)制劑的分類與應用條件[J]. 養(yǎng)殖技術(shù)顧問，2012（11）：56.

[5]李笑櫻，范 彧，馬秋剛，等. 微生態(tài)制劑對產(chǎn)蛋后期蛋雞飼料營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響[J]. 中國飼料，2011（20）：20-23.

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