高效液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中的甲醛

劉成文

摘要 通過(guò)在提取甲醛的同時(shí)進(jìn)行衍生反應(yīng)，采用液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中的甲醛含量，確定了有關(guān)測(cè)定的參數(shù)。結(jié)果表明：該方法具有前處理操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、精密度高等優(yōu)點(diǎn)，能有效提高檢測(cè)效率，適合于批量測(cè)定水產(chǎn)品中的甲醛。

關(guān)鍵詞 甲醛；水產(chǎn)品；液相色譜；測(cè)定

中圖分類號(hào) TS254.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2015）12-0274-02

Determination of Formaldehyde in Aquatic Products by HPLC

LIU Cheng-wen

（Longgang District Quality Supervision and Inspection Center of Aquatic Products of Shenzhen City，Shenzhen Guangdong 518172）

Abstract A high performance liquid chromatographic（HPLC）method for determination of formaldehyde in aquatic products by extract and derivatization at the same time was developed.Results showed that this method was simple and had good linear relationship and good repetition.This method was available to determine the formaldehyde in aquatic products with satisfactory results.

Key words formaldehyde；aquatic products；HPLC；determination

甲醛，又名蟻醛、福爾馬林，是一種具有強(qiáng)還原性的原生質(zhì)毒素，有較高的毒性，可破壞生物細(xì)胞的原生質(zhì)，進(jìn)入人體器官后，對(duì)人的神經(jīng)系統(tǒng)、肺、肝臟均有損害[1]，可致癌、致畸[2]，是食品中的禁用物質(zhì)[3-4]。因甲醛具有定型、防腐作用，一些不法商販為了使水產(chǎn)品和水發(fā)食品保持較好的感官和延長(zhǎng)保質(zhì)期，獲得較高的利潤(rùn)，在水產(chǎn)品中人為添加甲醛，而水產(chǎn)品中的甲醛很難通過(guò)清洗、烹調(diào)消除，嚴(yán)重危害消費(fèi)者的身心健康。

目前，常用的水產(chǎn)品中甲醛檢測(cè)方法主要有分光光度法[5-7]、氣相色譜法[8]、高效液相色譜法等[9-11]。分光光度法由于前處理采用蒸餾法，操作不易控制，回收率較低，且不適合批量檢測(cè)；與之相比，色譜法具有準(zhǔn)確度高、抗干擾能力強(qiáng)等特點(diǎn)。已有文獻(xiàn)中，液相色譜法前處理較復(fù)雜，需先提取再衍生化、凈化，本文通過(guò)對(duì)提取條件和衍生條件等進(jìn)行研究，在提取甲醛的同時(shí)進(jìn)行衍生反應(yīng)，有效地提高了檢測(cè)效率，建立了適合用于水產(chǎn)品中甲醛測(cè)定的高效液相色譜法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試劑。甲醛標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)100 mg/L；乙腈；乙酸銨；冰乙酸；2，4-二硝基苯肼（純度≥99%）。

1.1.2 儀器與設(shè)備。高效液相色譜儀（配有紫外檢測(cè)器）；水浴搖床；高速冷凍離心機(jī)；電子天平。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件。色譜柱：waters Sunfire C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（70∶30，V/V）；流速、檢測(cè)波長(zhǎng)、柱溫、進(jìn)樣量分別為1.0 mL/min、365 nm、40 ℃、20 μL。

1.2.2 樣品處理。①溶液配制。2，4-二硝基苯肼乙腈溶液（0.6 g/L）：稱取2，4-二硝基苯肼300 mg，用乙腈溶解定容至500 mL。緩沖溶液：稱取4.82 g乙酸銨，以適量水溶解，冰乙酸調(diào)pH值至5左右，定容至500 mL。衍生液：將2，4-二硝基苯肼乙腈溶液與緩沖液按1∶1（V/V）混合均勻。②樣品提取。準(zhǔn)確稱取經(jīng)勻漿的樣品2.0 g，置于50 mL具塞塑料離心管中，準(zhǔn)確加入20.0 mL衍生液，漩渦混合均勻后置于50 ℃恒溫水浴搖床中，200 r/min振搖，每隔10 min取出混勻1次，振搖1 h后取出冷卻至室溫。③樣品凈化。將提取液以10 000 r/min離心5 min，取適量上清液過(guò)0.45 μm微孔濾膜。④標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的配制。取不同體積的100 mg/L甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于10 mL容量瓶中，加衍生液定容，混勻，置于50 ℃恒溫水浴搖床中，200 r/min振搖1 h，取出冷卻至室溫，得濃度分別為0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mg/L標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。過(guò)0.45 μm微孔濾膜，經(jīng)高效液相色譜測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。用保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 反應(yīng)條件的選擇

為了解衍生溫度對(duì)結(jié)果的影響，本試驗(yàn)對(duì)同一樣品在不同的衍生溫度（分別為30、40、50、60 ℃）下甲醛的含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明：在50 ℃衍生能獲得最大的峰面積，即衍生效果最好。

為了解水浴時(shí)間對(duì)結(jié)果的影響，本試驗(yàn)分別試驗(yàn)了40、50、60、70、80、90 min的衍生化時(shí)間對(duì)結(jié)果的影響。結(jié)果表明，在衍生化60 min時(shí)，衍生基本完成，因此本試驗(yàn)將衍生化時(shí)間定為60 min。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性方程

將配制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液，按照1.2.1中的色譜條件進(jìn)行上機(jī)測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以甲醛濃度為橫坐標(biāo)，得到線性方程Y=1.02×104+6.12×105X，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 9。

2.3 準(zhǔn)確度和精密度

分別取秋刀魚(yú)和大黃魚(yú)樣品2.0 g，加入相當(dāng)于樣品含量5、10、20 mg/kg的甲醛，每個(gè)水平設(shè)7個(gè)平行，按1.2.2方法對(duì)樣品進(jìn)行處理后，上機(jī)測(cè)定，計(jì)算回收率及方法的精密度，結(jié)果見(jiàn)表1?？梢钥闯?，當(dāng)添加水平>5 mg/kg時(shí)，甲醛回收率為84.6%～87.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%，符合分析要求。endprint

2.4 檢出限

按照方法所規(guī)定的稱樣量和定容體積，根據(jù)3倍信噪比（S/N），計(jì)算出本方法的檢出限為0.2 mg/kg。

2.5 樣品測(cè)定

利用本方法分別對(duì)5個(gè)未知樣進(jìn)行檢測(cè)，其中未知樣1和未知樣2為經(jīng)快速檢測(cè)方法確定為陽(yáng)性的樣品，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2?？梢钥闯?，未知樣1、2測(cè)得的甲醛含量較高，其余未知樣測(cè)得甲醛含量較低或未檢出，可推斷未知樣1、2可能人為添加了防腐劑甲醛。

3 結(jié)論

采用2，4-二硝基苯肼乙腈溶液及緩沖液在提取水產(chǎn)品中甲醛的同時(shí)進(jìn)行衍生反應(yīng)，經(jīng)液相色譜上機(jī)測(cè)定甲醛含量的方法，具有前處理操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、精密度高等優(yōu)點(diǎn)，有效地提高了檢測(cè)效率，適合于批量測(cè)定水產(chǎn)品中的甲醛。

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