燈盞花乙素含水類型及水分測(cè)定方法的研究*

王 珺，張 偉△，李之恒，2，楊兆祥

（1.昆藥集團(tuán)股份有限公司藥物研究院，云南 昆明650100； 2.云南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，云南 昆明650500）

燈盞花素是從菊科植物短葶飛蓬Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.的干燥全草中提取分離得到的黃酮類化合物，其主要成分為燈盞花乙素[1-2]?，F(xiàn)代藥理研究表明，燈盞花乙素具有增加腦血流量，改善微循環(huán)；抑制血小板凝集、促進(jìn)纖溶活性、抗血栓形成等作用[2-6]。臨床上可用于治療腦供血不足、腦出血所致后遺癥、高粘脂血癥、腦血栓、冠心病、心絞痛等疾病[7-9]。

本文對(duì)燈盞花乙素原料藥的含水類型及水分測(cè)定方法進(jìn)行了研究[10-15]。含量測(cè)定作為質(zhì)量控制的關(guān)鍵指標(biāo)，其一般以干燥品或無水物計(jì)，因此本文的研究內(nèi)容對(duì)于弄清藥物性質(zhì)，合理選擇其質(zhì)控方法，科學(xué)制定質(zhì)控限度具有指導(dǎo)意義。文章首先比較研究了3 種水分測(cè)定方法，結(jié)果表明燈盞花乙素可能含有結(jié)晶水，遂進(jìn)行了含水類型及含結(jié)晶水個(gè)數(shù)的研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

VD53 型真空干燥箱（BINDER）；CP225D 型分析電子天平（Sartorius）；XP205 型分析電子天平（METLER TOLIDO）；TitroLine KF 型卡式水分滴定儀（SCHOTT Instruments）；Empyrean 型X 射線粉末衍射分析儀（PANalytical）；Q500/Q5000 型熱重分析儀（TA）；Q2000 型差示掃描量熱儀（TA）；870 Titrino plus 型卡氏水分測(cè)定儀（Metohm）。

1.2 試藥

燈盞花乙素（昆藥集團(tuán)股份有限公司藥物研究院 提 供， 批 號(hào)：20121026、20121029、20121030、20130521、20130527、20130529）；單組元無吡啶型卡爾費(fèi)休試劑（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20120821）；HYDRANAL?-Composite 5 容量法單組元滴定劑（Fluka，批號(hào)SZBC1660V）。

2 方法與結(jié)果

2.1 水分測(cè)定方法研究

2.1.1 常溫減壓干燥法

取供試品約0.5g，精密稱定，置五氧化二磷干燥器中，在常溫（20～30℃）條件下，減壓干燥至恒重，計(jì)算減失重量[1]。

2.1.2 60℃恒溫減壓干燥法

取供試品約0.5g，精密稱定，置五氧化二磷干燥器中，在60℃恒溫條件下，減壓干燥至恒重，計(jì)算減失重量[16]。

2.1.3 卡氏水分（Karl Fischer Method，KF）

無水甲醇做溶劑，取供試品約50mg，精密稱定，完全溶解，用卡爾·費(fèi)休試劑滴定，記錄滴定液體積。用水標(biāo)定滴定度，計(jì)算水分[17]。

2.1.4 測(cè)定結(jié)果對(duì)比

3 批中試樣品測(cè)定結(jié)果見表1：

表1 水分測(cè)定方法研究測(cè)定結(jié)果對(duì)比

卡式水分和恒溫減壓測(cè)得的水分值遠(yuǎn)高于常溫減壓，推測(cè)可能因前者測(cè)定吸附水和結(jié)晶水總和，而后者條件較溫和僅測(cè)定吸附水。

2.2 含水類型研究

2.2.1 含水類型推斷

聯(lián)合采用熱重分析（Thermogravimetric Analysis，TGA）、示差掃描量熱法（Differential Scanning Calorimetry，DSC）、卡氏水分滴定法（Karl Fischer Method，KF）推斷含水類型。測(cè)定參數(shù)分別為：TGA（樣品盤：鋁盤，敞開；溫度范圍：室溫～300 °C；掃描速率：10°C/min；保護(hù)氣體：氮?dú)猓?；DSC（樣品盤：鋁盤，壓蓋；其余均同TGA）；KF（溶劑：無水甲醇）。

TGA 和卡式水分測(cè)定結(jié)果（見表2）表明加熱情況下丟失的重量很可能來源于水。TGA 和DSC圖譜（見圖1）可見，60℃～200℃TGA 有一失重平臺(tái)，對(duì)應(yīng)DSC 中吸熱峰，推斷為丟失結(jié)晶水產(chǎn)生。

表2 TGA 和卡式水分測(cè)定結(jié)果

圖1 TGA 和DSC 圖譜

2.2.2 含結(jié)晶水的確證

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，對(duì)供試品在不同溫度下進(jìn)行XRPD 表征測(cè)定。

溫度控制XRPD 測(cè)定參數(shù)（X 射線Cu，Kα，Kα1：1.540598?、Kα2：1.544426?，Kα2/Kα1 強(qiáng)度比例：0.50；X 射線光管設(shè)定：45 kV，40 mA；發(fā)散狹縫：自動(dòng)；單色器：無；掃描模式：連續(xù)；掃描范圍（°2Theta）3° ～ 40°；掃描步長（°2Theta）0.013；掃描時(shí)間：約4 min）

結(jié)果顯示升溫至50 °C 時(shí)未發(fā)生晶型變化，升溫至150 °C 形成新的晶型，且該晶型在降溫過程中進(jìn)一步發(fā)生轉(zhuǎn)變（見圖2）；降至室溫，暴露在實(shí)驗(yàn)室濕度二十分鐘后，回到初始晶型（見圖3）。晶型變化可能由脫去結(jié)晶水所致，因此推測(cè)供試品中含有結(jié)晶水，并且二水合物脫水后，在室溫條件下不穩(wěn)定，極易吸水重新轉(zhuǎn)變回二水合物。

圖2 升溫和降溫過程中的XRPD 圖譜

圖3 原始樣品和降溫放置后樣品XRPD 圖譜對(duì)比

2.2.3 含結(jié)晶水個(gè)數(shù)測(cè)定

恒溫TGA 實(shí)驗(yàn)參數(shù)（溫度范圍：室溫～250°C；重量變化速率：開始0.23%/min、停止0.01%/min；其余同TGA）。

結(jié)果見圖4，樣品分兩步失水，低溫脫去吸附水，高溫脫去結(jié)晶水。3 批樣品測(cè)定結(jié)果見表3，結(jié)晶水含量為7.21%；模擬計(jì)算燈盞花乙素含不同數(shù)量結(jié)晶水的理論結(jié)晶水含量見表4。對(duì)比可見供試品應(yīng)為二水合物。

圖4 恒溫TGA 圖譜

表3 3 批中試樣品恒溫TGA 測(cè)定結(jié)果

表4 結(jié)晶水個(gè)數(shù)和理論含量計(jì)算

3 討論

由DSC 結(jié)果可見，升溫至60℃即開始丟失結(jié)晶水，可印證60℃恒溫減壓干燥條件下結(jié)晶水已失去。60℃恒溫減壓干燥法測(cè)定的是結(jié)晶水和吸附水的總和，但該法測(cè)定效率低?？ㄊ剿值味ǚㄗ鳛樗譁y(cè)定的首選方法[18]，考慮到測(cè)定效率及成本，對(duì)于該品種優(yōu)選該方法。

[1] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典（第一增補(bǔ)本）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：127.

[2] 張峻，李雪松，張衛(wèi)東. 中藥燈盞花化學(xué)成分與藥理活性研究進(jìn)展[J]. 藥學(xué)實(shí)踐雜志，2002，20（2）：103-107.

[3] 楊澍，史海雯，高秀清，等. 天然產(chǎn)物抗凝血作用研究進(jìn)展[J]. 天津中醫(yī)藥，2014，31（5）：318-320.

[4] 楊麗梅，顧軍，林明建，等. 燈盞花素的研究進(jìn)展[J]. 天津藥學(xué)，2010，22（1）：56-60.

[5] 王斌，馬瑜紅，胡清茹，等. 燈盞細(xì)辛注射液對(duì)大鼠腎臟缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用研究[J]. 中國生化藥物雜志，2014，34（1）：38-40.

[6] 林莉莉，鄒浩軍，常靜. 燈盞乙素和燈盞花素對(duì)急性心肌梗死的保護(hù)作用[J]. 中國藥業(yè)，2010，19（13）：12-13.

[7] 何敬成，麥少珍，張碧青. 燈盞細(xì)辛和燈盞花素在心腦血管疾病方面的療效比較[J]. 海峽藥學(xué)，2015，27（5）：94-96.

[8] 李鳳英，曹錦江，李海華，等. 中藥燈盞花素新制劑的研究進(jìn)展[J]. 臨床合理用藥，2015，8（16）：180-181.

[9] 高帥榮，萬屏. 燈盞花素臨床應(yīng)用進(jìn)展[J]. 云南中醫(yī)中藥雜志，2009，30（3）：67-68.

[10] 袁耀佐，胡昌勤，金少鴻. 他唑巴坦中結(jié)晶水的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2002，37（2）：144-147.

[11] 楊成，胡松，王金南，等. 熱分析技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用[J]. 廣州化工，2012，40（14）：36-37.

[12] 劉文峰，林木良. 熱重法在藥品水分測(cè)定上的應(yīng)用研究[J]. 廣東化工，2003（2）：1-3，7.

[13] 左志輝，左文堅(jiān). 熱重法用于測(cè)定無機(jī)化合物和有機(jī)酸鹽類藥物的結(jié)晶水[J]. 天津藥學(xué)，1999，11（4）：47-48.

[14] 左志輝. 熱分析法在藥學(xué)研究中的最新進(jìn)展[J]. 中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2004，5（1）：14-17.

[15] 馮海燕，劉曉地，葛艷蕊，等. 水合鹽的幾種脫水過程探討[J]. 無機(jī)化學(xué)學(xué)報(bào)，2000，16（1）：89-96.

[16] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典（二部）[M]. 2010年版. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄59.

[17] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典（二部）[M]. 2010年版. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄60.

[18] 嚴(yán)相平，林力行. 制訂新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)有關(guān)水分、干燥失重的測(cè)定及其限度的確定[J]. 江蘇藥學(xué)與臨床研究，2004，12（3）：63-64.