微柱凝膠法在檢測孕婦IgG效價中的應用研究

苗伶俐，孫海潮

微柱凝膠法在檢測孕婦IgG效價中的應用研究

苗伶俐，孫海潮

目的比較微柱凝膠法與試管抗人球蛋白試驗法檢測O型RhD陽性孕婦血清中IgG抗-A、抗-B效價的差異，并界定微柱凝膠法檢測孕婦IgG效價的陽性臨界值。方法選擇2012年8月～2014年9月血型為O型RhD陽性孕婦血清標本360例，均進行微柱凝膠法與試管抗人球蛋白試驗法檢測IgG抗-A、抗-B效價，比較兩種檢測方法的結果差異，確定微柱凝膠法檢測孕婦IgG效價的陽性臨界值。結果微柱凝膠法測定的IgG抗-A和IgG抗-B效價幾何均數(shù)為試管抗人球蛋白試驗法測定的2倍；微柱凝膠法檢測IgG抗-A和IgG抗-B的陽性率為72.8%和67.8%，顯著高于試管抗人球蛋白試驗法檢測的陽性率(45.6%和34.4%)(P＜0.05)。微柱凝膠法與試管抗人球蛋白試驗法測定IgG抗-A和IgG抗-B效價結果均呈高度正相關（rA= 0.869，rB=0.912,P＜0.05），根據回歸方程計算微柱凝膠法具有臨床意義的IgG抗-A和IgG抗-B效價的陽性臨界值分別為128和121。結論微柱凝膠法檢測孕婦IgG效價較試管抗人球蛋白試驗法更簡便、快捷，靈敏度高。對其陽性臨界值的界定，可為臨床診斷提供可靠的依據。

微柱凝膠法；試管抗人球蛋白試驗法；孕婦；IgG；效價

新生兒溶血病是由于母嬰血型不合，母體血清中的IgG類抗體通過胎盤進入胎兒體內，引起胎兒紅細胞破壞，導致胎兒不同程度溶血的一種免疫性溶血性疾病[1-2]。在疾病的預防中，動態(tài)檢測孕婦血清IgG類抗-A和抗-B效價,是評估和診斷新生兒溶血病發(fā)生的重要指標[3]。傳統(tǒng)檢測方法是試管抗人球蛋白試驗法，但是存在應用復雜、測定效果不敏感等缺點[4]。微柱凝膠法是一種利用凝膠中的孔徑大小，通過離心分隔游離紅細胞與凝集紅細胞的方法[5]。離心后游離紅細胞沉降于柱底，凝集紅細胞浮于上方或分散于凝膠柱中[6]。其具有操作簡單、重復性好、靈敏度高、結果易于判斷等優(yōu)點，并且凝膠中含抗人球蛋白，可檢出濃度較低的IgG類抗體，可避免冷凝集素對配血造成的影響[7-8]。但微柱凝膠法檢測孕婦IgG效價的參考值目前尚未確定，因此，本研究旨在比較微柱凝膠法與試管抗人球蛋白試驗法檢測O型RhD陽性孕婦血清中IgG抗-A、抗-B效價的差異，并界定微柱凝膠法檢測孕婦IgG效價的陽性臨界值，以期為臨床診療提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象選擇2012年8月～2014年9月我院收治的血型為O型RhD陽性孕婦為研究對象，納入標準：妊娠12~40 w；配偶均為非O型RhD陽性者；知情同意。共納入360例，年齡23~39(31.92± 4.19)歲；平均妊娠(25.09±4.19)w；丈夫血型為A型180例，B型180例。

1.2 主要試劑與設備LB-37試劑卡孵育器，XHZ-111A型血小板恒溫振蕩保存箱，KJX-IA冰凍血漿解凍箱，微柱凝膠配血系統(tǒng)抗球蛋白試劑卡，抗人球蛋白試劑(羊免疫血清)、ABO血型反定型用紅細胞試劑盒（4%標準紅細胞）、ABO血型反定型用紅細胞試劑盒（0.8%標準紅細胞）均購自達美中國有限公司。

1.3 標本處理抽取360例受檢孕婦血2 ml，置于37℃水浴1 h，離心分離血清與紅細胞。取400μl血清標本與400μl 0.2 mol/L 2-ME應用液充分混勻，置37℃水浴3~4 min，充分裂解血清中抗體，并采用單克隆抗-A、抗-B做滅活對照。將經2-ME處理后的血清，用pH 7.0~7.4生理鹽水做倍比稀釋，稀釋度分別為1∶2及其倍數(shù)，直到1∶256。用鹽水法確定1∶2稀釋度管IgM抗體已被破壞，取雙管做平行試驗，分別檢測抗-A、抗-B效價。

1.4 微柱凝膠法測定取微柱凝膠配血系統(tǒng)抗球蛋白試劑卡，在微管內各加入50μl與孕婦丈夫同型的0.8%標準紅細胞懸液，再依次加入上述處理的稀釋度為1∶2及其倍數(shù)(直到1∶512)的血清50μl，置專用孵育器內37℃孵育15min，再放入專用離心機內離心5min(900 r/min，2min；1500 r/min，3min)，以出現(xiàn)1+凝集的最高稀釋度的倒數(shù)為抗體效價。

1.5 試管抗人球蛋白試驗法測定取經2-ME處理的稀釋度為1∶2及其倍數(shù)(直到1∶512)血清各100μl，用4%A型、B型標準紅細胞懸液，抗人球蛋白試劑做IgG抗-A、抗-B效價的測定，以出現(xiàn)1+凝集的最高稀釋度的倒數(shù)為抗體效價。

1.6 統(tǒng)計學方法選擇SPSS14.0軟件進行數(shù)據分析，效價比較采用配對t檢驗，陽性率采用χ2檢驗，同時行直線相關性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法檢測抗-A效價結果比較兩種方法測定180份標本IgG抗-A效價結果見表1。微柱凝膠法測定的IgG抗-A效價幾何均數(shù)為249.87，是試管抗人球蛋白試驗法測定的IgG抗-A效價幾何均數(shù)120.79的2.07倍(P＜0.05)。

表1兩種方法測定180例標本l gG抗A效價分布(例）

表2 兩種方法測定180例標本lgG抗B效價分布(例）

2.2 兩種方法檢測抗-B效價結果比較在180份標本中，微柱凝膠法測定的IgG抗-B效價幾何均數(shù)為156.03，是試管抗人球蛋白試驗法測定的IgG抗-B效價均數(shù)75.91的2.06倍(P＜0.05)。兩種方法測定IgG抗-B效價結果見表2。

2.3 兩種方法陽性檢出率比較以臨床上判斷胎兒及新生兒溶血有意義的IgG抗-A效價≥64判為陽性，微柱凝膠法檢測出IgG抗-A陽性131例，陽性率為72.8%，試管抗人球蛋白試驗法檢測出IgG抗-A陽性82例，陽性率為45.6%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；以臨床上判斷胎兒及新生兒溶血有意義的IgG抗-B效價≥64判為陽性，微柱凝膠法檢測出IgG抗-B陽性122例，陽性率為67.8%，試管抗人球蛋白試驗法檢測出IgG抗-B陽性62例，陽性率為34.4%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

2.4 兩種方法相關性及線性分析微柱凝膠法與試管抗人球蛋白試驗法測定IgG抗-A效價結果呈高度正相關（rA=0.869，rB=0.912,P＜0.05），計算線性回歸方程為YA=1.2047+0.9389X和YB=0.3214+ 1.1012X。以試管抗人球蛋白試驗法IgG抗-B效價64為臨床意義臨界值，根據回歸方程計算，微柱凝膠法具有臨床意義臨界值的IgG抗-A和IgG抗-B效價分別為128和121。

3 討論

在輸血中，準確的交叉配血是臨床安全、有效輸血的重要保證。而對于預防新生兒溶血病，積極進行交叉配血檢測與監(jiān)測意義重大[9]。由于新生兒溶血病的病情程度與母體血清IgG型抗-A(B)血型抗體效價存在一定的相關性，應用科學有效的方法檢測孕產婦血清IgG抗-A(B)抗體效價，是臨床上診斷新生兒溶血病的重要檢查手段[10]。目前在臨床上常用試管抗人球蛋白試驗法檢測孕婦血清IgG抗-A、抗-B效價，雖然應用范圍比較廣，但是操作繁瑣，反應時間較長，不適用于大批量樣本的檢測[11]。

微柱凝膠試驗(MGT)由于操作簡單、重復性好、靈敏度高，已在國內廣泛用于不完全抗體篩查、交叉配血、血型鑒定、抗體鑒定等[12]。本研究對360例O型RhD陽性孕婦血清標本檢測結果顯示，微柱凝膠法測定的IgG抗-A、抗-B效價幾何均數(shù)為試管抗人球蛋白試驗法測定的2倍；微柱凝膠法檢測IgG抗-A和IgG抗-B的陽性率為72.8%和67.8%，顯著高于試管抗人球蛋白試驗法檢測的陽性率(45.6%和34.4%)(P＜0.05)。說明微柱凝膠法比試管抗人球蛋白試驗法的敏感性高，主要在于其結果清晰易辨，靈敏度較高，能排除某些局限性干擾，如白細胞、血小板、纖維蛋白的干擾等。

當前臨床上多以試管抗人球蛋白試驗法測得IgG抗-A（B）效價64作為采取干預措施的臨界值[13]。而微柱凝膠法檢測具有更高的靈敏度，若以傳統(tǒng)試管抗人球蛋白試驗法的效價64為臨界值，將會導致對患病風險的過高評估[14]。因此，應用微柱凝膠法測定IgG抗-A（B）效價，應重新確定其具有臨床意義的臨界值。本研究根據回歸方程計算，微柱凝膠法具有臨床意義臨界值的IgG抗-A和IgG抗-B效價分別為128和121。

總之，微柱凝膠法用于檢測孕婦IgG效價，較試管抗人球蛋白試驗法更簡便、快捷，靈敏度高。對其臨界值的界定，可為臨床診斷提供可靠的依據。

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Application ofmicro column gelmethod to detection of pregnantwomen's IgG titer

Miao Lingli1,Sun Haichao21.Department of Blood Transfusion;2.Department of Laboratory,Xingyuan Hospital of Yulin City, Yulin,Shaanxi,719000,China

Objective Tomake comparison between the differences in the detection of IgG anti-A and anti-B titer in the serum of pregnant women with O-blood type and positive RhD by the methods of micro column gel and vitro anti-human globulin test respectively,and to define the positively critical values of themicro column gelmethod for the detection of pregnantwomen's IgG titer.Methods Between August2012 and September 2014,there were 360 pregnantwomen with the O blood type and positive RhD whose serum sampleswere chosen to detect the IgG anti-A and anti-B titer by themethods ofmicro column gel and vitro anti-human globulin test respectively.Comparison wasmade between the results of the twomethods.The positively critical value of themicro column gel method for the detection of pregnant women's IgG titer was defined.Results The geometric mean of IgG anti-A and anti-B titer detected bymicro column gelmethod was twice than that detected by vitro anti-human globulin test.The positive rates of IgG anti-A and anti-B titer detected by micro column gel was 72.8%and 67.8%,which were significantly higher than those detected by vitro anti-human globulin test(45.6%and 34.4%)(P＜0.05).The results of IgG anti-A and anti-B titer detected by bothmethod all had a high positive correlation(rA=0.869,rB=0.912,P＜0.05).The positively critical values of the IgG anti-A and anti-B titerwere 128 and 121 according to the regression equation calculationmethod ofmicro column gel.Conclusion As to the detection of pregnantwomen's IgG blood group,micro column gelmethod ismore convenient and quicker and has higher sensitivity than vitro anti-human globulin test.The definition of the positively critical value by the formermethod can provide a reliable basis for the clinical diagnosis.

micro-column gelmethod;vitro anti-human globulin test;pregnantwoman;IgG;titer

R 446.119/714.15

A

1004-0188（2015）08-0859-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2015.08.016

2015-02-10）

719000陜西榆林，榆林市星元醫(yī)院輸血科（苗伶俐），檢驗科（孫海潮）