UPLC—MS/MS法對香蕉果肉中吡唑醚菌酯殘留的測定

趙方方 謝德芳 張?jiān)?/p>

摘要：建立了吡唑醚菌酯在香蕉全蕉及蕉肉中殘留量的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）分析方法。試樣經(jīng)乙腈提取，Strata/NH2固相萃取柱凈化，采用UPLC-MS/MS測定。方法最小檢出量為4×10-13 g，方法定量限為0.2 μg/kg；在0.01～0.10 mg/kg范圍內(nèi)，吡唑醚菌酯在香蕉全蕉中平均回收率為83%～92%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.0%～2.8%；在蕉肉中平均回收率為85%～98%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%～2.2%。該法靈敏、準(zhǔn)確，快速，可用于香蕉果肉中吡唑醚菌酯殘留量的測定。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）；香蕉；吡唑醚菌酯

中圖分類號：TQ450.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）10-2477-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.10.046

吡唑醚菌酯是一種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑[1]，能有效防治作物的白粉病、霜霉病、炭疽病[2]，尤其對香蕉黑星病具有良好防治效果[3]。香蕉黑星病是由香蕉大莖點(diǎn)霉菌[Macrophoma musae （Cooke） Berl. et Vogl.]引起，對香蕉產(chǎn)量和品質(zhì)損害嚴(yán)重[4]。盡管吡唑醚菌酯在香蕉病害防治中發(fā)揮了積極作用。但其藥物殘留引發(fā)的潛在食品安全風(fēng)險引起了人們的廣泛關(guān)注。目前，吡唑醚菌酯主要采用高效液相色譜法[5，6]、氣相色譜法[7]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析[8，9]，但樣品多針對白菜、大蒜、花生、草莓、葡萄、西瓜等作物上[10-15]，而香蕉中吡唑醚菌酯的殘留分析方法國內(nèi)報道甚少。鑒于串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法越來越多的用于農(nóng)藥殘留的測定[16]，本研究建立了一種采用超高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜（Ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）測定香蕉中吡唑醚菌酯的方法，以期為開展相關(guān)風(fēng)險評估提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品（德國 Dr.Eh-renstorfer GmbH公司，純度99.0%）；甲醇、乙腈、正己烷、丙酮均為色譜純；氯化鈉（140 ℃烘烤4 h）。Strata/NH2固相萃取柱（55 μm）500 mg/6 mL；1 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)儲備液（甲醇，0～4 ℃保存）。

1.2 儀器

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（美國AB SCIEX公司）；萬分之一天平（SHIMAZU），T18型高速均質(zhì)機(jī)（德國IKA集團(tuán)）；微型旋渦混合儀（上海滬西分析儀器廠有限公司）；R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）。

1.3 方法

1.3.1 提取 稱取20.0 g粉碎的樣品于燒杯中，加入40 mL乙腈，2 000 r/min勻漿2 min后過濾到預(yù)裝有5～7 g NaCl的具塞量筒（100 mL）中，劇烈震蕩2 min，室溫靜置30 min。吸取上清液10.0 mL于100 mL圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入5.0 mL正己烷-丙酮（6∶4，V/V，下同）溶解混勻，待凈化。

1.3.2 凈化 吸取5.0 mL正己烷-丙酮溶液預(yù)淋洗Strata/NH2固相萃取小柱，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時，立即倒入待凈化液，用100 mL圓底燒瓶收集；用5.0 mL正己烷-丙酮溶液沖洗圓底燒瓶殘留物后淋洗萃取小柱，重復(fù)3次。收集液減壓蒸發(fā)至干，用2.5 mL甲醇定容后過0.22 μm濾膜，待測。

1.3.3 UPLC-MS/MS分析 液相色譜柱：BEH C18柱 （2.1 mm×50 mm， 1.7 μm），柱溫35 ℃，流動相，乙腈： 0.1%甲酸-水溶液= 70∶30（V/V）；流速0.25 mL/min，進(jìn)樣量4 μL；電噴霧正離子模式掃描（ESI+），多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），噴霧電壓5 500 V；噴霧針溫度650 ℃；霧化氣55 psi；輔助加熱氣55 psi；氣簾氣20 psi；碰撞氣6 psi，檢測參數(shù)見表1。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 用甲醇逐級稀釋標(biāo)準(zhǔn)貯備液，配成0.005、0.010、0.025、0.050、0.100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用外標(biāo)法定量，對濃度和峰面積進(jìn)行線性回歸，計(jì)算相關(guān)系數(shù)。

1.3.5 準(zhǔn)確度與精密度測定 量取一定體積的吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液加入香蕉全蕉及蕉肉空白中，得質(zhì)量濃度分別為0.01、0.02、0.10 mg/kg的3個添加水平，每個水平設(shè)5次試驗(yàn)，同時做空白對照，計(jì)算回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

吡唑醚菌酯極性較強(qiáng)，可采用反相液相色譜分離；在流動相中加入0.1%體積分?jǐn)?shù)的甲酸來控制流動相pH值，有利于提高ESI+的離子化效率。故以乙腈/0.1%甲酸-水溶液作為流動相，經(jīng)優(yōu)化后，吡唑醚菌酯的保留時間適中，峰形及分離度良好，且可獲得較強(qiáng)的分子離子峰強(qiáng)度。吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的定量離子MRM流圖見圖1，其保留時間為2.08 min。

2.2 方法線性范圍

在質(zhì)量濃度0.005～0.100 μg/mL范圍內(nèi)，以峰面積y為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度x為橫坐標(biāo)繪制工作曲線，得y=（2E+08）x+371 552，R2為0.999 6。

2.3 方法準(zhǔn)確度和精密度

香蕉全蕉及蕉肉樣品中添加吡唑醚菌酯的回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)果見表2。從表2可知，3個添加水平在香蕉全蕉中平均回收率為83%～92%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.0%～2.8%，在蕉肉中平均回收率為85%～98%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%～2.2%?；厥章室约跋鄬?biāo)準(zhǔn)偏差均在農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則允許范圍內(nèi)[17]，方法的重復(fù)性好，可滿足殘留分析的要求。

2.4 方法靈敏度

以一定量吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，提取定量離子流色譜圖，以3倍信噪比所需待測物的濃度計(jì)算（進(jìn)樣量4 μL），吡唑醚菌酯最小檢出量為4×10-13 g。在香蕉空白樣品中添加一定量的吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，按信噪比（S/N=10）計(jì)算，方法定量限為0.2 μg/kg。

3 小結(jié)

本研究建立了UPLC-MS/MS測定香蕉全蕉及蕉肉中吡唑醚菌酯殘留量的方法。該法準(zhǔn)確、靈敏、快速，其檢出限和定量限均低于GB 2763-2014中規(guī)定吡唑醚菌酯在香蕉中的最大限量值（0.02 mg/kg），適用于香蕉中吡唑醚菌酯殘留分析的要求，同時也為其他農(nóng)產(chǎn)品中吡唑醚菌酯殘留的分析提供了參考。

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