氣相色譜法對(duì)藥品中殘留溶劑的檢測(cè)分析

藍(lán)明玉

[摘要] 目的 探討苯磺酸氨氯地平中殘留溶劑采用頂空氣相色譜法測(cè)定的應(yīng)用價(jià)值。 方法 采用頂空氣相色譜法對(duì)苯磺酸氨氯地平中的殘留溶劑N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇進(jìn)行測(cè)定。 結(jié)果 N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇在考察范圍內(nèi)線性良好，線性范圍分別為124.76～396.55mg/L、500.36～1500.55mg/L、50.32～150.17mg/L和500.54～1500.88mg/L；r分別為0.9987、0.9996、0.9998、0.9999；平均回收率分別為101.5%、102.9%、103.3%和102.1%；RSD分別為5.8%、5.1%、5.9%、5.4%；檢測(cè)限分別為12.9mg/L、10.6mg/L、6.41mg/L和19.8mg/L。 結(jié)論 采用頂空氣相色譜法測(cè)定苯磺酸氨氯地平中殘留溶劑含量具有準(zhǔn)確度好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，是苯磺酸氨氯地平實(shí)際生產(chǎn)中殘留溶劑含量測(cè)定的有效方法。

[關(guān)鍵詞] 頂空氣相色譜法；苯磺酸氨氯地平；殘留溶劑；含量測(cè)定

[中圖分類號(hào)] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2015）11-38-04

[Abstract] Objective To explore application value of headspace gas chromatography in determination of amlodipine besylate residual solvents. Methods Amlodipine besylate residual solvents N， N-dimethylacetamide，ethyl acetate，toluene，isopropanol were determinated by headspace gas chromatography. Results N，N-dimethylacetamide，ethyl acetate，toluene and isopropanol were all in good linearity in the scope of the study and the linear ranges were 124.76-396.55mg/L，500.36-1500.55mg/L，50.32-150.17mg/L and 500.54-1500.88mg/L respectively；r were 0.9987，0.9996，0.9998 and 0.9999 respectively.Average recoveries were 101.5%，102.9%，103.3% and 102.1% respectively.RSD were 5.8%，5.1%，5.9% and 5.4 % respectively.The detection limits were 12.9mg/L，10.6mg/L， 6.41mg/L and 19.8mg/L respectively. Conclusion Headspace gas chromatography in determination of amlodipine besylate residual solvents has some advantages including good accuracy，high sensitivity，simple operation and good reproducibility etc.And it is an effective method of the determination of amlodipine besylate residual solvents in actual production.

[Key words] Headspace gas chromatography；Amlodipine besylate；Residual solvent；Determination

苯磺酸氨氯地平是臨床常用的高血壓及心絞痛治療藥物，屬第三代二氫吡啶類鈣離子通道阻斷劑，具有吸收好（吸收不受飲食影響），口服生物利用度高，清除半衰期長(zhǎng)（一次給藥可維持有效血藥濃度24h），不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)[1-2]。在苯磺酸氨氯地平合成過程中會(huì)使用到N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇等二類和三類溶劑，如果這些溶劑殘留超標(biāo)將會(huì)對(duì)使用人員的身體造成一定的損害，因此，根據(jù)2010版《中華人民共和國(guó)藥典》[3]，本研究旨在建立頂空氣相色譜法測(cè)定苯磺酸氨氯地平中殘留溶劑含量的方法，為苯磺酸氨氯地平實(shí)際生產(chǎn)中殘留溶劑含量測(cè)定的提供借鑒和指導(dǎo)。

1 儀器與試劑

美國(guó)安捷倫7890A型氣相色譜儀、安捷倫7694E型頂空進(jìn)樣器、瑞士梅特勒-托利多ME104E型電子天平、苯磺酸氨氯地平（北京賽科藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)20141015、20141018、20141021）、N-甲基吡咯烷酮（色譜純，上海晶純?cè)噭┯邢薰荆?，乙酸乙酯、N，N-二甲基乙酰胺、異丙醇、甲苯（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 N，N-二甲基乙酰胺的含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件的選擇 選擇DB-624（30m× 0.25mm，1.4μm）毛細(xì)管色譜柱作為氣相色譜柱，以氮?dú)鉃檩d氣，設(shè)置載氣流速為1mL/min；采取程序升溫的方式，設(shè)置起始溫度130℃，保持8min，之后以50℃/min快速升溫至230℃，保持5min；進(jìn)樣口溫度設(shè)置為210℃，分流比設(shè)定為1︰8；設(shè)置氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）溫度為250℃；頂空進(jìn)樣平衡溫度設(shè)置為120℃，平衡30min，頂空進(jìn)樣環(huán)溫度設(shè)定為150℃，體積1mL，傳輸線溫度150℃。

2.1.2 配制溶液 供試溶液的配制：精密稱量苯磺酸氨氯地平1.0g，加入到20mL頂空瓶中，之后，精確量取N-甲基吡咯烷酮2mL加入到頂空瓶中，待密封妥善后搖勻，作為供試溶液Ⅰ。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制：精密稱量N，N-二甲基乙酰胺0.6266g，加入到25mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，充分振搖得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅰ。精密量取5mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅰ，加入到10mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，充分振搖得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅱ。

對(duì)照溶液的配制：精密量取1mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅱ，加入到50mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，充分振搖得對(duì)照溶液Ⅰ[4]，對(duì)照溶液濃度為250.64mg/L。

2.1.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取供試溶液Ⅰ和對(duì)照溶液Ⅰ，按照“2.1.1”中設(shè)定的色譜條件對(duì)供試溶液Ⅰ和對(duì)照溶液Ⅰ進(jìn)樣分析，，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果顯示，N，N-二甲基乙酰胺峰形良好，分離度>1.5，理論塔板數(shù)>45000。

2.1.4 線性考察 精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅱ0.5、0.8、1.0、1.2、1.5mL，分別加入到50mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，充分振搖得5個(gè)梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，S1～S5。分別取2mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到頂空瓶中[5]，按照“2.1.1”中描述的色譜條件對(duì)5個(gè)梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析。選擇溶液質(zhì)量濃度（ρ）為橫坐標(biāo)，另選峰面積（A）為縱坐標(biāo)，線性擬合得到A=3.146×10-2ρ+1.135（r=0.9987），即為N，N-二甲基乙酰胺的回歸方程，其線性范圍為124.76～396.55mg/L。

2.1.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取2mL對(duì)照溶液Ⅰ，共5個(gè)樣本，分別加入到頂空進(jìn)樣瓶中，按照“2.1.1”中描述的色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示，N，N-二甲基乙酰胺峰面積的RSD為5.1%，說明儀器精密度良好。

取20141015批苯磺酸氨氯地平，按照“2.1.2”中供試溶液的配制方法配制供試溶液Ⅰ，共配制6個(gè)樣本[6]，之后按照“2.1.1”中描述的色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示，未檢出N，N-二甲基乙酰胺。

2.1.6 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取1.0g未檢出N，N-二甲基乙酰胺的20141015批苯磺酸氨氯地平，共9個(gè)樣本，分別加入到20mL頂空瓶中，分別精密加入2.0mL“2.1.4”中標(biāo)準(zhǔn)溶液S2～S4，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液3份，密封后充分振搖[7]。按照“2.1.1”中描述的色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算其平均回收率為101.5%，RSD為5.8%。

2.1.7 檢測(cè)限與定量限 對(duì)于定量限與檢測(cè)限試驗(yàn)可參考文獻(xiàn)[8]，采取逐步稀釋法進(jìn)行試驗(yàn)，最終得到N，N-二甲基乙酰胺的定量限為43.4mg/L，檢測(cè)限為12.9mg/L。

2.1.8 樣品含量測(cè)定 按照“2.1.2”中操作條件及“2.1.1”描述的色譜條件分別對(duì)20141015、20141018、20141021共3批苯磺酸氨氯地平樣品進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示N，N-二甲基乙酰胺未檢出。

2.2 乙酸乙酯、異丙醇、甲苯的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件的選擇 氣相色譜柱選擇DB-WAX毛細(xì)管柱（30m×0.32mm，0.25μm）；以氮?dú)鉃檩d氣，設(shè)置載氣流速為1mL/min；采取程序升溫的方式，設(shè)置起始溫度60℃，保持5min，之后以50℃/min的速度升溫至220℃，維持3min；設(shè)置進(jìn)樣口溫度為210℃，分流比為6∶1；設(shè)置氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）溫度為250℃；頂空進(jìn)樣平衡溫度設(shè)置為90℃，平衡30min，頂空進(jìn)樣環(huán)溫度設(shè)定為120℃，體積1mL，傳輸線溫度100℃。

2.2.2 配制溶液 供試溶液的配制：精密稱量苯磺酸氨氯地平0.4g，加入到20mL頂空瓶中，精確加入2mL N，N-二甲基甲酰胺，密封后充分振搖溶解，作為供試溶液Ⅱ。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制：精密稱量乙酸乙酯5.0016g，甲苯0.50013g，異丙醇5.0025g，一起加入到25mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，充分振搖得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅲ。精密量取5mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅲ，加入到10mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，充分振搖得標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅳ。

對(duì)照溶液的配制：取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅳ1mL，精密量取，加入到50mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，充分振搖得對(duì)照溶液Ⅱ，最終得到的乙酸乙酯、異丙醇、甲苯3種對(duì)照溶液濃度依次為1000.26、1000.29、100.36mg/L。

2.2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取供試溶液Ⅱ和對(duì)照溶液Ⅱ，按照“2.2.1”中色譜條件對(duì)供試溶液Ⅱ和對(duì)照溶液Ⅱ進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果顯示，乙酸乙酯、異丙醇和甲苯峰形良好，分離度>1.5，理論塔板數(shù)>45000。

2.2.4 線性考察 精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液Ⅳ0.5、0.8、1.0、1.2、1.5mL，分別加入到50mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，充分振搖得5個(gè)梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，S6～S10。分別取2mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到頂空瓶中，按照“2.2.1”中色譜條件對(duì)5個(gè)梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析。選擇溶液質(zhì)量濃度（ρ）為橫坐標(biāo)，另選峰面積（A）為縱坐標(biāo)，線性擬合得到A=9.387×10-2ρ-1.602（r=0.9996），即為乙酸乙酯的回歸方程，其線性范圍為500.36～1500.55mg/L；異丙醇的回歸方程為A=4.925×10-2ρ-0.556（r=0.9999），線性范圍為500.54～1500.88mg/L；甲苯的回歸方程為A=0.112×10-2ρ-7.786（r=0.9998），線性范圍為50.32～150.17mg/L。

2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取2mL對(duì)照溶液Ⅱ，共5個(gè)樣本，分別加入到頂空進(jìn)樣瓶中，按照“2.2.1”中色譜條件對(duì)5個(gè)樣本進(jìn)樣分析，分析結(jié)果顯示，乙酸乙酯、異丙醇、甲苯峰面積的RSD分別為3.3%、3.4%、3.5%，說明儀器精密度良好。

取20141018批苯磺酸氨氯地平，按照“2.2.2”中供試溶液的配制方法配制供試溶液Ⅱ，共配制6個(gè)樣本，之后按照“2.2.1”中色譜條件對(duì)供試溶液Ⅱ 6個(gè)樣本分別進(jìn)行進(jìn)樣分析，結(jié)果未檢出乙酸乙酯和異丙醇，檢出樣品中甲苯含量低于定量限。

2.2.6 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取0.4g 20141018批苯磺酸氨氯地平，共9個(gè)樣本，分別加入到20mL頂空瓶中，分別精密加入2.0mL“2.2.4”中標(biāo)準(zhǔn)溶液S7～S9，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液3份，密封后充分振搖。按照“2.2.1”中描述的色譜條件進(jìn)樣分析，乙酸乙酯、甲苯、異丙醇的平均回收率分別為102.9%、103.3%和102.1%，RSD分別為5.1%、5.9%、5.4%。

2.2.7 檢測(cè)限與定量限 采取逐步稀釋法進(jìn)行定量限與檢測(cè)限試驗(yàn)，得到乙酸乙酯、甲苯、異丙醇的定量限分別為3.48、1.88和5.97mg/L，檢測(cè)限分別為10.6、6.41和19.8mg/L。

2.2.8 樣品含量測(cè)定 按照“2.2.2”中操作條件及“2.2.1”中色譜條件分別對(duì)20141015、20141018、20141021共3批苯磺酸氨氯地平樣品進(jìn)樣分析，結(jié)果未檢出乙酸乙酯和異丙醇，檢出三批樣品中均含有甲苯，但甲苯含量均低于定量限。

3 討論

頂空氣相色譜法具有靈敏、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好、簡(jiǎn)單、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)，在藥品實(shí)際生產(chǎn)中可用于殘留有機(jī)溶劑的質(zhì)量控制。臨床常用的高血壓及心絞痛治療藥物苯磺酸氨氯地平合成過程中會(huì)使用到N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇等二類和三類溶劑，這些溶劑如果殘留超標(biāo)將會(huì)對(duì)患者的身體造成一定的損害，影響患者的治療和健康，因此，可采用頂空氣相色譜法對(duì)苯磺酸氨氯地平中殘留溶劑含量進(jìn)行測(cè)定，保證藥品的質(zhì)量安全。

3.1 色譜條件的選擇

3.1.1 色譜柱的選擇 苯磺酸氨氯地平中N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇均為極性溶劑，根據(jù)相似相溶原理，分別對(duì)DB-1、DB-624、DB-1701以及DB-WAX[8]進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)DB-624對(duì)N，N-二甲基乙酰胺的分離效果最好，DB-WAX對(duì)乙酸乙酯、甲苯、異丙醇的分離效果較好。

3.1.2 進(jìn)樣方式的選擇 由于采用溶液直接進(jìn)樣時(shí)氨氯地平的峰會(huì)對(duì)溶劑峰產(chǎn)生干擾，且會(huì)在色譜柱上出現(xiàn)死吸附，對(duì)色譜柱造成很大的傷害，因此，采取自動(dòng)靜態(tài)頂空進(jìn)樣，不僅可以避免藥物的影響，而且還能夠保護(hù)色譜柱，效果較好[9]。

3.1.3 頂空平衡溫度的選擇 分別考察N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇的60～120℃下的色譜響應(yīng)值[10]，最終選擇120℃和90℃。此外，由于DMF為高沸點(diǎn)組分，應(yīng)適當(dāng)提高取樣針與傳輸線的溫度，避免DMF在傳輸過程中冷凝，因此選擇150℃。

3.1.4 頂空平衡時(shí)間的選擇 分別考察N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇4種溶劑在平衡時(shí)間10、20、30、40、60min時(shí)的色譜響應(yīng)值，得到最佳平衡時(shí)間為30min。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：平衡時(shí)間>30min時(shí)，各組分峰面積基本不再增加，這說明各組分在30min時(shí)已在氣液兩相間達(dá)到平衡，故選擇平衡時(shí)間為30min。

3.1.5 稀釋劑的選擇 頂空氣相色譜法測(cè)定殘留溶劑的一個(gè)關(guān)鍵是選擇合適的稀釋劑，嘗試選擇二甲基亞砜，N，N-二甲基甲酰胺、水、正丁醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮做稀釋劑，但二甲基亞砜，水、正丁醇、乙二醇分離效果均不好，而采用N-甲基吡咯烷酮和N，N-二甲基甲酰胺作為稀釋劑具有溶解能力強(qiáng)、沸點(diǎn)高干干擾含量測(cè)定、毒性小等優(yōu)點(diǎn)，而且還有助于提高頂空進(jìn)樣的靈敏度[11-12]。

3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的討論

本研究中，N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇在考察范圍內(nèi)線性良好，r為0.9987～0.9999；平均回收率為101.5%～103.3%，RSD分別為5.1%～5.9%，檢測(cè)限分別為12.9、10.6、6.41和19.8mg/L。

綜上所述，采用頂空氣相色譜法測(cè)定苯磺酸氨氯地平中殘留溶劑含量具有準(zhǔn)確度好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，是苯磺酸氨氯地平實(shí)際生產(chǎn)中殘留溶劑含量測(cè)定的有效方法。

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（收稿日期：2015-03-23）