17種殺菌劑對核桃根腐病菌的抑制作用及聯(lián)合毒力

王凡 胡奎 江慧 陳然 李黎 方洋 劉先福 李俊凱

摘要：采用菌絲生長速率法測定17種殺菌劑原藥對核桃根腐病菌的抑制作用以及噻菌靈和咪鮮胺復(fù)配后對核桃根腐病菌抑制作用的聯(lián)合毒力。結(jié)果顯示，噻菌靈、咪鮮胺、抑霉唑和甲基硫菌靈對核桃根腐病菌的抑制作用強，其中噻菌靈的抑制作用最強，EC50為0.092 6 mg/L；嘧菌酯、稻瘟靈和三唑酮對核桃根腐病菌的抑制作用最弱。噻菌靈與咪鮮胺按照1∶3、1∶5、1∶7的比例復(fù)配后對核桃根腐病菌菌絲生長抑制作用的共毒系數(shù)（CTC）分別為160.543 5、182.803 6和226.194 0，表現(xiàn)為增效作用，其中1∶7復(fù)配后增效作用最為顯著。

關(guān)鍵詞：殺菌劑；核桃根腐病菌；毒力測定；共毒系數(shù)

中圖分類號：S482.2+99 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）11-2648-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.11.023

Toxicities of 17 Fungicides and Joint Toxicity on Walnut Root Rot Fungus

WANG Fan， HU Kui， JIANG Hui， CHEN Ran， LI Li， FANG Yang， LIU Xian-fu，LI Jun-kai

（College of Agriculture， Yangtze University， Jingzhou 434025， Hubei ，China）

Abstract：The inhibitory effect of 17 fungicides and co-toxicity between probenazole and prochloraz on walnut root rot fungus were determined by mycelium growth rate method. The results showed that probenazole， prochloraz， imazalil and thiophanate-methyl had stronger inhibitory effects among all， the strongest inhibitory effect of probenazole with EC50 of 0.092 6 mg/L. While azoxystrobin， isoprothiolane and triazolone had weakest inhibitory effect. When probenazole and prochloraz mixing ratios were 1∶3，1∶5 and 1∶7， the co-toxicity efficient （CTC） was 160.543 5，182.803 6 and 226.194 0， respectively， of which the mixture of 1∶7 was the most significant synergism.

Key words： fungicides； walnut root rot fungus； toxicity measurement； co-toxicity efficient

核桃（Juglans regia L.）原產(chǎn)中亞，學(xué)名胡桃，是胡桃科核桃屬多年生落葉喬木。核桃營養(yǎng)豐富、藥用價值高，美國食品與藥物監(jiān)理局（FDA）已于2004年將核桃列為健康食品，核桃被認為是“21世紀的超級食品”，也是我國重要的木本糧油作物[1]。核桃適應(yīng)范圍廣，抗逆性強，易管理，豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)，且綠色食品在我國市場需求漸漸增大，核桃產(chǎn)業(yè)逐漸成為山區(qū)農(nóng)民增加收入的經(jīng)濟支柱之一[2]。近幾年，核桃種植面積快速增加，但因其田園管理粗放、核桃與多種農(nóng)作物間作等不合理栽培模式等原因，致使病蟲害滋生蔓延，影響了核桃產(chǎn)業(yè)的健康穩(wěn)步發(fā)展，提出并解決這些問題，對提高核桃產(chǎn)量，促進農(nóng)民增收有重要意義。

核桃根腐病（Walnut root rot）由半知菌亞門中的鐮刀菌屬（Fusarium spp.）的一個未知種引起[3]。根腐病菌主要以菌核在土壤中越冬，也可以菌絲體隨病殘體遺留在土壤中越冬。翌年春天在適宜溫度下，菌核萌發(fā)產(chǎn)生的菌絲從寄主植物的根部或近地面的莖基部，從傷口或直接入侵，6月中旬發(fā)病較重[4]。據(jù)報道，美國核桃種植地區(qū)由疫霉菌（Phytophthora）引起的核桃樹根部病害，致使核桃樹根腐死亡，通常采用溴甲烷進行土壤消毒防治[5]。目前我國農(nóng)業(yè)上對核桃根腐病研究較少，生產(chǎn)中主要以農(nóng)業(yè)防治為主，有關(guān)藥劑防治研究鮮見報道[6]，為了找到有效防治核桃根腐病藥劑，作者參照其他作物根腐病綜合防治的文獻報道，選擇了18種殺菌劑原藥，采用菌絲生長速率法，測定其對核桃根腐病菌的室內(nèi)毒力及復(fù)配藥劑的聯(lián)合毒力，以期篩選出對核桃根腐病菌具有高效抑菌活性的殺菌劑。

1 材料與方法

1.1 供試殺菌劑原藥

供試殺菌劑原藥有：98.5%噻菌靈（江蘇嘉隆化工有限公司）、96%咪鮮胺（江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司）、96%抑霉唑（武漢鑫嘉林生物有限公司）、97.2%甲基硫菌靈（上海廣泰農(nóng)業(yè)科技有限公司）、98%氟啶胺（浙江禾田化工有限公司）、96.6%苯醚甲環(huán)唑（北京綠色農(nóng)化植?？萍加邢挢?zé)任公司）、95%己唑醇（濱海金海立醫(yī)藥化工有限公司）、95%烯唑醇（湖北利天生化有限公司）、95%三唑醇（鹽城利民農(nóng)化有限公司）、97%三唑酮（張家港天亨化工有限公司）、97%惡霉靈（四川國光農(nóng)化股份有限公司）、92%吡唑醚菌酯（武漢頂輝化工有限公司）、90%嘧菌酯（武漢頂輝化工有限公司）、98%嘧菌環(huán)胺（陜西恒潤化學(xué)工業(yè)有限公司）、98.3%嘧霉胺（煙臺科達化工有限公司）、96%異菌脲（湖北康寶泰精細化工有限公司）、96%稻瘟靈（川東農(nóng)藥化工有限公司）。

1.2 供試菌株

供試菌種為核桃根腐病菌（Fusarium spp.），采自湖北?？悼h，采用常規(guī)組織分離法[7]分離獲得，病原菌經(jīng)純化在PDA培養(yǎng)基上擴繁后，于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 殺菌劑對核桃根腐病菌的室內(nèi)毒力測定

采用菌絲生長速率法[8]。根據(jù)預(yù)試驗各藥劑最低有效抑制濃度，將供試藥劑用0.1%吐溫-80無菌水溶液配制成系列濃度的藥液備用。從低濃度到高濃度依次定量吸取配制好的系列濃度的藥液，按照培養(yǎng)基與藥液體積9∶1的比例加入到已融化并冷卻至60 ℃左右的PDA培養(yǎng)基中，充分搖勻后倒入直徑7.5 cm滅菌培養(yǎng)皿中，配制成系列濃度供試殺菌劑平板冷卻備用。將核桃根腐病菌置于PDA培養(yǎng)基上（27±1） ℃上培養(yǎng)7 d后，用打孔器（直徑6 mm）從其邊緣取菌餅，將菌餅倒置于備用的系列濃度供試殺菌劑平板中央，每皿放置1個菌餅，并置于（27±1） ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，7 d后用十字交叉法測量菌落直徑，每個處理均設(shè)3次重復(fù)，以不加藥劑的平板為對照。根據(jù)各處理的平均菌落直徑凈增長值，按公式（1）計算抑制率。用DPS軟件進行數(shù)據(jù)分析，求出回歸方程、EC50、EC95[9，10]。

抑制率=（對照菌落平均直徑-處理菌落平均直徑）/（對照菌落平均直徑-菌餅平均直徑）×100%（1）

1.4 兩種殺菌劑復(fù)配后對核桃根腐病菌的室內(nèi)聯(lián)合毒力測定

以兩種殺菌劑EC50的劑量為基準(zhǔn)，將噻菌靈與咪鮮胺按照7∶1、5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5、1∶7的復(fù)配比例配制成系列濃度的PDA培養(yǎng)基，用菌絲生長速率法測試復(fù)配劑不同濃度的菌落直徑凈增長值，每個處理均設(shè)3次重復(fù)，以不加藥劑的平板為對照。根據(jù)各處理的平均菌落直徑凈增長值，按公式（1）計算抑制率。用DPS軟件進行數(shù)據(jù)分析，求出回歸方程、EC50，利用孫云沛法按公式（2）～公式（5）計算復(fù)配藥劑的共毒系數(shù)，根據(jù)共毒系數(shù)大小評價復(fù)配藥劑的增效作用[11，12]。

設(shè)復(fù)配藥劑為M，組成M的單劑為標(biāo)準(zhǔn)藥劑噻菌靈（A）和供試藥劑咪鮮胺（B）。毒力指數(shù)為TI，標(biāo)準(zhǔn)藥劑A的毒力指數(shù)TI為100，ATI為復(fù)配劑實際毒力指數(shù)，TTI為復(fù)配劑理論毒力指數(shù)，CTC為復(fù)配劑共毒系數(shù)，PA為標(biāo)準(zhǔn)藥劑在復(fù)配劑中所占百分比，PB為供試藥劑在復(fù)配劑中所占百分比，計算公式如下：

供試藥劑B的毒力指數(shù)TI=A的EC50/B的EC50 ×100 （2）

復(fù)配劑M的ATI=A的EC50/M的EC50×100（3）

復(fù)配劑M的TTI=標(biāo)準(zhǔn)藥劑A的TI×PA+供試藥劑B的TI×PB （4）

復(fù)配劑M的CTC=復(fù)配劑M的ATI/復(fù)配劑M的TTI×100 （5）

根據(jù)CTC判斷增效作用，CTC≥120為增效作用；80≤CTC<120為相加作用；CTC<80為拮抗作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試殺菌劑對核桃根腐病菌的室內(nèi)毒力

17種殺菌劑原藥對核桃根腐病菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，噻菌靈、咪鮮胺、抑霉唑和甲基硫菌靈對核桃根腐病菌的抑制作用強，EC50分別為0.092 6、0.107 8、1.278 0和1.948 0 mg/L，其中噻菌靈抑制作用最強，EC50為0.092 6 mg/L；氟啶胺、苯醚甲環(huán)唑、異菌脲、嘧霉胺和己唑醇5種殺菌劑對核桃根腐病菌的抑制作用較強，EC50分別為3.624 0、5.041 8、13.121 5、30.675 2和34.993 2 mg/L；而嘧菌環(huán)胺、烯唑醇、惡霉靈、吡唑醚菌酯、三唑醇、嘧菌酯、稻瘟靈和三唑酮對核桃根腐病菌的抑制作用較弱，EC50均大于100 mg/L；嘧菌酯、稻瘟靈和三唑酮對核桃根腐病菌的抑制作用極弱（表1）。

2.2 噻菌靈和咪鮮胺復(fù)配對核桃根腐病的聯(lián)合毒力

噻菌靈與咪鮮胺按照7∶1、5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5、1∶7復(fù)配后對核桃根腐病菌有抑制作用，其中1∶7復(fù)配后抑制作用最強，EC50為0.046 7 mg/L。噻菌靈與咪鮮胺按照1∶3、1∶5、1∶7的比例復(fù)配后抑制核桃根腐病菌的CTC分別為160.543 5、182.803 6和226.194 0，均表現(xiàn)為增效作用，其中以1∶7復(fù)配后增效作用最為顯著。噻菌靈與咪鮮胺按照1∶1復(fù)配后CTC為96.069 0，表現(xiàn)為相加作用；噻菌靈與咪鮮胺按照7∶1、5：1、3∶1復(fù)配后CTC分別為30.465 9、39.299 0、72.276 7，均小于80，表現(xiàn)為拮抗作用（表2）。

3 小結(jié)與討論

核桃根腐病是核桃生產(chǎn)中毀滅性的病害，化學(xué)防治是目前控制該病害的主要措施。室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，供試的17種殺菌劑對核桃根腐病菌菌絲生長均有不同程度的抑制作用。從EC50來看，抑菌能力最強的藥劑是噻菌靈，其次是咪鮮胺、抑霉唑、甲基硫菌靈等，而三唑酮、稻瘟靈和嘧菌酯抑菌作用較差。

將不同作用機制的殺菌劑復(fù)配后應(yīng)用，不僅可以提高殺菌劑的作用效果，而且能延緩病原菌的抗藥性，延長殺菌劑的使用壽命[13]。噻菌靈是廣譜內(nèi)吸性殺菌劑，通過與真菌細胞的β-微管蛋白結(jié)合，影響紡錘體的形成，繼而影響細胞分裂，抑制真菌線粒體的呼吸作用和細胞增殖，對葡萄孢菌、鐮刀菌、小尾孢菌、青霉菌、黑星菌、絲核菌等病原菌效果較好。咪鮮胺是廣譜性麥角淄醇生物合成抑制劑，通過抑制病原菌甾醇14位碳原子的脫甲基作用，抑制病原菌生命活動，消滅病原菌[14]，咪鮮胺在國內(nèi)外廣泛用于防治由多種病原真菌引起的谷類、油料及經(jīng)濟作物病害，但在果樹病害上應(yīng)用較少[15，16]。噻菌靈與咪鮮胺按照1∶3、1∶5、1∶7的比例復(fù)配后對核桃根腐病菌的抑制作用表現(xiàn)為增效，其中1∶7復(fù)配后增效作用最顯著。

田間自然環(huán)境中，病原物、寄主和環(huán)境三者之間存在著復(fù)雜的關(guān)系，應(yīng)用上述藥劑在田間防治核桃根腐病過程中，應(yīng)注意藥劑的輪換，盡量避免或延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生，本研究結(jié)果可以為核桃根腐病的田間防治提供參考。

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