雜色鮑黃殼色突變體的形態(tài)學參數(shù)及營養(yǎng)成分分析

王 波，柯才煥，李衛(wèi)東，游偉偉＊

（1.廈門大學海洋與地球?qū)W院，福建 廈門361102；2.海南省海洋與漁業(yè)科學院，海南 ?？?70203）

雜色鮑（Haliotisdiversicolor），又稱九孔、九孔鮑，是主要分布于東亞及東南亞地區(qū)的一種小型鮑魚，也是我國南方主要的鮑魚養(yǎng)殖種類［1］.鮑的貝殼顏色通常因食物的不同而改變，如早在1962年日本學者就已發(fā)現(xiàn)皺紋盤鮑（Haliotisdiscushunnai）的食物由褐藻、綠藻改為紅藻時貝殼顏色由藍綠色轉(zhuǎn)變?yōu)楹稚?］，但鮑貝殼顏色出現(xiàn)變異、分化的現(xiàn)象也已有部分報道.Kobayashi等［3］在一個皺紋盤鮑全同胞家系中發(fā)現(xiàn)了有別于野生型（綠色）貝殼顏色的藍殼色突變型個體，通過與野生型個體的雜交實驗表明，皺紋盤鮑藍殼色表型受遺傳控制，是單位點、2個等位基因的遺傳決定機制.Liu等［4］也對皺紋盤鮑橘紅殼色突變型（O表型）與綠殼野生型（G表型）的遺傳特性進行了研究，結(jié)果顯示，橘紅色相對于綠色為隱性性狀，基因型為oo的個體其表現(xiàn)型為橘紅色（O表型），而基因型為GG或Go的個體其表現(xiàn)型為野生型（G表型），并在此基礎上選育出“中國紅”皺紋盤鮑新品系.殼色作為重要的表型和遺傳標記，為貝類的遺傳及品種選育工作提供了新的素材與研究方向.

我國南方養(yǎng)殖的雜色鮑通常以褐藻或海帶為主要食物，鮑的正常殼色因此而顯褐紅色或綠色，并因所投喂食物的不同而改變.但突變個體在稚貝階段（3月齡左右）即可觀察到明顯的黃殼色，且隨后貝殼顏色不因所攝食的食物而改變，穩(wěn)定表現(xiàn)出與正常殼色截然不同的黃殼色.范飛龍等［5］首次在雜色鮑中發(fā)現(xiàn)了黃殼色突變個體，并通過構(gòu)建不同殼色家系，對其早期的生長發(fā)育性狀進行了比較，并初步探討了其遺傳規(guī)律，但至今仍未明確殼色異常是否會引起二者在表型、生理生化等指標上的差異.

海洋貝類普遍具有殼色多態(tài)性，目前也已有不少顏色性狀與其他經(jīng)濟性狀相關性的研究［6－10］.本研究以雜色鮑正常殼色個體與黃殼色突變個體為研究對象，旨在尋找二者在形態(tài)學參數(shù)及營養(yǎng)成分上的異同點，以期進一步豐富雜色鮑的基礎數(shù)據(jù)庫，并為今后優(yōu)良品種的培育提供參考依據(jù).

1 材料與方法

1.1 實驗材料

在“東優(yōu)1號”雜色鮑的養(yǎng)殖群體中，發(fā)現(xiàn)了少量的黃殼色突變個體.分別挑選正常殼色和黃殼色個體作為親本，建立殼色家系，用于殼色遺傳規(guī)律的研究.經(jīng)過1年的養(yǎng)殖，在各家系后代中挑選出100粒處于繁殖前期的雜色鮑正常殼色與黃殼色成貝用于本研究.

1.2 形態(tài)學參數(shù)測定

將鮑殼表面的雜質(zhì)洗刷干凈后，用游標卡尺（精確度為0.02mm）測量殼長（L）、殼寬（W）、殼高（H），采用機械方法將鮑殼、足肌和內(nèi)臟團分離后，用電子天平（精確度0.01g）測量全濕質(zhì)量（Y1），足肌質(zhì)量（Y2）及殼質(zhì)量（Y3），并計算含肉率.參照 Kobayashi等［11］的方法，計算2個群體雜色鮑的殼型與密度相關參數(shù).其中，殼型參數(shù)定義為殼長、殼寬以及殼高分別占三者總和的比例，記為L／（L＋W＋H）、H／（L＋W＋H）、W／（L＋W＋H）；密度相關系數(shù)定義為全濕質(zhì)量、足肌質(zhì)量以及殼質(zhì)量分別與殼型體積的比例，記為Y1／（L×W×H）、Y2／（L×W×H）、Y3／（L×W×H）.

1.3 樣品處理

每個群體分別取20粒個體，設置3個平行組.剝殼，分離足肌、內(nèi)臟團并于60℃烘干，隨后研細混勻，過80目篩，置于干燥器中，隨機取樣供營養(yǎng)成分分析.反復用雙蒸水清洗鮑殼，瀝干后在室內(nèi)晾干1周，待水分含量穩(wěn)定，將每組鮑殼敲碎混勻后供成分測定分析.

1.4 一般營養(yǎng)成分測定

參照許貽斌等［12］的方法，粗蛋白質(zhì)含量依照凱式定氮法測定；粗脂肪含量采用索式（無水乙醚）抽提法測定；水分含量的測定采用烘箱（105℃）干燥法；灰分含量的測定采用馬福爐（550℃）灰化法；還原糖和蔗糖含量的測定采用酸水解后用標準的酒石酸鉀溶液直接滴定的方法.

1.5 礦物質(zhì)元素含量測定

60℃條件下，將烘干的足肌、內(nèi)臟團和鮑殼樣品采用質(zhì)量分數(shù)為65%的HNO3消化3h，再用雙蒸水定容，最后用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法（ICP－AES）對各礦物質(zhì)元素含量進行定量測定［13］.

1.6 氨基酸和脂肪酸種類及含量測定

采用鹽酸水解法，使用氨基酸自動分析儀，測定已烘干肌肉樣品中氨基酸的種類及含量.采用苯－石油醚萃取足肌樣品的脂質(zhì)，萃取所得的脂質(zhì)經(jīng)甲酯化后，再用氣相色譜儀測定其中的脂肪酸種類與含量［12］.

1.7 營養(yǎng)價值的評價指標

根據(jù)氨基酸特征，將不同的氨基酸種類進行求和，依據(jù)蘇天鳳等［14］的研究方法，分別統(tǒng)計鮮味氨基酸、支鏈氨基酸和芳香族氨基酸的總量，并計算支芳值.

必需氨基酸營養(yǎng)價值的評定根據(jù) WHO／FAO（1973）建議的每克氮氨基酸評分標準模式和中國預防醫(yī)學科學院、營養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所提出的雞蛋蛋白模式進行比較［15］，并分別計算氨基酸評分（amino acid score，AAS）、化學評分（chemical score，CS）和必需氨基酸指數(shù)（essential amino acid index，EAAI）.

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

實驗結(jié)果采用軟件SPSS 17.0進行分析，在oneway ANOVA基礎上，采用Duncan氏法進行多重比較.

2 結(jié) 果

2.1 2種殼色雜色鮑群體的形態(tài)學參數(shù)比較

表1為2種殼色雜色鮑群體的形態(tài)學參數(shù)比較.經(jīng)方差分析，實驗選取的2個群體在主要的形態(tài)學參數(shù)上均無顯著性差異（p＞0.05），而在與營養(yǎng)價值相關的含肉率指標上二者均接近50%.

表1 2種殼色雜色鮑群體的形態(tài)學參數(shù)Tab.1 Morphological traits of two H.diversicolor groups with different shell colors

如表2所示，與殼型以及密度相關的參數(shù)指標比較結(jié)果顯示，Y2／（L×W×H）值的變異系數(shù)最大，L／（L＋W＋H）值的變異系數(shù)最小.經(jīng)統(tǒng)計學分析，二者在相關參數(shù)上也無顯著性差異（p＞0.05）.

2.2 2種殼色雜色鮑群體足肌的一般營養(yǎng)成分比較

2種殼色雜色鮑群體的足肌干粉一般營養(yǎng)成分的測定結(jié)果如表3所示.二者的粗蛋白含量均達70%以上.黃殼色群體的粗蛋白、還原糖、蔗糖含量略高于正常殼色群體，而灰分、粗脂肪的含量略低于正常殼色群體.

表2 2種殼色雜色鮑群體的殼型和密度相關參數(shù)Tab.2 Parameters related to shell shape and density for two H.diversicolor groups

表3 2種殼色雜色鮑群體足肌的一般營養(yǎng)成分含量Tab.3 Basic nutritional compositions in muscle of two H.diversicolor groups %

2.3 2種殼色雜色鮑群體礦物質(zhì)元素含量比較

在2個群體的足肌、內(nèi)臟團及鮑殼中均檢測出10種常見的礦物質(zhì)元素（表4）.在足肌中，黃殼色群體Ca、Al的含量顯著高于正常殼色群體（p＜0.05），而Cu的含量卻顯著低于正常殼色群體（p＜0.05）.在內(nèi)臟團中，黃殼色群體Zn的含量顯著高于正常殼色群體（p＜0.05），而Si、Mn的含量卻顯著低于正常殼色群體（p＜0.05）.在鮑殼中，黃殼色群體 K、Cu、Mn的含量顯著高于正常殼色群體（p＜0.05），而Al的含量卻顯著低于正常殼色群體（p＜0.05）.并未發(fā)現(xiàn)在3個部位上同時表現(xiàn)出顯著差異的礦物質(zhì)元素.

在足肌和內(nèi)臟團中均檢測出10種微量元素，而在鮑殼中未檢出Ti和Cd（表5）.在足肌中，黃殼色群體Ti的含量顯著高于正常殼色群體（p＜0.05），而在足肌和內(nèi)臟團中，黃殼色群體Sn的含量顯著低于正常殼色群體（p＜0.05）.在鮑殼中，黃殼色群體Pb的含量顯著低于正常殼色群體（p＜0.05）.

2.4 2種殼色雜色鮑群體的足肌氨基酸種類及含量比較

2種殼色雜色群體的足肌中共檢測出17種常見氨基酸（表6），色氨酸被水解未檢出.結(jié)果顯示，2種殼色群體的氨基酸總量均較高，黃殼色群體的氨基酸總量、必需氨基酸總量均高于正常殼色群體.在測出的必需氨基酸種類中，黃殼色群體單種氨基酸的含量均不低于正常殼色群體同種氨基酸的含量.

表4 2種殼色雜色鮑群體的常見元素含量Tab.4 Common element contents of two H.diversicolor groups μg／g

表5 2種殼色雜色鮑群體的微量元素含量Tab.5 Microelement contents of two H.diversicolor groups μg／g

表6 2種殼色雜色鮑群體的足肌氨基酸組成及含量Tab.6 Amino acid compositions and contents in muscle of two H.diversicolor groups %

表7為2種殼色雜色鮑群體足肌的特征氨基酸組成及含量比較.結(jié)果顯示，2種殼色群體鮮味氨基酸的含量均較高，黃殼色群體的鮮味氨基酸和支鏈氨基酸總量高于正常殼色群體，黃殼色群體足肌中氨基酸的支芳值高于正常殼色群體.

表7 2種殼色雜色鮑群體足肌的特征氨基酸組成及含量Tab.7 Specific amino acid compositions and contents in muscle of two H.diversicolor groups%

2.5 2種殼色雜色鮑群體的足肌脂肪酸種類和相對含量分析

2種殼色雜色鮑群體足肌脂肪酸的相對含量見表8.2個群體均檢測到3種飽和脂肪酸（SFA）、2種單不飽和脂肪酸（MUFA）和3種多不飽和脂肪酸（PUFA）.其中，黃殼色群體的SFA和PUFA的總量均高于正常殼色群體，而MUFA的含量則略低.2個群體SFA的含量以C16∶0為最高，MUFA的含量以C18∶1n9c為最高，PUFA的含量以C20∶4n6為最高.

2.6 2種殼色雜色鮑群體的肌肉品質(zhì)比較

如表9所示，2種殼色雜色鮑群體的必需氨基酸總量均低于雞蛋蛋白標準和 WHO／FAO標準，必需氨基酸占氨基酸總量的比例與 WHO／FAO標準相當，符合WHO／FAO的理想模式.2種殼色雜色鮑群體的EAAI較高，黃殼色群體和正常殼色群體的EAAI值分別為45.26和44.23.

表8 2種殼色雜色鮑群體足肌的脂肪酸組成及相對含量Tab.8 Fatty acid compositions and relative contents in muscle of two H.diversicolor groups%

表9 2種殼色雜色鮑群體足肌的氨基酸含量與雞蛋蛋白及WHO／FAO標準的比較Tab.9 Comparison of essential amino acid contents in muscle of two H.diversicolor groups with those in egg and from WHO／FAO standard mg／g

2種殼色雜色鮑群體的AAS和CS結(jié)果顯示，AAS值和CS值在2個群體中均是Lys的評分最高，而AAS值的最低評分為Val，CS值的最低評分為Met＋Cys（表10）.

表10 2種殼色雜色鮑群體足肌的AAS值和CS值Tab.10 Values of AAS and CS in muscle of two H.diversicolor groups

3 討 論

3.1 形態(tài)學參數(shù)比較

顏色多態(tài)性是指在自然環(huán)境中，一個物種的不同群體或同一個群體中不同個體呈現(xiàn)2種或2種以上可遺傳的且不連續(xù)的顏色表型［16］.海洋貝類的貝殼顏色變化范圍在不同種之間存在十分明顯的差異，有些種類的貝殼顏色非常穩(wěn)定，有些種類貝殼的顏色則豐富、多變.貝類的殼顏色與環(huán)境緊密相關，但同時也與貝類本身生態(tài)行為、生長存活、生理特性有關.野生鮑在生態(tài)位上的競爭力弱，在自然界中顏色過于鮮艷極易受捕食者攻擊，因此，鮑的顏色多因食物的改變而變化.本研究在雜色鮑養(yǎng)殖群體中發(fā)現(xiàn)了少數(shù)黃殼色突變個體，對黃殼色與正常殼色群體的形態(tài)學指標比較結(jié)果顯示，在殼型、質(zhì)量等基礎形態(tài)參數(shù)和含肉率指標上并無顯著差別，在養(yǎng)殖過程中也未發(fā)現(xiàn)二者在攝食行為和攝食量上存在差異.可食部分足肌的質(zhì)量是最為重要的經(jīng)濟性狀參數(shù)，但在活體情況下無法測量足肌質(zhì)量.Kobayashi等［11］采用鮑的殼型參數(shù)與密度參數(shù)作為指標對皺紋盤鮑養(yǎng)殖及野生群體的外型進行了比較，并發(fā)現(xiàn)足肌質(zhì)量與鮑殼形態(tài)密切相關.吳富村［6］也建議以參數(shù)H／（L＋W＋H）為指標對皺紋盤鮑鮑殼形態(tài)進行人工選擇，從而間接對足肌質(zhì)量性狀進行選擇.本研究結(jié)果表明，2種殼色雜色鮑在殼型和密度相關的形態(tài)指標上也不存在顯著差異，說明鮑的形態(tài)參數(shù)并不因殼色的變異而改變.

范飛龍等［5］通過雙列雜交的策略分別建立了雜色鮑正常殼色與黃殼色的自交與雜交家系，發(fā)現(xiàn)4組家系在早期生長發(fā)育上也并未存在顯著差異，這說明顏色的突變并未造成二者形態(tài)學上的差異.吳富村［6］以皺紋盤鮑的殼長為指標，比較了來自相同家系不同殼色個體間的生長速度，結(jié)果表明，在幼鮑發(fā)育至412 d的不同統(tǒng)計時段內(nèi)，均未檢測到2種殼色個體間存在生長速度的顯著差異.但雙殼貝類的生長、存活等表型性狀卻與殼色有著密切關系.菲律賓蛤仔（Ruditapesphilippinarum）2種不同顏色品系個體在稚貝期以及養(yǎng)成期的生長與存活都表現(xiàn)出明顯差異［7］.不同殼色自交家系的海灣扇貝（Argopectenirradians），相同養(yǎng)殖日齡的白色家系個體顯著大于橙色和紫色家系，且白色家系的高溫存活率最高［9］.Newkirk［17］將此歸結(jié)為，殼色深淺影響對光和熱的吸收，從而影響貝類的生長，這是生理與生態(tài)協(xié)同作用的結(jié)果.

3.2 營養(yǎng)成分比較

足肌是鮑的主要可食部分，其營養(yǎng)品質(zhì)參數(shù)是鮑養(yǎng)殖與育種的重要經(jīng)濟性狀之一.本研究表明2種殼色群體足肌組織中水分、灰分、粗蛋白和粗脂肪的含量基本一致，這一結(jié)論與陳煒等［18］關于皺紋盤鮑紅殼和綠殼個體的一般營養(yǎng)成分比較結(jié)果相一致.此外，顧向飛等［15］的研究表明，3種殼色文蛤的常規(guī)營養(yǎng)成分含量間也不存在顯著差異.本研究中2種殼色雜色鮑群體足肌、內(nèi)臟團與鮑殼的礦物質(zhì)元素含量比較結(jié)果顯示，同一種元素在不同部位的含量差別很大，2個群體大部分礦物質(zhì)含量均較接近，且大小關系上并無特殊規(guī)律，但值得注意的是黃殼色個體鮑殼中Cu元素的含量是正常殼色的4倍，這或是引起殼色變化的一個主要因素.皺紋盤鮑紅殼個體足肌中Fe元素的含量是正常殼色個體的3倍，作者認為這或是造成兩者足肌灰分顏色差異的主要原因［18］.而在本研究中2種殼色群體在足肌顏色上并無明顯區(qū)別，所以也并未在足肌的Fe元素含量上發(fā)現(xiàn)顯著差異.

在測出的必需氨基酸種類中，黃殼色群體單種氨基酸的含量均不低于正常殼色群體同種氨基酸的含量，但二者的差異并不顯著.同時，脂肪酸的組成與含量上也并未現(xiàn)顯著差異，這與皺紋盤鮑不同殼色的脂肪酸含量比較結(jié)果相吻合［18］.而在文蛤（Meretrix meretrixL.）的相關研究中，紅殼文蛤的二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）含量均有優(yōu)于其他殼色的趨勢［15］.生物體內(nèi)的脂肪酸與氨基酸的含量受養(yǎng)殖環(huán)境、飼料等的影響很大，鑒于2個群體在養(yǎng)殖過程中的環(huán)境條件均較一致，因此，雜色鮑殼色的不同并未造成二者氨基酸與脂肪酸含量上的差別.

2種殼色雜色鮑群體的必需氨基酸占氨基酸總量的比例與 WHO／FAO標準（35.38%）相當，可見2個群體的氨基酸平衡效果較好，符合FAO／WHO的理想模式.EAAI是評價蛋白質(zhì)營養(yǎng)價值的一個常用指標，從結(jié)果可以看出黃殼色群體的EAAI略高于正常殼色群體，但二者都處于較高水平，說明均具有較好的營養(yǎng)價值.根據(jù)AAS，2種殼色群體的第一限制性氨基酸都是纈氨酸，第二限制性氨基酸為蛋氨酸.根據(jù)CS，2種殼色群體的第一限制性氨基酸都是蛋氨酸，第二限制性氨基酸為纈氨酸.若在日常的養(yǎng)成過程中注意往飼料中添加蛋氨酸和纈氨酸，理論上可以提高2種殼色雜色鮑群體足肌的營養(yǎng)品質(zhì).

研究結(jié)果顯示，雜色鮑殼色上的差異并未導致二者在形態(tài)學參數(shù)以及營養(yǎng)成分上的不同.殼色作為一個可穩(wěn)定遺傳的標記，如何與生長、抗逆、營養(yǎng)品質(zhì)等重要經(jīng)濟性狀相結(jié)合，值得在今后鮑新品種的培育工作中進一步深入探討.

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