HPLC測(cè)定常通舒顆粒中二苯乙烯苷含量

徐菁　李志浩　姜雪強(qiáng)

[摘 要] 目的：建立常通舒顆粒中二苯乙烯苷含量分析方法。方法：采用FORTIS-C18柱（4.6mm×250mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液（76：24）為流動(dòng)相，采用梯度洗脫，流速1.0mL·min-1，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)320nm。 結(jié)果：二苯乙烯苷在9.36～93.6μg/mL濃度范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系（r=0.9999），平均加樣回收率為98.8%，RSD為1.11%。結(jié)論：本方法靈敏度高、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)，可作為控制常通舒顆粒質(zhì)量重要方法。

[關(guān)鍵詞] 二苯乙烯苷；常通舒顆粒；高效液相色譜法

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)：2095-5200（2015）04-056-03

常通舒顆粒為原衛(wèi)生部部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第10冊(cè)（WS3-B-2031-95）收載。本方由何首烏、當(dāng)歸、赤芍、火麻仁、桑椹等五味藥材組成。具有滋陰養(yǎng)血，潤(rùn)腸通便之功效。用于習(xí)慣性便秘，老年性便秘及產(chǎn)后便秘等癥[1]。原制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有檢查和鑒別項(xiàng)，缺乏對(duì)制劑中藥材定量控制，無(wú)法對(duì)制劑原料藥材進(jìn)行品質(zhì)管控，制劑工藝科學(xué)性和穩(wěn)定性無(wú)法提供科學(xué)依據(jù)，無(wú)法控制成品內(nèi)在質(zhì)量。為更好控制本制劑質(zhì)量，筆者以方中何首烏為控制藥材，以主要藥效成分2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷為定量分析指標(biāo)，建立了常通舒顆粒定量分析方法，為該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供重要依據(jù)?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，何首烏補(bǔ)肝腎，益精血，烏須發(fā)，強(qiáng)筋骨功效相關(guān)藥理作用是促進(jìn)造血功能，提高機(jī)體免疫功能，降血脂，抗動(dòng)脈粥樣硬化，保肝，延緩衰老，影響內(nèi)分泌功能，潤(rùn)腸通便等作用[2]。何首烏功效作用物質(zhì)基礎(chǔ)主要為磷脂、蒽醌類、葡萄糖苷類等成分[3-4]。其中2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷是何首烏主要藥理活性物質(zhì)及其質(zhì)量控制指標(biāo)成分。中國(guó)藥典也將其作為何首烏及含何首烏制劑主要質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)定物[5]。

本文采用HPLC法對(duì)不同批次常通舒顆粒中2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量進(jìn)行分析，結(jié)果表明：本法靈敏度高、重復(fù)性好， 結(jié)果準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

Dionex-U3000液相色譜儀（Dionex公司，Dionex Chemeleon色譜工作站）；Mettler Toledo MS104S型電子天平（d=0.01mg，瑞士Mettler Toledo）公司；2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品（供含量測(cè)定用，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)0819-200203）；常通舒顆粒及缺何首烏陰性對(duì)照樣品（湖北清大制藥有限公司，規(guī)格：5g/袋）；甲醇（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 ，分析純）；乙腈（天津大茂，色譜純）；磷酸（武漢市江北化學(xué)試劑有限責(zé)任公司 ，分析純）；水為雙蒸水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液制備

取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥至恒重，二苯乙烯苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含93.6μg溶液，即得。

2.2 供試品制備

取本品5.0g，用研缽研成粗粉，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。按上述方法制得不含何首烏陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)與色譜條件

采用以乙腈：0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，采用梯度洗脫[5-9]，乙腈%（A），0.1%磷酸%（B）梯度洗脫程序?yàn)樵?～12min內(nèi)A：B為（76：24）；時(shí)間從12～60min過(guò)程中，A比例從76%→89%；而B從24%→11%。色譜柱為：FORTIS-C18柱（4.6mm×250mm，5μm），流速1.0mL/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)320nm，進(jìn)樣量為：10μL，在此色譜條件下，二苯乙烯苷色譜峰理論板數(shù)不小于4000，分離度大于1.5。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍

準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL分別置10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋，并定容至刻度，搖勻，得到濃度分別為4.68μg/mL、9.36μg/mL、18.72μg/mL、46.80μg/mL、74.88μg/mL、93.60μg/mL二苯乙烯苷對(duì)照品溶液。分別準(zhǔn)確吸取10μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定色譜峰面積，以濃度（X）對(duì)峰面積（Y）進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為：Y=0.8976X+1.4421，r=0.9999；結(jié)果表明二苯乙烯苷在4.68～93.60μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取二苯乙烯苷對(duì)照品溶液，按照上述色譜條件，進(jìn)樣分析，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果色譜峰保留時(shí)間穩(wěn)定，計(jì)算6次色譜峰面積RSD分別為0.96%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取常通舒顆粒中供試品溶液，室溫下分別在0h、3h、6h、12h、24h進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積，計(jì)算其RSD為1.52%，表明處理后常通舒顆粒供試品溶液室溫下24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批常通舒顆粒樣品（批號(hào)20130708）6份，精密稱定，按上述方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果：二苯乙烯苷平均含量0.47mg/g，RSD為1.83%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

稱取重復(fù)性實(shí)驗(yàn)已測(cè)定含量常通舒顆粒樣品（批號(hào)20130708）9份，每份2.5g，精密稱定，分別加入二苯乙烯苷對(duì)照品溶液（濃度93.6μg/ml）11.0mL、12.0mL、13.0mL（3種不同水平，各3份），按上述方法同法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL。按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算二苯乙烯苷含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 樣品測(cè)定

按上述色譜條件對(duì)5批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，得到三次測(cè)定平均值。結(jié)果5批樣品含量分別為0.47 mg/g、0.46 mg/g、0.41 mg/g、0.48 mg/g、0.44mg/g。

3 討論

常通舒顆粒中，何首烏為方中君藥。中國(guó)藥典對(duì)何首烏質(zhì)量控制為測(cè)定二苯乙烯苷，結(jié)合型蒽醌總量。對(duì)于本復(fù)方制劑而言，分析二苯乙烯苷含量能嚴(yán)格控制原料與工藝穩(wěn)定性，并且能特征性表征何首烏（由于蒽醌類化合物在蓼科很多植物中均含有，不能特征性反映何首烏）。因而筆者選擇本方中君藥何首烏所含二苯乙烯苷作為本方定量控制指標(biāo)。

筆者還對(duì)生產(chǎn)廠家提供何首烏藥材進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示，何首烏中二苯乙烯苷含量為0.93%。經(jīng)計(jì)算，常通舒顆粒在制備過(guò)程中，其二苯乙烯苷轉(zhuǎn)移率為78.6%，說(shuō)明常通舒顆粒制備工藝合理，能充分保證有效成分轉(zhuǎn)移率，并且證明何首烏藥材投放量合格。今后將進(jìn)一步提高制備工藝水平，保證制劑質(zhì)量進(jìn)一步提高和制備工藝穩(wěn)定性。

參 考 文 獻(xiàn)

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