荷芩止癢搽劑長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)研究(對(duì)家兔生化學(xué)的影響)△

趙景云 馬克堅(jiān)* 王振宇 宋京風(fēng)

(1.云南省中醫(yī)中藥研究院，云南 昆明 650223; 2.昆明醫(yī)科大學(xué)，云南 呈貢 650504)

在艾滋病感染者及病人(HIV/AIDS)中皮膚瘙癢癥是較為常見的臨床癥狀，國(guó)內(nèi)報(bào)道，皮膚瘙癢發(fā)生率最高為71.43%［1］，居首位，且最易于反復(fù)發(fā)作。報(bào)導(dǎo)可能的發(fā)生原因是皮膚感染、丘疹鱗屑改變、光線性皮炎、皮膚干燥和藥物反應(yīng)等，也可能是非特異性淋巴細(xì)胞增生或特發(fā)性皮膚瘙癢癥［2］。其病因及發(fā)病機(jī)制仍不明確，臨床診療的循證證據(jù)不足，但與AIDS 的發(fā)病及進(jìn)展關(guān)系密切［3］。艾滋病皮膚瘙癢癥與一般疾病的皮膚瘙癢癥有很大區(qū)別，HIV/AIDS 患者皮膚瘙癢癥狀劇烈，常因過度搔抓而出現(xiàn)皮膚局部血跡累累，皮損部位可出現(xiàn)丘疹、丘皰疹、結(jié)節(jié)等，形狀不一、大小不等，并可伴有局部皮膚色素沉著和瘢，瘙癢可發(fā)于全身各部皮膚，好發(fā)于四肢伸側(cè)，尤以下肢伸側(cè)最為常見，根據(jù)其表現(xiàn)類似祖國(guó)醫(yī)學(xué)的“粟瘡”。隨著病情發(fā)展，皮損的變化，又與古醫(yī)文獻(xiàn)中記載的“馬疥”相似［4］。HIV/AIDS 患者本身因感染HIV 或接受HAART 療法，皮膚常發(fā)生劇烈的瘙癢、泛發(fā)皮疹［5］，并因過度的搔抓可出現(xiàn)表皮剝脫性丘疹、炎癥性色素沉著和瘢痕性結(jié)節(jié)，給患者造成了極大的痛苦。而在艾滋病患者HAART 療法過程中，皮膚瘙癢可使患者生活質(zhì)量明顯下降，長(zhǎng)期服藥依從性難以保證，可能使HIV 對(duì)藥物產(chǎn)生耐藥而導(dǎo)致治療失?。?，7］。因此，艾滋病皮膚瘙癢癥也是臨床上一個(gè)不容忽視的重要問題，直接影響到患者治療的依從性以及生活質(zhì)量。

荷芩止癢搽劑是云南省中醫(yī)中藥研究院經(jīng)過對(duì)HIV/AIDS 患者皮膚瘙癢發(fā)病情況的廣泛調(diào)研，觀察患者皮膚發(fā)病情況和病情發(fā)展過程的基礎(chǔ)上，以中醫(yī)辨證施治的原則，結(jié)合各單味藥的功效以及相關(guān)現(xiàn)代研究而成。主要由紅根等經(jīng)乙醇提取制成，具有解毒、消腫、除濕和止癢作用。為使其安全進(jìn)入臨床觀察，進(jìn)行醫(yī)院制劑的申報(bào)，同時(shí)也為臨床使用提供可靠的科學(xué)依據(jù)，對(duì)該搽劑進(jìn)行了安全性評(píng)價(jià)。

荷芩止癢搽劑家兔皮膚給藥4 周，停藥恢復(fù)2 周血清生化學(xué)長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)研究報(bào)導(dǎo)如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物和試劑：荷芩止癢搽劑(原生藥1.5g·mL-1、3.0g·mL-1、6.0g·mLI -13 個(gè)濃度)，批號(hào)：120701;50%藥用乙醇，批號(hào)：120731，由云南省中醫(yī)中藥研究院制劑室提供;氯化鈉注射液：250mL：2.25g，批號(hào)：1112231，昆明南疆制藥有限公司。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：普通級(jí)家兔，年齡(♀/♂，月)：3 ～4，體重(♀/♂，kg)2.0 ～2.7/2.0 ～2.7，來源于昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(滇)2005 -0008，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(滇)2011 -0004，飼料生產(chǎn)許可證：SCXK(滇)2011 -0004，由昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供。

1.1.3 儀器：采用OLYMPUS AU5400 型全自動(dòng)生化分析儀。

1.2 方法［8］［9］［10］

1.2.1 試驗(yàn)分組：60 只合格動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)二周并同時(shí)進(jìn)行相關(guān)觀察后，按性別分別稱重，按體重隨機(jī)分為10 組，即完整皮膚(陰性對(duì)照組、溶媒對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組)和破損皮膚(陰性對(duì)照組、溶媒對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組)，每組6 只，雌雄各3 只，單籠飼養(yǎng)。

1.2.2 劑量設(shè)計(jì)：荷芩止癢搽劑臨床制劑擬為每ml 相當(dāng)于原生藥1.0g，皮膚外用，涂于患處，3 次/d，1 ～3mL/ 次，3 ～9mL/d，5d 為1 個(gè)療程。按成人60 kg-1·bw-1，每天使用9mL 計(jì)算：用量為0.15 mL·kg-1·bw-1·d-1，相當(dāng)于原生藥0.15g·kg-1·bw-1·d-1，采用體重與體表面積換算的通用公式“l(fā)gS = 0.8762 + 0.698 lgW”換算為體表面積每m2 給藥量為：6.87mL·m-2·d-1，相當(dāng)于原生藥6.87g·m-2·d-1，各試驗(yàn)組劑量與臨床擬用劑量倍數(shù)參比見表1。

表1 各試驗(yàn)組劑量與臨床擬用劑量倍數(shù)參比表

1.2.3 給藥方法及觀察時(shí)間：與臨床給藥途徑一致，采用皮膚給藥，破損皮膚組動(dòng)物每周人為破損一次皮膚。動(dòng)物連續(xù)給藥4wk，每wk 給藥7d，每天上午給藥1 次，藥物保留作用6h 后用溫水清洗，每次給藥容量為2mL·kg-1·bw-1等容量皮膚給藥。末次給藥后24h，每組隨機(jī)抽取4 只動(dòng)物，雌雄各2 只進(jìn)行給藥末期檢查;每組剩余2 只動(dòng)物，雌雄各1 只，停藥恢復(fù)觀察2wk 進(jìn)行恢復(fù)期檢查。

1.2.4 動(dòng)物采血：禁食不禁水12 ～16h，用3%戊巴比妥鈉按40mg·kg-1·bw-1耳緣靜脈注射麻醉。將麻醉動(dòng)物固定，在腹主動(dòng)脈，用一次性采血針穿刺采血。

1.2.5 生化學(xué)檢測(cè)：主要檢測(cè)指標(biāo)：丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三脂(TG)、總膽固醇TC(CHO)、血糖(GLU)、肌酐(Cre)、肌酸激酶(CK)、尿素氮(Bun)、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、堿性磷酸酶(ALP)、白/球比值(A/G)、血清鉀離子(K +)、血清鈉離子(Na+)、血清氯離子(Cl -)。采用OLYMPUS AU5400 型全自動(dòng)生化分析儀。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：計(jì)量資料采用SPSSwin12.0 軟件進(jìn)行方差分析，方差齊時(shí)兩均數(shù)比較用LSD，方差不齊用秩和檢驗(yàn);等級(jí)資料用秩和檢驗(yàn)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

荷芩止癢搽劑連續(xù)給藥4wk 停藥恢復(fù)2wk，給藥末期完整皮膚堿性磷酸酶(ALP)中劑量組略低，與溶媒對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05);總蛋白(TP)低、中、高劑量組均略升高，以高劑量較明顯，與陰性和溶媒對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.05/0.01);總膽固醇(T-CHO)略升高，與溶媒對(duì)照組和低劑量組比較有顯著性差異(P＜0.05);肌酸激酶(CK)中劑量組略低，與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05);白/球比(A/G)高劑量組略低，與溶媒對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。給藥末期破損皮膚ALP 高劑量組略低，與溶媒對(duì)照組和低劑量組比較有顯著性差異(P＜0.05);尿素氮(UREA)中、高劑量略低，與陰性和低劑量組比較有顯著性差異(P＜0.05);CK 溶媒對(duì)照、中、高劑量組略低，與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05);氯離子(CL)低劑量組略低，與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。給藥末期其余各項(xiàng)血清生化學(xué)檢測(cè)指標(biāo)未見明顯異常，組間比較無顯著性差異(P＞0.05)。恢復(fù)期因各組動(dòng)物數(shù)＜3，未進(jìn)行組間比較，但各項(xiàng)檢查指標(biāo)均在正常參考值范圍內(nèi)。(表2、3、4、5)。

指標(biāo) 陰性對(duì)照組 溶媒對(duì)照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組GLU(mmol/L) 7.61 ±1.87 7.14 ±1.49 7.47 ±1.38 7.39 ±2.04 7.73 ±0.60 AST(IU/L) 60.00 ±8.76 58.25 ±9.98 72.75 ±17.58 60.67 ±18.18 64.67 ±3.51 ALT(IU/L) 46.25 ±13.79 42.00 ±9.76 45.00 ±17.58 47.33 ±28.31 52.00 ±12.17 ALP(IU/L) 216.50 ±58.46 229.30 ±34.35 215.50 ±36.01 153.70 ±23.86▼ 193.50 ±9.19 TP(g/L) 62.53 ±3.15 60.60 ±2.57 66.83 ±3.56▼ 65.60 ±2.44▼ 69.67 ±1.93＊＊/▼ALB(g/L) 39.07 ±3.13 39.28 ±2.88 41.85 ±2.11 39.35 ±3.62 39.50 ±2.75 T-CHO(mmol/L) 1.43 ±0.54 1.13 ±0.42 1.24 ±0.44 1.41 ±0.20 2.19 ±0.76▼/■CR(umol/L) 87.50 ±3.62 104.50 ±15.33 95.75 ±9.36 93.00 ±25.76 82.67 ±7.02 UREA 9.64 ±3.15 10.54 ±1.72 10.34 ±1.54 10.12 ±2.60 9.20 ±2.17 TG(mmol/L) 0.97 ±0.26 0.95 ±0.29 1.05 ±0.35 1.52 ±1.26 0.92 ±0.31 CK(IU/L) 2021 ±228.31 1542 ±473.66 1542 ±899.10 1209 ±174.96* 1910 ±483.07 A/G 1.67 ±0.18 1.88 ±0.36 1.76 ±0.48 1.55 ±0.41 1.34 ±0.28▼

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：* /＊＊與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異P ＜0.05/0.01;▼與溶媒對(duì)照組比較P ＜0.05;■與低劑量組比較有顯著性差異P ＜0.05。注：動(dòng)物數(shù)=4

表3 荷芩止癢搽劑破損皮膚給藥末期血清生化指標(biāo)檢查結(jié)果( ±s)

表3 荷芩止癢搽劑破損皮膚給藥末期血清生化指標(biāo)檢查結(jié)果( ±s)

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：* /＊＊與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異P ＜0.05/0.01;▼與溶媒對(duì)照組比較P ＜0.05;■與低劑量組比較有顯著性差異P ＜0.05。注：動(dòng)物數(shù)=4

指標(biāo) 陰性對(duì)照組 溶媒對(duì)照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組GLU(mmol/L) 6.35 ±0.84 7.31 ±1.19 7.05 ±0.95 7.70 ±1.28 6.56 ±0.96 AST(IU/L) 66.25 ±11.47 65.00 ±15.58 64.25 ±6.24 62.25 ±20.32 59.75 ±4.57 ALT(IU/L) 53.50 ±7.00 47.50 ±18.98 53.75 ±11.87 45.00 ±5.60 50.00 ±14.85 ALP(IU/L) 186.50 ±35.31 226.50 ±62.11 221.00 ±57.99 161.30 ±61.11 141.80 ±14.50▼/■TP(g/L) 66.85 ±8.46 62.08 ±3.25 66.33 ±2.31 67.50 ±3.31 66.80 ±2.02 ALB(g/L) 40.00 ±1.30 39.28 ±3.38 40.47 ±1.55 41.75 ±2.02 39.00 ±1.60 T-CHO(mmol/L) 1.55 ±0.58 1.49 ±0.47 1.51 ±0.29 1.50 ±0.29 2.12 ±1.13 CR(umol/L) 106.80 ±6.40 94.25 ±14.10 90.75 ±11.24 97.25 ±16.88 98.75 ±6.02 UREA 13.03 ±1.68 10.54 ±1.39 11.43 ±2.76 9.77 ±1.93* 8.51 ±0.86＊＊/■TG(mmol/L) 0.99 ±0.13 0.97 ±0.14 1.08 ±0.14 0.86 ±0.41 1.03 ±0.07 CK(IU/L) 1892 ±691.69 885.0 ±216.34* 1325 ±458.40 855.8 ±575.07* 788.5 ±347.14*A/G 1.60 ±0.47 1.74 ±0.25 1.58 ±0.22 1.64 ±0.25 1.42 ±0.18 K+ (mmol/L) 4.39 ±0.17 3.89 ±0.45 4.31 ±0.58 4.09 ±0.30 4.59 ±0.65 Na+ (mmol/L) 144.20 ±2.90 142.4 ±2.69 144.8 ±2.05 143.6 ±2.90 143.6 ±2.40 CL- (mmol/L) 101.2 ±2.21 99.08 ±2.00 97.25 ±1.66*99.12 ±2.21 99.20 ±3.28

表4 荷芩止癢搽劑完整皮膚恢復(fù)期血清生化指標(biāo)檢查結(jié)果( ±s)

表4 荷芩止癢搽劑完整皮膚恢復(fù)期血清生化指標(biāo)檢查結(jié)果( ±s)

注：恢復(fù)期動(dòng)物數(shù)=2，未進(jìn)行組間比較。

指標(biāo) 陰性對(duì)照組 溶媒對(duì)照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組GLU(mmol/L) 8.49 ±1.08 7.69 ±0.56 7.83 ±0.25 7.05 ±0.30 8.29 ±1.63 AST(IU/L) 75.50 ±12.02 64.00 ±7.07 55.50 ±4.95 49.50 ±13.44 52.00 ±1.41 ALT(IU/L) 57.50 ±12.02 55.50 ±9.19 50.00 ±16.97 34.00 ±8.49 37.00 ±8.49 ALP(IU/L) 174.00 ±5.66 214.00 ±69.30 198.00 ±43.84 184.50 ±130.82 194.50 ±40.31 TP(g/L) 66.60 ±2.26 61.55 ±2.19 60.35 ±1.48 57.50 ±2.55 66.60 ±4.38 ALB(g/L) 41.85 ±1.77 40.00 ±2.26 40.05 ±0.92 34.35 ±2.19 40.85 ±0.64 T-CHO(mmol/L) 2.23 ±0.91 1.73 ±1.00 1.49 ±0.29 1.39 ±0.36 1.64 ±0.08 CR(umol/L) 97.50 ±9.19 109.00 ±15.56 101.50 ±4.95 87.00 ±2.83 91.50 ±7.78 UREA 6.90 ±2.06 8.05 ±3.88 7.64 ±0.05 7.26 ±0.73 7.85 ±1.25 TG(mmol/L) 1.79 ±0.01 0.89 ±0.00 1.02 ±0.18 1.18 ±0.28 0.80 ±0.09 CK(IU/L) 1036 ±123.04 894.0 ±100.41 687.50 ±304.76 791.50 ±125.16 724.00 ±25.46 A/G 1.72 ±0.35 1.86 ±0.11 1.99 ±0.28 1.53 ±0.40 1.62 ±0.34 K+ (mmol/L) 4.47 ±0.01 4.31 ±0.69 4.66 ±0.12 4.36 ±0.74 4.61 ±0.08 Na+ (mmol/L) 141.05 ±2.76 141.70 ±1.70 142.45 ±0.35 140.35 ±0.92 140.25 ±0.07 CL- (mmol/L) 92.30 ±1.27 97.70 ±0.57 101.70 ±1.84 98.95 ±3.61 98.90 ±2.12

指標(biāo) 陰性對(duì)照組 溶媒對(duì)照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組GLU(mmol/L) 8.83 ±0.42 8.81 ±0.98 8.35 ±1.87 8.95 ±1.09 7.09 ±0.83 AST(IU/L) 74.50 ±0.71 83.50 ±21.92 52.50 ±0.71 68.50 ±26.16 84.00 ±24.04 ALT(IU/L) 50.00 ±9.90 65.00 ±35.36 47.50 ±13.44 47.50 ±21.92 68.50 ±9.19 ALP(IU/L) 185.50 ±16.26 135.50 ±9.19 197.00 ±56.57 212.50 ±65.76 158.00 ±55.15 TP(g/L) 62.70 ±5.52 58.20 ±3.96 61.25 ±5.16 60.80 ±0.14 61.35 ±0.07 ALB(g/L) 40.40 ±1.98 37.60 ±3.25 35.50 ±0.85 38.55 ±0.64 41.30 ±0.42 T-CHO(mmol/L) 1.83 ±0.50 1.17 ±0.41 1.26 ±0.62 2.00 ±0.60 2.38 ±0.71 CR(umol/L) 91.00 ±7.07 80.50 ±4.95 96.50 ±7.78 88.00 ±15.56 96.00 ±1.41 UREA 6.53 ±1.26 6.26 ±1.08 7.28 ±0.27 6.24 ±0.82 6.96 ±0.61 TG(mmol/L) 1.45 ±0.45 1.13 ±0.42 0.95 ±0.27 1.13 ±0.35 1.89 ±0.19 CK(IU/L) 1036.0 ±73.54 1528.5 ±128.00 1264.0 ±62.23 1305.0 ±233.35 819.50 ±23.33 A/G 1.85 ±0.18 1.83 ±0.09 1.40 ±0.21 1.74 ±0.09 2.06 ±0.07 K+ (mmol/L) 4.44 ±0.04 4.19 ±0.05 4.36 ±0.03 4.40 ±1.31 4.17 ±0.42 Na+ (mmol/L) 140.50 ±0.71 140.30 ±1.84 140.65 ±0.78 140.90 ±0.14 141.10 ±0.14 CL- (mmol/L) 97.80 ±7.78 98.75 ±0.07 100.65 ±2.19 101.55 ±0.07 96.10 ±2.12

3 討論

血清生化學(xué)及電解質(zhì)指標(biāo)檢查結(jié)果顯示，家兔連續(xù)給藥4 周停藥恢復(fù)2 周，給藥末期完整皮膚總蛋白(TP)低、中、高劑量組均略升高，以高劑量較明顯，與陰性和溶媒對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.05/0.01)，而白蛋白組間比較無顯著性差異，提示低、中、高劑量組總蛋白升高以球蛋白升高為主，這是否與該搽劑具有一定的免疫調(diào)節(jié)功能有關(guān)需進(jìn)一步研究;此外給藥末期完整皮膚堿性磷酸酶(ALP)中劑量組略低，與溶媒對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05);總膽固醇(T-CHO)略升高，與溶媒對(duì)照組和低劑量組比較有顯著性差異(P＜0.05);肌酸激酶(CK)中劑量組略低，與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05);白/球比(A/G)高劑量組略低，與溶媒對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。給藥末期破損皮膚ALP 高劑量組略低，與溶媒對(duì)照組和低劑量組比較有顯著性差異(P＜0.05);尿素氮(UREA)中、高劑量略低，與陰性和低劑量組比較有顯著性差異(P＜0.05);CK 溶媒對(duì)照、中、高劑量組略低，與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05);氯離子(CL)低劑量組略低，與陰性對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。但所測(cè)數(shù)值在文獻(xiàn)參考值和本室歷史背景資料范圍，且無明顯劑量反應(yīng)關(guān)系，故無生物學(xué)和毒理學(xué)意義。給藥末期其余各項(xiàng)血清生化學(xué)檢測(cè)指標(biāo)未見明顯異常，組間比較無顯著性差異(P＞0.05)，僅見完整皮膚試驗(yàn)組動(dòng)物血清總蛋白(TP)略有升高，以球蛋白為主。

以上實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，家兔皮膚給予荷芩止癢搽劑1.5g·mL-1·kg-1·bw-1，折合原藥材3.0g·kg-1·bw-1，相當(dāng)于成人臨床擬用最大藥量20 倍以下，對(duì)家兔血清生化學(xué)及電解質(zhì)指標(biāo)無影響。

［1］張毅，杜艾嬡.239 例HIV 感染者并發(fā)皮膚損害分析［J］.實(shí)用皮膚病學(xué)雜志，2010，3(3)：134 -136.

［2］HOLMES R B，MARTINS C，HORN T.The histopathology of folliculitis in HIV-infected patients［J］.J Cutan Patho，2002，(29)：93 -95.

［3］潘菊華，王階，黃世敬.基于專家問卷的艾滋病皮膚瘙癢性病變中醫(yī)診療規(guī)程研究［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013：33(7)：890 -895.

［4］閆磊，郭會(huì)軍.艾滋病皮膚瘙癢癥發(fā)病機(jī)制探析［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2012，39(3)：562 -563.

［5］趙景云，馬克堅(jiān)，方路，等.HIV/AIDS 皮膚瘙癢癥相關(guān)性問題簡(jiǎn)述［J］.云南中醫(yī)中藥雜志，2009，30(12)：83 -84.

［6］林光惠，陳小英.艾滋病患者抗病毒治療不良反應(yīng)的護(hù)理［J］.護(hù)理學(xué)雜志，2008，23(11)：30 -32.

［7］屈文妍，李春梅，閆會(huì)文，等.艾滋病患者抗病毒治療中藥物不良反應(yīng)的觀察與護(hù)理［J］.中華護(hù)理雜志，2007，42(12)：1078 -1080.

［8］中藥、天然藥物長(zhǎng)期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則.編號(hào)：［Z］GPT3 -1.2004.3.18.

［9］袁伯俊，廖明陽，等.藥物毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)［M］.化學(xué)工業(yè)出版社，2007.

［10］郝光榮.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)［M］.第二軍醫(yī)大學(xué)出版社，1991.