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    貴州不同產(chǎn)地民族藥紫金蓮質(zhì)量比較研究

    2015-07-12 09:05:46喻懋國
    中國民族醫(yī)藥雜志 2015年4期
    關鍵詞:金蓮白花薄層

    趙 海 喻懋國 李 平*

    (1.貴陽中醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院,貴州 貴陽 550003; 2.貴州景誠制藥有限公司,貴州 修文 550200)

    紫金蓮為藍雪科植物紫金蓮Ceratostigma willmottianum Stapf 的干燥根。主要分布于貴州貴陽、畢節(jié)、水城等地[1],為貴州少數(shù)民族地方用藥。收載于《貴州省中藥、民族藥材質(zhì)量標準》(2003年版),原標準項下僅有外觀性狀鑒別和顯色反應鑒別項[2]。我們對不同產(chǎn)地(畢節(jié)、水城、六枝)紫金蓮的外觀性狀、顯微鑒別、薄層鑒別、浸出物、總黃酮及白花丹醌含量測定研究分析,報道如下。

    1 藥材來源

    藥材采自水城、六枝、畢節(jié)地區(qū),經(jīng)貴州省藥檢所中藥室林開忠教授鑒定為藍雪科植物紫金蓮Ceratostigma willmottianum Stapf 的干燥根。

    2 儀器與試藥

    高效液相色譜儀(日本島津/LC -20AT);紫外分光光度計UV 1801(上海美析儀器有限公司);AL204 電子天平型(梅特勒-托利多);XSP -8CC 顯微鏡(上海蔡康);ZF-2 型三用紫外儀。

    無水蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110731 -201004,供含量測定用);白花丹醌對照品(進口,批號:20140132,經(jīng)歸一化法測定其純度達99.5%);紫金蓮對照藥材(中國藥品生物制品檢定所,批號:120965 -200703,供薄層鑒別用);槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號100081 -200406:,供含量測定用);甲醇為色譜純;其余試劑為分析純;水為超純水。

    3 性狀

    均符合《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準》(2003年版)標準項目。根莖短,結節(jié)狀,具支根多條;粗根呈圓柱形,彎曲,偶見扭曲,長10 ~20cm,直徑0.4 ~0.8cm 或更粗。表面淡褐色至深褐色或棕紫色。上部具側(cè)枝莖痕,兩莖痕間有微曲細縱紋,并有小圓點狀細根痕散在。質(zhì)脆,易折斷,斷面纖維狀,淺紅色或淡藍色,中心髓部約占直徑的1/3,淺褐色。氣微香,味甘、淡。

    4 鑒別

    4.1 顯微鑒別:橫斷面:木栓層為數(shù)列細胞,呈淡黃色。韌皮部較寬,薄壁細胞內(nèi)側(cè)有多量的纖維細胞,能見形成層環(huán)。木質(zhì)部的射線明顯,射線之間有導管和空腔呈放射性排列。粉末:呈橙黃色,方晶散在或存于晶鞘纖維中,多見網(wǎng)紋導管。淀粉粒呈星狀,復粒較少,木栓細胞排列緊密。各產(chǎn)地紫金蓮顯微鑒別沒有明顯區(qū)別。

    4.2 薄層鑒別

    4.2.1 取本品粉末(過三號篩)1g,加乙醚15mL,浸漬1h,時時振搖,濾過,濾液室溫揮盡乙醚,殘渣加甲醇0.5mL 使溶解,作為供試品溶液。另取紫金蓮對照藥材1g,加乙醚10mL,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》一部ⅥB)試驗,吸取上述2 種溶液各10μL,分別點于同一硅膠G 薄層板上,以氯仿-甲醇(9:1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以1%氫氧化鉀乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的主斑點。

    表1

    4.2.2 取本品粉末5g,加甲醇-水(1:1)60mL,加熱回流1h,趁熱濾過,濾液濃縮至約30mL 后,加5% 硫酸溶液2mL,回流1.5h 后,用醋酸乙酯振搖提取2 次,每次25mL,合并醋酸乙酯液,濃縮至約1mL,作為供試品。另取槲皮素對照品,加醋酸乙酯溶解,制成每1mL 含0.5mg 的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIB)試驗,吸取上述兩種溶液各5 ~10μL,分別點于硅膠G 薄層板上,以甲苯(水飽和)-甲酸乙酯-甲酸(5:4:1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%的三氯化鋁的乙醇溶液,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品相應的位置上顯相同顏色的斑點。

    表2

    5 浸出物

    參考《中國藥典》2010年版一部附錄X A 浸出物測定法項下水溶性浸出物測定法中的熱浸法測定。實測樣品3批,結果見表1。

    6 總黃酮含量測定

    6.1 對照品溶液的制備:精密稱取無水蘆丁對照品50mg(49.86mg),置50mL 量瓶中,加60%乙醇35mL,微熱使溶解,放冷,用60%乙醇稀釋至刻度,搖勻,精密量取10mL,置50mL 量瓶中,加水至刻度,搖勻,既得(每1mL 中含無水蘆丁0.19976mg)。

    6.2 標準曲線的繪制:精密量取對照品溶液1mL、2mL、3mL、4 mL、5 mL、6 mL,分別置25mL 量瓶中,加水至6 mL,加5%亞硝酸鈉溶液1 mL,混勻,放置6min,加10%硝酸鉛溶液1 mL,搖勻,放置6min,加氫氧化鈉試液10 mL,再加水至刻度,搖勻,放置15 分鐘,以相應的試劑作空白,找紫外-可見分光光度發(fā)附錄(V A),在500nm 波長處測定吸光度,以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。

    6.3 測定法:取供試品粉末(過三號篩)0.5g,精密稱定,置錐形瓶中,加60%乙醇100mL,稱定重量,加熱回流2 小時,放冷,稱定重量,用60%乙醇補足重量,過濾,精密吸取續(xù)濾液5 mL,置25 mL 量瓶中,照標準曲線制備項下的方法,自“加水至6 mL”起,依法操作,另精密吸取續(xù)濾液5mL,加水稀釋至25mL,搖勻,作空白,依法測定吸光度,從標準曲線上讀出供試品中無水蘆丁的重量,計算,即得。

    6.4 樣品測定 結果見表1。

    7 白花丹醌含量測定[3]

    7.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:色譜柱:Diamonsil C18柱(200 ×4.6mm 5μm);流動相:甲醇-水(75:25);檢測波長:265nm;流速:1.0mL·min-1,理論板數(shù)按白花丹醌(C11H8O3)峰計算,不低于5000。

    7.2 對照品溶液制備:取白花丹醌對照品適量,精密稱定,加甲醇制成每1mL 含15μg 的對照品溶液(濃度:14.96μg/mL)。

    7.3 供試品溶液制備:精密稱取本品0.1g,置具塞錐形瓶中,精密加甲醇50mL,稱定重量,超聲30 min,放置至室溫,過濾,取續(xù)濾液,即得。

    7.4 測定法:按照上述色譜條件,取對照品溶液和供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀,測定,即得。

    7.5 樣品測定:結果見表1。

    表1 樣品水溶性浸出物、總黃酮、白花丹醌含量測定值(n=3)

    8 結果與討論

    紫金蓮為貴州少數(shù)民族習用藥材,苗藥名“紫金標”“包家利幼”,苗族常用于治療跌打損傷,用時多以根或根莖煎水服用。貴州還開發(fā)出有以此為主藥的復方中藥制劑。本文對不同產(chǎn)地的紫金蓮進行質(zhì)量分析和評價,結果表明:各產(chǎn)地紫金蓮性狀均與《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準》(2003年版)標準描述相符;各產(chǎn)地顯微鑒別沒有明顯區(qū)別;薄層色譜結果顯色斑點清晰、分離效果好、專屬性強,各產(chǎn)地藥材斑點大小顏色略有不同;水溶性浸出物含量在15.1% ~17.4%之間;總黃酮含量以無水蘆丁(C27H30O16)計在2.36% ~2.95%之間。

    王愛民等建立的HPLC 法測定紫金蓮中白花丹醌含量、,測定了貴州貴陽及周邊縣市(修文、清鎮(zhèn))的含量分別為0.342%,0.262%,0.204%[1]。此次我們選擇水城、六枝、畢節(jié)3 地3 批樣品的測定均值分別為0.627%,0.779%,0.340%,可見各產(chǎn)地各紫金蓮白花丹醌含量有一定差異,六枝、水城含量較貴陽、畢節(jié)高,質(zhì)量較優(yōu)。

    [1]貴州省中藥資源普查辦公室,貴州省中藥研究所.貴州中藥資源[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1992:790.

    [2]貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準[S].貴州:貴州科技出版社,2003:369.

    [3]王愛民,王永林,李勇軍,等.紫金蓮藥材的質(zhì)量控制方法的研究[J].中國中藥雜志,2008(9):2130 -2132.

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