T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其臨床意義

邸曼,陳必良,陳良鳳,張千峰,周卓

(西京醫(yī)院 婦產(chǎn)科，陜西 西安 710032)

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T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其臨床意義

邸曼,陳必良Δ,陳良鳳,張千峰,周卓

(西京醫(yī)院 婦產(chǎn)科，陜西 西安 710032)

目的 探討T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法 選取西京醫(yī)院從2012年1月～2014年1月獲得的30例上皮性卵巢癌和5例正常卵巢組織標(biāo)本，應(yīng)用免疫組化SABC法檢測比較標(biāo)本中T-Synthase及Tn、s-Tn抗原的表達(dá)情況。結(jié)果 T-Synthase在正常卵巢組織中的表達(dá)陽性率為100.00%，而在上皮性卵巢癌組織中只有6.67%，2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Tn抗原在正常卵巢組織中的表達(dá)陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有83.33%，2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。s-Tn抗原在正常卵巢組織中的表達(dá)陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有96.67%，2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 T-Synthase活性降低使Tn、s-Tn在卵巢癌組織中存在異常表達(dá)，T-Synthase、Tn、s-Tn腫瘤相關(guān)抗原在卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。

上皮性卵巢癌；T-Synthase；Tn；s-Tn

卵巢腫瘤是女性生殖器常見的3大惡性腫瘤之一。由于缺乏早期診斷，卵巢惡性腫瘤死亡率居?jì)D科惡性腫瘤首位，而上皮性卵巢癌占卵巢惡性腫瘤的85%～90%，好發(fā)于50～60歲婦女[1]。目前，上皮性卵巢癌發(fā)病率逐漸攀升，這就要求提高篩選力度，在早期檢測出上皮性卵巢癌患者，為患者制定合理的治療方案，更好的對患者的預(yù)后進(jìn)行評價(jià)。腫瘤的發(fā)生涉及的病理生理反應(yīng)較為復(fù)雜，其細(xì)胞的異常增殖、黏附、運(yùn)動，細(xì)胞外基質(zhì)降解，血管生成是目前研究的熱點(diǎn)[2]。在腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)，Tn和STn在上皮性卵巢癌中表達(dá)[3]，但在正常的組織中不表達(dá)或表達(dá)很少。遺傳學(xué)證據(jù)顯示，Tn和STn的高表達(dá)是由于伴侶分子Cosmc基因突變導(dǎo)致其功能喪失[4-5]，最終使T-Synthase失活[6]。T-Synthase及Tn、s-Tn抗原可以作為人類癌癥新的分子標(biāo)志物，而Tn和s-Tn抗原以及Cosmc基因也將成為治療腫瘤的新靶點(diǎn)[7]。本研究旨在通過應(yīng)用免疫組化SABC法，研究T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的表達(dá)情況，為臨床提供診斷、治療及預(yù)后評價(jià)提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 標(biāo)本來源于西京醫(yī)院從2012年1月～2014年1月收治進(jìn)行手術(shù)切除，術(shù)后病理檢查確診的原發(fā)性上皮性卵巢癌患者30例，平均年齡(52.00±10.56)歲?；颊咴谑中g(shù)前，均無放化療和免疫治療病史，無癌癥家族史，無煙酒毒物接觸史。按照世界衛(wèi)生組織(WHO)1998 年卵巢腫瘤組織學(xué)分類法，其中漿液性囊腺癌14例，粘液性囊腺癌16例。按照國際婦科聯(lián)盟(FIGO)2013年的分期標(biāo)準(zhǔn)，30例上皮性卵巢癌患者中Ⅰ期6例，Ⅱ期10例，Ⅲ期12例，Ⅳ期2例。并取得同期引起他良性疾病而手術(shù)切除的正常卵巢組織5例，平均年齡(52.20±8.77)歲。 本研究征得患者同意，并簽署知情同意書，并得到本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑 免疫組化試劑：兔抗人C1GALT1(bs-9685R，1:200)單克隆抗體、兔抗人Tenascin c(bs-1039R，1:200)單克隆抗體均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，鼠抗人TAG72單克隆抗體(ab16838，1:100，英國艾美捷科技有限公司)，SABC法免疫組織化學(xué)試劑盒(KIT-5020 羊抗鼠/兔，福州邁新生物技術(shù)有限公司)、檸檬酸鹽修復(fù)液(0.01 mol M，pH6.0，方法為檸檬酸0.4g，檸檬酸鈉或者檸檬酸三鈉3 g，加蒸餾水至1000 mL即可，此時(shí)液體的pH值正好是6.0，自配)，PBS(磷酸鹽緩沖液pH7.2～pH7.4 自配)，3%H2O2(以PBS緩沖液配置)，濃縮型DAB試劑盒(天津?yàn)柹镏破酚邢薰?，HE染色試劑盒、Mayer蘇木素均購自鄭州唯爾生物科技有限公司。

1.3 方法 石蠟切片采用HE染色，免疫組化采用SABC法，嚴(yán)格參照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 評價(jià)方法 對于病例切片的讀取，采用2位富有經(jīng)驗(yàn)的病例醫(yī)師進(jìn)行讀片，T-Synthase及Tn、s-Tn抗原檢測陽性標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞膜呈染色為黃色或棕黃色染色。評價(jià)方法參照Sulzers分級法進(jìn)行評價(jià)[9-10]，依據(jù)切片著色強(qiáng)度分為4級：棕褐色陽性顆粒定為3分；棕黃色陽性顆粒定為2分；淺黃色陽性顆粒定為1分；無陽性著色定為0分。依照著色范圍分為4級：Ⅳ級是陽性細(xì)胞率≥51%定為3分；Ⅲ級是陽性細(xì)胞率定為26%～50%定為2分；Ⅱ級是陽性細(xì)胞率≤25%定為1分；Ⅰ級是無陽性細(xì)胞著色定為0分。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野，分別計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞的陽性率，求其平均值。切片染色結(jié)果結(jié)果評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為著色強(qiáng)度評分與著色范圍評分之積：0分定為陰性(-)；1～2分定為陽性(+)；3～6分定為中度陽性(++)；7～9分定為強(qiáng)陽性(+++)。在分析結(jié)果時(shí)，<6分定為陰性，≥6分定為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用軟件SPSS17.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料率的比較采用Fisher確切概率法，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 T-Synthase在正常卵巢組織及上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)情況 T-Synthase在正常卵巢組織中大部分(80.00%)高水平表達(dá)，呈強(qiáng)陽性，而在上皮性卵巢癌組織中只有較少部分(6.67%)低水平表達(dá)，呈弱陽性。T-Synthase在正常卵巢組織中的表達(dá)陽性率為100.00%，而在上皮性卵巢癌組織中只有6.67%，2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1、表1。

圖1 T-Synthase在正常卵巢組織和T-Synthase在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)(SP，×400)Fig.1 T-Synthase expression in normal ovarian tissue and epithelial ovarian cancer (SP,×400)

組別例數(shù)T-Synthase[n(%)]-+++/+++陽性率(%)正常卵巢組織50(0.00)1(20.00)4(80.00)100.00上皮性卵巢癌組織3028(93.33)2(6.67)0(0.00)6.67*

*P<0.05，與正常卵巢組織比較，compared with normal ovarian tissues

2.2 Tn抗原在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌中的表達(dá)情況 Tn抗原在正常卵巢組織中小部分(20.00%)低水平表達(dá)，呈弱陽性，大部分為表達(dá)情況為陰性(80.00%)，而在上皮性卵巢癌組織中只有大部分(63.33%)高水平表達(dá)，呈強(qiáng)陽性。Tn抗原在正常卵巢組織中的表達(dá)陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有83.33%，2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖2、表2。

圖2 Tn抗原在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)(SP，×400)Fig.2 Tn antigen expression in normal ovarian tissue and epithelial ovarian cancer(SP,×400)

組別例數(shù)Tn抗原[n(%)]-+++/+++陽性率(%)正常卵巢組織54(80.00)1(20.00)0(0.00)20.00上皮性卵巢癌組織305(16.67)6(20.00)19(63.33)83.33*

*P<0.05，與正常卵巢組織比較，compared with normal ovarian tissues

2.3 s-Tn抗原在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌中的表達(dá)情況 s-Tn抗原在正常卵巢組織中小部分(20.00%)低水平表達(dá)，呈弱陽性，大部分為表達(dá)情況為陰性(80.00%)，而在上皮性卵巢癌組織中只有大部分(86.67%)高水平表達(dá)，呈強(qiáng)陽性。s-Tn抗原在正常卵巢組織中的表達(dá)陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有96.67%，2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖3、表3。

圖3 s-Tn抗原在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)(SP，×400)Fig.3 s-Tn antigen expressions in normal ovarian tissue and epithelial ovarian cancer(SP,×400)

組別例數(shù)s-Tn抗原[n(%)]-+++/+++陽性率(%)正常卵巢組織54(80.00)1(20.00)0(0.00)20.00上皮性卵巢癌組織301(3.33)3(10.00)26(86.67)96.67*

*P<0.05，與正常卵巢組織比較，compared with normal ovarian tissues

3 討論

尋找腫瘤相關(guān)的特異性標(biāo)志物是目前針對腫瘤的診斷和治療的研究方向之一。CA72-4、AFP、CA199、CA125、CEA、CA15-3等許多的腫瘤標(biāo)志物已被臨床獲得廣泛的應(yīng)用[11]，但是它們的特異性和靈敏度還不夠高，所以科研人員和醫(yī)務(wù)人員都在不斷的尋找新的腫瘤標(biāo)志物， 上皮性卵巢癌的在這方面更是如此[12]。同樣在治療方面，也迫切找到在上皮性卵巢癌組織中具有特異性的靶點(diǎn)。T-Synthase是合成核心1結(jié)構(gòu)必須且唯一的糖基轉(zhuǎn)移酶，而在人體許多生理過程中起到至關(guān)重要的生物學(xué)功能的物質(zhì)粘蛋白型O-聚糖就是從核心1結(jié)構(gòu)的一種衍生物T-Synthase的主要功能是把半乳糖添加到GalNAcal-Ser/Tn抗原的糖鏈上。人體中形成有活性的T-Synthase必須有一個(gè)重要的分子伴侶Cosmc的參加，而在很多腫瘤如胃癌、肺腺癌、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌中Cosmc基因都發(fā)生了突變，最終造成當(dāng)Cosmc的功能喪失，這樣將會直接造成T-Synthase的合成障礙或活性減低，甚至失活，最終會造成組織細(xì)胞僅能合成Tn抗原和s-Tn[7，13-15]。

通過本實(shí)驗(yàn)得出T-Synthase在正常卵巢組織中的表達(dá)陽性率為100.00%，而在上皮性卵巢癌組織中只有6.67%，2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這說明T-Synthase在正常卵巢組織中的表達(dá)較上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)陽性率較高，T-Synthase主要在正常卵巢組織中表達(dá)，而在上皮性卵巢癌組織中幾乎不表達(dá)；T-Synthase在正常卵巢組織中大部分(80.00%)高水平表達(dá)，呈強(qiáng)陽性，而在上皮性卵巢癌組織中只有較少部分(6.67%)低水平表達(dá)，呈弱陽性，這說明T -Synthase在正常卵巢組織中表達(dá)一般為高水平，而在上皮性卵巢癌組織中即使有少數(shù)表達(dá)也為低水平。Tn抗原在正常卵巢組織中的表達(dá)陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有83.33%，2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Tn抗原主要在上皮性卵巢癌組織中表達(dá)，而在正常卵巢組織中幾乎不表達(dá)；Tn抗原在正常卵巢組織中小部分(20.00%)低水平表達(dá)，呈弱陽性，大部分為表達(dá)情況為陰性(80.00%)，而在上皮性卵巢癌組織中只有大部分(63.33%)高水平表達(dá)，呈強(qiáng)陽性，說明Tn抗原在上皮性卵巢癌組織中表達(dá)一般為高水平，Tn抗原在正常卵巢組織中即使有少數(shù)表達(dá)也為低水平。s-Tn抗原在正常卵巢組織中的表達(dá)陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有96.67%，2組間比較差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這說明s-Tn抗原在主要在上皮性卵巢癌組織中表達(dá)，而在正常卵巢組織中幾乎不表達(dá)；s-Tn抗原在正常卵巢組織中小部分(20.00%)低水平表達(dá)，呈弱陽性，大部分為表達(dá)情況為陰性(80.00%)，而在上皮性卵巢癌組織中只有大部分(86.67%)高水平表達(dá)，呈強(qiáng)陽性，s-Tn抗原在上皮性卵巢癌組織中表達(dá)一般為高水平，Tn抗原在正常卵巢組織中即使有少數(shù)表達(dá)也為低水平。s-Tn抗原在上皮性卵巢癌組織中的廣泛表達(dá)，而在正常卵巢組織中的表達(dá)有限，提示s-Tn與了上皮性卵巢癌的病情演變有重大關(guān)系，且比較有利于區(qū)分正常組織與癌變組織，可作為的標(biāo)志物，在以后的病例診斷中具有巨大的使用價(jià)值，這與國內(nèi)外報(bào)道相符合[16-17]，T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的整體表達(dá)情況說明T-Synthase在正常卵巢組織中含量明顯高于卵巢癌組織，其活性的降低或喪失是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞表達(dá)Tn、s-Tn 抗原的主要原因，其中Tn、s-Tn的表達(dá)量在卵巢癌組織中較正常卵巢組織含量高，且s-Tn比Tn的陽性率和敏感性更高。

綜上所述，本研究確定了T-Synthase、Tn、s-Tn在不同卵巢組織中的表達(dá)情況，說明T-Synthase活性降低使Tn、s-Tn在卵巢癌組織中存在異常表達(dá)，Tn、s-Tn腫瘤相關(guān)抗原在卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。

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(編校：吳茜)

T-Synthase and Tn, s-Tn antigen expression in epithelial ovarian cancer and its clinical significance

DI Man,CHEN Bi-liangΔ,CHEN Liang-feng,ZHANG Qian-feng,ZHOU Zhuo

(Department of Gynaecology and Obstetrics, Xijing Hospital, Xi′an 710032, China)

ObjectiveTo study the expression and clinical significance of T-Synthase and Tn,s-Tn antigens in epithelial ovarian tumor.MethodsSamples of 30 patients with epithelial ovarian cancer and 5 patients with normal ovarian tissue were collected from Xijing hospital from January 2012 to January 2014, the expression of T-Synthase and Tn,s-Tn antigens in each groups were detected by SABC immunohistochemistry in histological section and compared.ResultsThe expression positive rate of T-Synthase in normal ovarian tissues was 100.00%, while in epithelial ovarian cancer tissues was 6.67%, the difference was statistical significant (P<0.05).The expression positive rate of Tn antigen in normal ovarian tissues was 20.00%, while in epithelial ovarian cancer tissues was 83.33%, the difference was statistical significant (P<0.05).The expression positive rate of s-Tn antigen in normal ovarian tissues was 20.00%, while in epithelial ovarian cancer tissues was 96.67%, the difference was statistical significant (P< 0.05). ConclusionThe decreased activity of T-Synthase will lead to the abnormal expression of Tn and s-Tn in ovarian cancer tissue.The tumor associated antigen of T-Synthase,Tn and s-Tn plays an important role in the occurrence and development of ovarian carcinoma.

epithelial ovarian cancer; T-Synthase; Tn; s-Tn

邸曼，女，碩士在讀，研究方向：婦科腫瘤，E-mail：446277270@qq.com；陳必良，通訊作者，男，主任醫(yī)師，研究方向：圍生醫(yī)學(xué)與婦科腫瘤，E-mail：cblxjh@fmmu.edu.cn。

R737.31

A

1005-1678(2015)01-0091-04