頭穴叢刺對老年性癡呆大鼠學習記憶能力的影響*

李虹霖，孫興華，李 默△，徐 飛，張 淼

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱150001;2.黑龍江省醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱150036)

老年性癡呆以記憶力減退、認知障礙、性格改變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)［1］，是一種慢性進行性神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾?。?］，目前對于老年性癡呆的病理機制及治療方法的研究是醫(yī)學界的熱點問題，筆者在以往的研究中證實了頭穴叢刺提高患者的認知能力、有效降低Tau 蛋白與Hcy 水平［3］。本研究進一步從基礎研究入手，觀察頭穴叢刺對老年性癡呆大鼠學習記憶能力的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康雄性Wistar 大鼠48 只［許可證號:SCXK(黑)2008001］，體重250 ～300 g，普通環(huán)境喂養(yǎng)，自由進食、飲水。按照隨機數(shù)字表將其隨機平衡分組為4組:假手術(shù)組、模型組、治療組、對照組，每組各12 只。

1.2 實驗儀器和試劑

DW-5 大鼠腦立體定位儀(成都泰盟科技有限公司);5 μL 微量進樣器(上海安亭進樣器廠);SAESHIN 90 + 102 電 動 牙 科 鉆(Saeshin PrecisionCo. Ltd);WMT-100 Morris 水迷宮視頻分析系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司);試劑淀粉樣蛋白片段(Aβ1-42)(美國Sigma 公司)

1.3 實驗方法

1.3.1 模型制備 2%戊巴比妥鈉(50 mg/kg)腹腔注射麻醉，將大鼠固定在腦立體定位儀上;將大鼠頭部上方皮膚沿中線剪開，暴露顱骨;確定前囟位點并標記，從前囟位點向后(枕骨方向)3. 6 mm，旁開2.2 mm，用7 號針頭鉆孔;用微量進樣器自顱骨表面垂直進針4 mm，每側(cè)注射200 μM 的Aβ1-42 寡聚體5 μL，雙側(cè)海馬區(qū)注射，每側(cè)海馬注射10 min，留針10 min;注射完畢后清創(chuàng)縫合并涂少量青霉素粉劑，以防感染［4］。

1.3.2 假手術(shù)組 僅向CA1 區(qū)注射等量生理鹽水而不注射Aβ1-42 寡聚體。所有操作均在無菌條件下進行，術(shù)后操作同模型組。

1.3.3 對照組 造模2 天后給予頭穴叢刺干預治療，按照“大鼠穴位圖譜”所示，用0.35 mm ×15 mm 毫針，針刺雙側(cè)腎俞穴、足三里穴，腎俞穴稍向內(nèi)斜刺5 mm，足三里直刺10 mm，采用平補平瀉手法，快速捻轉(zhuǎn)1 min 后留針30 min。每日1 次，6 天為1 個療程，間隔1 天，治療4 個療程。

1.3.4 治療組 采用于致順頭部腧穴七區(qū)劃分法，取頂區(qū)、頂前區(qū)、額區(qū)，常規(guī)消毒，用0.35 mm×15 mm 毫針，取神庭穴、百會穴、前頂穴及這三穴左、右側(cè)各旁開5 mm 處沿皮分別刺入2 mm，快速捻轉(zhuǎn)1 min 后留針2 h，6 天為1 個療程，間隔1 天，治療4 個療程。

1.4 行為學檢測

Morris 水迷宮實驗［5］針刺結(jié)束后第2 天開始，歷時5 天。

1.4.1 定位航行實驗 每天于固定時段進行(以排除光照等因素的干擾)，每個時段4 次，分別將大鼠從4 個不同的起始點，即各象限邊緣1/2 弧度處，頭朝池壁按順時針方向依次放入水中。自動錄像系統(tǒng)記錄大鼠找到平臺后四肢爬上平臺所需的時間(逃避潛伏期)，如果大鼠在90 s 內(nèi)找到平臺，記錄其實際逃避潛伏期;如果在90 s 仍未找到平臺，則將其引上平臺并停留15 s，逃避潛伏期記錄為90 s。逃避潛伏期長短表示其學習記憶能力，數(shù)據(jù)采集和處理由Morris 水迷宮圖像處理系統(tǒng)完成。

1.4.2 空間探索實驗 空間探索實驗用于檢測大鼠學會尋找平臺后，保持對平臺空間位置記憶的能力。在第5 天的最后1 次定位航行實驗后去除平臺，然后將各組大鼠于平臺對面象限同一入水點放入水池中，記錄大鼠在90 s 內(nèi)在原平臺所在象限內(nèi)的停留時間及跨越原平臺位置的次數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用SPSS20.0 統(tǒng)計軟件作統(tǒng)計學處理，，逃避潛伏期采用重復測量數(shù)據(jù)的方差分析，空間探索實驗中組間比較采用單因素方差分析。數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(± s)形式表示。以P ≤0. 05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 定位航行實驗結(jié)果

表1 各組逃避潛伏期時間比較(s)

由表1 可見，第1 天各組間比較逃避潛伏期均無顯著性差異;第2 天開始，治療組、對照組與模型組相比，具有極顯著性差異(P ＜0.01)，模型組與假手術(shù)組相比無顯著性差異(P ＞0.05)，治療組與對照組相比，具有極顯著性差異(P ＜0.01);第3 天趨勢同第2 天;第4 天，各組與模型組相比，均具有極顯著性差異(P ＜0.01)，治療組與假手術(shù)組相比具有極顯著性差異(P ＜0.01)，對照組與假手術(shù)組相比具有顯著性差異(P ＜0.05)，治療組與對照組相比，具有顯著性差異(P ＜0.05);第5 天，各組與模型組相比均具有極顯著性差異(P ＜0.01)，治療組與假手術(shù)組相比，具有顯著性差異(P ＜0.05)，對照組與假手術(shù)組相比無顯著性差異(P ＞0.05)，治療組與對照組相比無顯著性差異(P ＞0.05)。說明治療組與對照組從第2 天開始大鼠學習能力均有所提高，治療組學習能力提高較明顯。

2.2 空間探索實驗結(jié)果

表2 各組第2 象限時間百分比與穿越次數(shù)比較

由表2 可見，第2 象限時間百分比中各組與模型組相比具有顯著性差異(P ＜0.05 或P ＜0.01)，治療組與對照組相比有顯著性差異(P ＜0.05);穿越次數(shù)中，各組與模型組相比，均具有極顯著性差異(P ＜0.01)，治療組與對照組相比，無顯著性差異(P ＞0.05)。說明治療組、對照組大鼠的記憶能力與模型組比較均有顯著提高，治療組記憶的保持能力優(yōu)于對照組。

3 討論

于氏頭針［6-7］是由于志順教授根據(jù)多年的研究結(jié)果并結(jié)合腦的功能及古人的經(jīng)驗創(chuàng)立的，分為七區(qū)，其中的額區(qū)主要調(diào)節(jié)情志，頂區(qū)主要用于運動障礙、感覺障礙等。頂前區(qū)主要應用于運動障礙、植物神經(jīng)功能障礙等，在長期的臨床實踐中，也證實了于氏頭針對于AD 患者的行為認知能力治療的有效性［3］，Morris 水迷宮行為學測試中定位航行實驗與空間搜索實驗成績分別反映動物的學習記憶能力和記憶保持能力，通過本課題的研究，進一步證實了針刺可以有效縮短大鼠的逃避潛伏期，其中頭穴叢刺效果優(yōu)于對照組。說明了頭穴叢刺能夠改善大鼠學習記憶能力，提高大鼠記憶保持能力。

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