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    針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)寒凝血瘀型子宮內(nèi)膜異位癥大鼠的鎮(zhèn)痛作用研究*

    2015-07-11 03:23:20楊東霞周忠光胡妮娜李紅梅王曉濱李冬梅吳修紅
    針灸臨床雜志 2015年4期
    關(guān)鍵詞:扭體針?biāo)?/a>宮素

    楊東霞,周忠光,胡妮娜,李紅梅,王曉濱,李冬梅,侯 琳,吳修紅△

    (1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱150001;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江 哈爾濱150040)

    子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)是臨床上的常見病及疑難病,該病迫使患者就醫(yī)的主要原因是疼痛、不孕等癥狀。EMs 導(dǎo)致的疼痛可表現(xiàn)為痛經(jīng)、持續(xù)的下腹疼痛及性交痛等,疼痛嚴(yán)重時(shí)需口服止痛藥甚至鎮(zhèn)痛藥,但是由于反復(fù)長(zhǎng)期的服用去痛片、芬必得、強(qiáng)痛定等藥物造成依賴性及耐藥性,使患者的身心都受到嚴(yán)重的損害。中藥復(fù)方少腹逐瘀湯具有溫經(jīng)止痛、活血化瘀之功,對(duì)于由EMs 起的疼痛具有明顯的效果,針灸具有調(diào)暢經(jīng)絡(luò)、止痛之功,兩者相結(jié)合在臨床治療EMs 能明顯提高療效。本研究對(duì)針?biāo)幗Y(jié)合治療的效果進(jìn)行初步的研究,現(xiàn)介紹如下。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 主要儀器

    SN-695 B 型智能放免Y 測(cè)量?jī)x(上海原子核研究所日環(huán)光電儀器有限公司,中國(guó));Acculab 電子天平(賽多利斯艾科勒,德國(guó));Thermo Scientific Forma 995 超低溫冰箱超低溫冰箱(賽默飛世爾科技,美國(guó));KDC-40 低速離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司,中國(guó))。

    1.2 主要試劑

    TXB2放免試劑盒(北京市福瑞生物工程公司,批號(hào)20140225);6-KeTo-PGF1α 放免試劑盒(北京市福瑞生物工程公司,批號(hào)20140225)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)藥物

    達(dá)那唑(江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司,批號(hào)20140702);苯甲酸雌二醇注射液(寧波第二激素廠,批號(hào)140218);縮宮素針劑(上海子能制藥有限公司,批號(hào):130708)。

    取處方量少腹逐瘀湯:按當(dāng)歸9 g、川芎3 g、赤芍6 g、蒲黃9 g、肉桂3 g、小茴香1.5 g、五靈脂6 g、沒藥3 g、干姜3 g、延胡索3 g 配方比例組成藥物(上述藥物均購(gòu)自于北京同仁堂哈爾濱藥店),共計(jì)930 g,水煎、過濾、濃縮至每毫升含生藥8 mg,混懸液。均于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    清潔級(jí)雌性的SD 大鼠(未交配過),8 ~12 周鼠齡,體重(200 ±20)g。由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào):SCXK 黑2008004,質(zhì)量合格證號(hào):20120059。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)大鼠縮宮素誘發(fā)正常大鼠疼痛影響實(shí)驗(yàn)方法

    模型制備:40 只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、阿司匹林組、少腹逐瘀湯(SFZYT)組和針?biāo)幗Y(jié)合組。除正常對(duì)照組外,其余各組大鼠連續(xù)皮下注射苯甲酸雌二醇7 天(0.1 ml/只)。給藥方法:少腹逐瘀湯給予相當(dāng)于生藥量4.2 g/(kg·d)灌胃,每日1 次;阿司匹林給予0.2 g/kg 灌胃,日1 次,在注射苯甲酸雌二醇的第5 日開始給藥,連續(xù)給藥7 天;針刺方法:取穴根據(jù)大鼠形態(tài)、解剖、生理特點(diǎn),參照林文注主編《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[1]穴位標(biāo)準(zhǔn)定位,針刺足三里、三陰交、關(guān)元、中極、氣海穴,每日1 次,每次10 min。以上處置連續(xù)3 天。給藥第7 日,末次給藥30 min 后,腹腔注射縮宮素0.2 單位/只,觀察10 min 內(nèi)各組動(dòng)物扭體反應(yīng)次數(shù)。

    2.2 針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)縮宮素誘發(fā)EMs 模型大鼠疼痛影響實(shí)驗(yàn)方法

    模型制備:大鼠陰道涂片、蘇木素-伊紅染色觀察動(dòng)情周期。每天定時(shí)觀察陰道細(xì)胞涂片,選擇動(dòng)情期4 ~5 天,且連續(xù)有2 個(gè)動(dòng)情周期的大鼠,在動(dòng)情周期行造模手術(shù)。大鼠腹腔注射2%戊巴比妥鈉(0.2 mL/100g)麻醉,麻醉生效后,將大鼠固定于操作臺(tái)上,腹部剪毛,碘伏消毒,在無菌條件下開腹,右側(cè)離卵巢0. 5 cm處分離子宮,結(jié)扎后在中間剪取子宮2 cm 左右,剖開子宮剝離子宮內(nèi)膜,剪成4 mm ×4 mm 小塊,分別縫于雙角子宮分叉處、左側(cè)腹膜壁層,結(jié)束后向腹腔內(nèi)注射青霉素鈉生理鹽水溶液,16 萬/kg。絲線分層縫合腹部切口。術(shù)后第1 天肌肉注射青霉素,16 萬/kg,每天1 次,連續(xù)3 天,碘酊涂擦手術(shù)切口。造模后第3 天腹腔注射苯甲酸雌二醇注射用0. 1 mL/d催情,共3 天。將子宮內(nèi)膜異位癥成功造模大鼠于術(shù)后2 周,置于0 ~1℃冰水中10 min,每日1 次,連續(xù)2周,制備寒凝血瘀模型,大鼠出現(xiàn)寒戰(zhàn)、爪尾部紫暗、蜷縮少動(dòng)等癥狀。正常清潔飼養(yǎng)4 周,再次開腹觀察移植物生長(zhǎng)情況,手術(shù)成功的標(biāo)志為:移植物體積增大,出現(xiàn)液體積聚,移植物被結(jié)締組織或大網(wǎng)膜覆蓋,并有血管形成,同時(shí)取移植物送病檢證實(shí)內(nèi)膜成活。

    將造模成功者隨機(jī)分為4 組,每組10 只:模型組、針?biāo)幗Y(jié)合組、SFZYT 組、達(dá)那唑?qū)φ战M。給藥方法:少腹逐瘀湯給予相當(dāng)于生藥量4.2 g/(kg·d)灌胃,每日1 次;達(dá)那唑0.036 g/kg 灌胃,日1 次;針刺方法:同2.1項(xiàng)針刺方法;以上處置連續(xù)4 周。在給予治療第4周的第1 天開始,除正常對(duì)照組外,其余各組大鼠連續(xù)皮下注射苯甲酸雌二醇7 天(0.1 ml/只)。末次給藥及針灸30 min 后,給予腹腔注射縮宮素每只大鼠4.5單位,即刻使用秒表記錄大鼠疼痛出現(xiàn)的時(shí)間、5 min之內(nèi)的扭體次數(shù)、5 ~10 min 內(nèi)的扭體次數(shù)。

    2.3 針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)EMs 大鼠血漿TXB2 和6-KeTo-PGF1α 的水平影響實(shí)驗(yàn)方法

    造模方法及分組情況同2.2 項(xiàng),連續(xù)給藥4 周,不給予大鼠連續(xù)皮下注射苯甲酸雌二醇。末次給藥及針刺30 min 后,大鼠腹腔注射2%戊巴比妥鈉(0.2 ml/100 g)麻醉,腹主動(dòng)脈取血3 ml,3000 rpm 離心10 min分離取血漿,放免法測(cè)定TXB2和6- KeTo- PGF1α的含量。

    2.4 數(shù)據(jù)處理

    3 結(jié)果

    3.1 針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)大鼠縮宮素所致疼痛的影響

    與模型組相比,阿司匹林組、少腹逐瘀湯組及針?biāo)幗Y(jié)合組均能顯著抑制縮宮素所致大鼠扭體次數(shù)(P <0.05);與少腹逐瘀湯組相比,針?biāo)幗Y(jié)合治療后大鼠扭體次數(shù)顯著降低(P <0.05)。結(jié)果見表1。

    表1 針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)縮宮素所致大鼠疼痛的影響

    3.2 針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)縮宮素誘發(fā)EMs 模型大鼠子宮收縮所致疼痛的作用

    與模型組相比,達(dá)那唑組、少腹逐瘀湯組及針?biāo)幗Y(jié)合組均能顯著抑制縮宮素誘發(fā)的EMs 模型大鼠扭體次數(shù)(P <0.05);與少腹逐瘀湯組相比,針?biāo)幗Y(jié)合治療后大鼠扭體次數(shù)顯著降低(P <0.05)。結(jié)果見表2。

    3.3 針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)EMs 大鼠血漿內(nèi)TXB2 和6-KeTo-PGF1α 的作用

    與正常對(duì)照組相比,模型組血漿內(nèi)TXB2和6-KeTo-PGF1α 都分別具有顯著性差異(P <0.05);與模型組相比,達(dá)那唑組、少腹逐瘀湯組及針?biāo)幗Y(jié)合組均能分別回調(diào)血漿內(nèi)TXB2和6-KeTo-PGF1α 水平,差異具有顯著性(P <0.05);與少腹逐瘀湯組相比,針?biāo)幗Y(jié)合組血漿內(nèi)TXB2水平具有顯著性差異(P <0.05),6-KeTo-PGF1α 水平具有升高趨勢(shì),但差異無顯著性。結(jié)果見表3。

    表2 針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)EMs 模型大鼠縮宮素所致疼痛的影響

    表3 針?biāo)幗Y(jié)合對(duì)EMs 大鼠血漿內(nèi)TXB2和6-KeTo-PGF1α 的影響

    4 討論

    EMs 導(dǎo)致的疼痛具有得熱痛減、遇寒加重的特征,中醫(yī)認(rèn)為“寒凝血瘀”是子宮內(nèi)膜異位癥的根本病因。少腹逐瘀湯源于《醫(yī)林改錯(cuò)》具有溫經(jīng)止痛、活血化瘀之功,已有諸多文獻(xiàn)證實(shí)少腹逐瘀湯是治療EMs 的常用有效方劑[2]。針刺具有良好的鎮(zhèn)痛作用,EMs 導(dǎo)致的疼痛主要表現(xiàn)在少腹、胞宮。“經(jīng)脈所過,主治所及”,足三里為陽(yáng)明胃經(jīng)合穴,《四總穴歌》載:“肚腹三里留”,提示了足三里穴與少腹部疼痛密切關(guān)系;三陰交為婦科及血證的要穴,是腎、脾、肝三陰交會(huì)之所,足三陰經(jīng)均循行于少腹,針刺該穴可使少腹及胞宮氣機(jī)調(diào)暢、瘀血得行;關(guān)元穴、氣海穴、中極穴具有培元固本、補(bǔ)益下焦之功。

    子宮內(nèi)膜是合成前列腺素(PGS)的重要部位,血漿PGs 的水平與EMs 痛經(jīng)程度呈正相關(guān)。血栓素A2(TXA2)和前列環(huán)素(PGI2)是一對(duì)PGs 類化合物。TXB2和6-KeTo-PGF1α 是TXA2和PGI2的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物,后兩者均是花生四烯酸的產(chǎn)物,TXA2對(duì)血管收縮及血小板聚集有很強(qiáng)的促進(jìn)作用。PGI2具有舒張血管、抑制血小板聚集則作用,但是TXA 和PGI2的半衰期短,故選用前兩者進(jìn)行研究。已有研究證實(shí)痛經(jīng)模型大鼠存在TXB2和6- KeTo- PGF1α 的代謝失衡,針刺可通過糾正其失衡達(dá)到止痛效果[3]。金某等[4]研究證實(shí)EMs 痛經(jīng)患者的血漿PGs 水平異常,針刺可以升高血漿6-KeTo-PGF1α 的水平,降低PGE2的水平。

    本研究發(fā)現(xiàn)少腹逐瘀湯結(jié)合針刺有明顯的鎮(zhèn)痛作用,可以明顯減低縮宮素誘導(dǎo)的EMs 大鼠扭體次數(shù)。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)針?biāo)幗Y(jié)合可升高6-KeTo-PGF1α 的水平,降低TXB2的水平,提示少腹逐瘀湯結(jié)合針刺減輕EMs 疼痛的機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)兩者的失衡,對(duì)EMs導(dǎo)致疼痛的治療提供了有效依據(jù)。

    [1] 林文注,王佩. 實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M]. 上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1999:285-288

    [2] 洪佩佩,張玲璐.少腹逐瘀湯加減輔治子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)的療效觀察[J].浙江中醫(yī)雜志,2014,49(6):488-489

    [3] 李春華,任曉暄,嵇波,等. 預(yù)先電針對(duì)實(shí)驗(yàn)性類痛經(jīng)模型大鼠血漿血栓素B2及6-酮-前列腺素F1α 的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2012,27(4):1038-1041

    [4] 金亞蓓,孫占玲,金慧芳.耳穴電針治療子宮內(nèi)膜異位癥痛經(jīng)的隨機(jī)對(duì)照研究[J].針刺研究,2009,34(3):188-193

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