規(guī)模豬場斷奶仔豬Ⅰ型鏈球菌感染流行的診斷與防控分析

李淼，馬 攀，柴強強，李潤成

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙410128）

豬鏈球菌根據(jù)莢膜抗原的差異，可分為35個血清型及相當(dāng)數(shù)量無法定型的菌株，其中1、2、7、9型是豬的致病菌[1]，2型最為常見，1、7、9型常有零星發(fā)生。2015年6月衡陽某規(guī)模豬場斷奶仔豬陸續(xù)出現(xiàn)跛行、運動困難，部分仔豬可見關(guān)節(jié)輕微腫大的病例，該豬場在哺乳期僅給14日齡小豬接種了高致病性藍(lán)耳病毒活疫苗、2頭份/頭，其他沒有進(jìn)行任何疫苗接種。該次發(fā)病，總發(fā)病率達(dá)30%左右，使用氟苯尼考藥物治療有一定效果，但死亡率仍然可達(dá)到20%左右。本文對豬場送檢的3頭斷奶仔豬進(jìn)行了解剖，并進(jìn)行了細(xì)菌分離鑒定和藥物敏感性檢測。結(jié)果從送檢豬關(guān)節(jié)分離到大量形態(tài)一致的I型鏈球菌，通過使用敏感藥物結(jié)合一系列綜合性防控措施，控制了豬場疫情。特報告如下：

1 材料與方法

1.1 病料

某規(guī)模豬場送來的3頭發(fā)病典型的斷奶仔豬。

1.2 主要試劑及細(xì)菌培養(yǎng)基

巧克力瓊脂培養(yǎng)基購自鄭州某公司，PCR試劑購自北京天根生化。

1.3 發(fā)病小豬的解剖

將發(fā)病小豬前腔靜脈放血處死，進(jìn)行解剖、觀察各臟器及關(guān)節(jié)的情況。

1.4 細(xì)菌分離培養(yǎng)及鑒定

1.4.1 用接種環(huán)鉤取肺臟、脾臟及關(guān)節(jié)腔內(nèi)病變組織少許，分別劃線接種巧克力瓊脂培養(yǎng)基，然后將巧克力瓊脂放于燭缸后37℃培養(yǎng)，48h后觀察結(jié)果，并取培養(yǎng)物涂片革蘭氏染色鏡檢。

1.4.2 培養(yǎng)物的PCR鑒定

（1）根據(jù)GENBANK登錄的鏈球菌CPS基因[2]，分別設(shè)計能特異性擴(kuò)增鏈球菌33個血清型的引物，其中鏈球菌I型的引物資料為：上游引物為：5-TCTTATAACAGGCGTCAAAACA-3；下游引物：5-ATCGGTATAAAAGCAAGACACA-3，擴(kuò)增片段長度為157bp，擴(kuò)增退火溫度為55℃。

（2）以純培養(yǎng)的細(xì)菌為模板，用設(shè)計的鏈球菌分型引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR方法按常規(guī)進(jìn)行。

1.5 分離細(xì)菌的藥物敏感性試驗

從固體培養(yǎng)基上挑取菌落接種血清肉湯培養(yǎng)基37℃震蕩培養(yǎng)24h，然后用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥物敏感性檢測，具體操作按常規(guī)進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 病豬解剖結(jié)果

將發(fā)病小豬前腔靜脈放血處死，進(jìn)行解剖、觀察各臟器及關(guān)節(jié)的情況，主要病理變化：小豬肺臟有輕微實變，心臟衰弱（見圖1），關(guān)節(jié)囊發(fā)膿性炎癥（見圖2）。

圖1 發(fā)病小豬肺臟、心臟

圖2 發(fā)病小豬關(guān)節(jié)

2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果

用病豬肺臟、脾臟、關(guān)節(jié)腔內(nèi)病變組織接種巧克力瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)48h后觀察細(xì)菌生長形態(tài)。結(jié)果僅在關(guān)節(jié)病變組織接種區(qū)長出了純的針尖大小菌落，挑取菌落涂片革蘭氏染色鏡檢，結(jié)果見圖3，由圖3可見分離均為革蘭氏陽性、短鏈狀的球狀細(xì)菌。

圖3 細(xì)菌培養(yǎng)物革蘭氏染色鏡檢結(jié)果

2.3 培養(yǎng)物的鑒定結(jié)果

以純培養(yǎng)的細(xì)菌為模板，用設(shè)計能特異性擴(kuò)增鏈球菌33個血清型的引物用分別進(jìn)行PCR鑒定，結(jié)果僅I型鏈球菌引物擴(kuò)增出了特異性條帶（見圖4）。

圖4 I 型鏈球菌PCR擴(kuò)增結(jié)果

2.4 細(xì)菌藥物敏感性檢測結(jié)果

取分離的細(xì)菌，選用對鏈球菌具有抗菌作用的藥物進(jìn)行敏感性檢測，檢測方法為紙片法（K-B法），具體檢測結(jié)果見表1，有表1可見分離的鏈球菌對β-內(nèi)酰胺類藥、喹諾酮類藥以及多西環(huán)素均比較敏感，但對復(fù)方新諾明、林可霉素不敏感。

表1 分離菌藥物敏感性檢測結(jié)果

3 討論與分析

本文對發(fā)病豬進(jìn)行臨床觀察解剖，從關(guān)節(jié)腔發(fā)膿性組織中分離出了大量形態(tài)一致的細(xì)菌，通過革蘭氏染色鏡檢，并利用設(shè)計的33個血清型鏈球菌鑒定引物對分離菌進(jìn)行了分型鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離菌為血清I型鏈球菌。

根據(jù)分離菌的藥物敏感性檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該分離菌對多種抗生素均比較敏感，結(jié)合豬場提供的哺乳仔豬疫苗免疫情況，建議豬場將藍(lán)耳病毒疫苗改為每次免疫0.5頭份/頭，然后加強哺乳仔豬傷口預(yù)防和消毒管理，將斷奶仔豬斷奶后重新分群飼養(yǎng)，改為以1窩小豬作為1個單位轉(zhuǎn)至保育舍，不進(jìn)行合群與分群工作，以減少合群打斗的應(yīng)激以及傷口的增加[3]；選用敏感藥物頭孢噻呋鈉進(jìn)行鏈球菌的防控和治療工作，結(jié)果有效的控制了發(fā)病情況。該豬場鏈球菌比較嚴(yán)重的原因筆者認(rèn)為可能為：變異藍(lán)耳病毒疫苗免疫劑量過大，該疫苗存在一定致病性[4]，導(dǎo)致了哺乳仔豬自身免疫力降低；斷奶轉(zhuǎn)群應(yīng)激，小豬免疫力降低；鏈球菌的感染。

此外，筆者認(rèn)為斷奶仔豬是生豬飼養(yǎng)比較容易出問題的階段，小豬在斷奶后往往經(jīng)歷了環(huán)境改變的應(yīng)激、飼料應(yīng)激、離開母豬的應(yīng)激、合群打斗應(yīng)激等降低生豬非特異性免疫力的因素，同時還處于各種特異性抗體下降的階段。各豬場應(yīng)該從防止和減輕各種應(yīng)激帶來的負(fù)面影響入手，然后給予仔豬合理的免疫注射以及藥物保健工作，這樣方可提高保育仔豬的成活率。

[1]陸承平主編.獸醫(yī)微生物學(xué)(第四版)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010.

[2]王楷宬. 豬鏈球菌1、2、14、1/2 型莢膜多糖的單糖組成比較[J]. 微生物學(xué)報,2014,(6):656-662.

[3]楊 建. 豬鏈球菌病的防治與體會[J]. 農(nóng)業(yè)開發(fā)與裝備,2015,(4):152-153.

[4]李麗琴等. PRRSV 變異株活疫苗和滅活疫苗免疫特性的研究[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報,2010,(6):468-472.