石見穿提取物多糖對SGC—7901腫瘤細胞的作用

代貴江 劉曉冬 鄭科文 吳宜艷

【摘 要】目的：研究分析石見穿提取物多糖對SGC-7901腫瘤細胞的作用。方法：應(yīng)用熱水提取法以及乙醇沉淀法提取多糖，設(shè)立10、20、40、80、160ug/ml不同濃度的多糖組以及等體積培養(yǎng)液對照組共6組，應(yīng)用MTT法測定石見穿提取物多糖的腫瘤抑制率，對比分析6組24h、48h的SGC-7901腫瘤細胞抑制率。結(jié)果：MTT測定顯示石見穿多糖對SGC-7901細胞有明顯的抑制作用，并且呈現(xiàn)時間和計量的依賴性。結(jié)論：石見穿提取物通過乙醇提取法充分提取石見穿提取物多糖，石見穿多糖對SGC-7901腫瘤細胞的抑制作用隨著濃度和作用時間的升高而增強。另外石見穿多糖屬于純天然藥材，可降低腫瘤患者臟器負(fù)擔(dān)，值得臨床推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】石見穿提取物；多糖；腫瘤抑制率

石見穿學(xué)名華鼠尾草，中醫(yī)理論中有活血化瘀、清熱解毒、活血理氣等作用，臨床中主要將石見穿與其他中藥配合使用，多用于肝炎、婦科以及癌癥等方面。近期有較多文獻研究表明，石見穿有效成分對于抗腫瘤有顯著的作用，石見穿主要成分偶多糖類、多酚類、三枯類以及醇類[1]。本文為研究分析石見穿提取物對SGC7901細胞的作用，應(yīng)用熱水提取法以及乙醇沉淀法提取石見穿有效成分多糖，并應(yīng)用MTT法分析其對抑制腫瘤活動的作用，為石見穿的醫(yī)學(xué)應(yīng)用提供參考，為中醫(yī)治療腫瘤和進一步研究天然藥物及北藥開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 藥品、試劑與儀器

石見穿提取物由筆者所在的藥學(xué)實驗室自制，石見穿購于上海市中藥飲片廠，生產(chǎn)批號981101，SGC-7901細胞瘤株由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所提供。乙醇、丙酮、氯仿、正丁醇以及源化鉀等全部為分析純試劑。

1.2 石見穿提取物多糖的提取方法

將石見穿粉200g放置于1500ml的燒杯中，倒入1000ml的石油醚，將其浸泡24小時進行脫脂，浸泡后過濾，藥渣干燒，之后采用熱水回流的方式提取3次，每次提取2小時，三次后合并提取液，采用旋蒸的方法將提取液濃縮到300ml。再加入1200ml的無水乙醇，在40℃環(huán)境下放置24小時后過濾、干燥，再將其樣品用4：1的Sevage試劑（氯仿和正丁醇）除蛋白，連續(xù)操作六次。后得到的樣品醇沉后依次用乙醇、丙酮及乙醚洗滌兩次，最后真空干燥所見的黑色粗便為石見穿多糖[2]。

1.3 石見穿多糖抗腫瘤活性的試驗方法

取SGC-7901腫瘤細胞接種在96孔板中，要求為對數(shù)生長期的腫瘤細胞并以1×104個/孔接種，100ul/孔。48h后將其分為10、20、40、80、160ug/ml多糖組以及等體積培養(yǎng)液的對照組6組，各組均設(shè)5個平行孔并分別加入100ul同等濃度的多糖，在孵箱內(nèi)分別培養(yǎng)24h、48h，培養(yǎng)條件要求37℃、飽和濕度以及5% CO2，之后再加入5mg/ml MTT 20ul培養(yǎng)4h后去掉培養(yǎng)液將150ul的二甲基亞砜加入每孔，結(jié)束培養(yǎng)計算細胞增殖抑制率。抑制率=（對照組A值-多糖組A值）/對照組A值×100%，A值采用酶標(biāo)儀在490nm處讀取[3]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.O軟件對本組數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)采用標(biāo)準(zhǔn)差（χ-±s）表示，方差齊性檢驗采用單因素方差分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 石見穿多糖提取率

本組實驗應(yīng)用熱水提取法以及乙醇沉淀法提取多糖，200g石見穿經(jīng)過Sevage法除蛋白得到3.60g石見穿粗多糖，有效提取率為1.8%。

2.2 石見穿多糖對SGC-7901腫瘤細胞的抑制率

MTT測定顯示石見穿提取物多糖對SGC-7901腫瘤細胞有明顯的抑制作用，并且呈現(xiàn)時間和劑量的依賴性，各濃度石見穿組較對照組P<0.05，如表1。

3 結(jié)論

我國在應(yīng)用天然藥物方面有著悠久的歷史，尤其是在腫瘤疾病治療中對中草藥的抗癌作用的研究，許多中草藥提取物對抗腫瘤的研究均被深入研究和臨床應(yīng)用。眾多藥理研究證實，石見穿有抗腫瘤的作用，臨床中多見與其他藥物配合用于肝癌、胃癌的治療中[4]。本文將人體胃癌SGC-7901腫瘤細胞作為評價體系，研究石見穿提取物多糖對抗腫瘤的作用。在石見穿多糖的提取中，應(yīng)用熱水提取法以及乙醇沉淀法提取多糖，石見穿多糖的提取率可達1.8%。這種工藝提取率較高穩(wěn)定可行。

腫瘤是人體組織的某個細胞在各種致癌因素的作用下，失去了原本基因水平的正常生長調(diào)控，出現(xiàn)異常細胞增生問題，造成異常的病變[5]。因此臨床治療中抑制腫瘤細胞的生長至關(guān)重要，本組在石見穿多糖對SGC-7901腫瘤細胞抑制率的實驗結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，不同濃度的石見穿多糖對腫瘤細胞均有抑制作用，濃度越高抑制率越高，且48h抑制率要明顯高于24h抑制率，即說明石見穿多糖對SGC-7901腫瘤細胞的抑制作用隨著濃度和作用時間的升高而增強。另外石見穿多糖屬于純天然藥材，可降低腫瘤患者臟器負(fù)擔(dān)，值得臨床推廣應(yīng)用。

參考文獻

[1]鄭海音，徐偉，鄭曉燕，等.石見穿多糖的提取及其對肝癌細胞增殖的抑制作用[J].中國中醫(yī)藥科技，2008，（5）：360-362.

[2]徐敬宣，薛姣，錢曉萍，等.石見穿的化學(xué)成分及抗腫瘤作用研究進展[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2011，（3）：587-590.

[3]高俊峰，王秀輝，張鵬，等.石見穿化學(xué)成分和藥理作用研究進展[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，（12）：348-351.

[4]雷濤，孟繁欽，王艷芳，等.石見穿化學(xué)成分及藥理研究進展[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，（29）：9-11.