偽狂犬基因缺失疫苗滴鼻免疫對商品豬群gE抗體的影響

祖海濤　朱連德（勃林格殷格翰動物保?。ㄖ袊┯邢薰荆本?00027）

豬病防控

偽狂犬基因缺失疫苗滴鼻免疫對商品豬群gE抗體的影響

祖海濤朱連德
（勃林格殷格翰動物保?。ㄖ袊┯邢薰?，北京100027）

摘要：偽狂犬病是嚴(yán)重危害規(guī)?；B(yǎng)豬的重要疾病之一。豬只一旦感染偽狂犬病毒，將會終身帶毒，成為豬場的隱患。通過本次試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，如果使用合適的疫苗，并按照正確的操作方法，滴鼻免疫偽狂犬gE基因缺失疫苗，可以有效阻止野毒對商品豬群的感染，降低商品豬群的野毒陽性率。

關(guān)鍵詞：豬偽狂犬??；滴鼻免疫；gE基因缺失疫苗

豬偽狂犬病是由皰疹病毒I型豬偽狂犬病毒引起的一種急性傳染病。可導(dǎo)致懷孕母豬流產(chǎn)、產(chǎn)木乃伊胎、弱仔；新生仔豬大批急性死亡，伴有嘔吐、腹瀉及發(fā)抖、震顫和運(yùn)動失調(diào)等神經(jīng)癥狀；中大豬發(fā)生呼吸道疾病，并繼發(fā)嚴(yán)重的細(xì)菌感染；導(dǎo)致豬只免疫抑制，對其他疫病的易感性增加。

豬偽狂犬病是危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。西方發(fā)達(dá)國家在九十年代相繼制定和啟動了該病的根除計(jì)劃，取得了很好的成效。該病在我國廣泛存在并引發(fā)巨大損失，2010年以后，我國豬場的偽狂犬野毒陽性率明顯增加，我國一些省區(qū)和部分高級別大型豬場正積極啟動豬偽狂犬病根除計(jì)劃。

由于豬一旦感染偽狂犬病毒，將會終生帶毒，所以感染豬就像一顆定時(shí)炸彈，隨時(shí)都有可能向外界排毒，使周圍的易感豬感染發(fā)病。在一些飼養(yǎng)管理?xiàng)l件較差的豬場，就會造成豬偽狂犬病的持續(xù)反復(fù)流行，使商品豬的成活率維持在較低水平，而呼吸道病的發(fā)病率維持在較高水平。因此在偽狂犬病病毒陽性場選擇一種既可以避免母源抗體的干擾又能預(yù)防偽狂犬病毒潛伏感染的免疫程序是大家追求的目標(biāo)。為此，我們在種豬企業(yè)內(nèi)進(jìn)行了偽狂犬gE基因缺失疫苗滴鼻免疫試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告有關(guān)試驗(yàn)結(jié)果供大家參考。

1材料和方法

1.1豬場的選擇

某規(guī)?；N豬企業(yè)，共有5個(gè)豬場，每個(gè)豬場獨(dú)立運(yùn)營、生產(chǎn)，對其中兩個(gè)豬場（豬場1、豬場2，均為偽狂犬野毒陽性豬場）做有關(guān)豬偽狂犬gE基因缺失疫苗的滴鼻免疫試驗(yàn)。

豬場1現(xiàn)存欄經(jīng)產(chǎn)母豬600頭，主要飼養(yǎng)純種大白、杜洛克。單點(diǎn)式飼養(yǎng)管理，自繁自養(yǎng)，全進(jìn)全出。仔豬在21日齡斷奶，斷奶當(dāng)天轉(zhuǎn)入保育舍，70日齡從保育舍轉(zhuǎn)入育肥舍。隨機(jī)抽取50頭母豬，采樣檢測結(jié)果顯示偽狂犬gE抗體陽性豬有50頭，偽狂犬野毒抗體陽性率達(dá)100%。豬場遠(yuǎn)離養(yǎng)殖高密度區(qū)，自然防疫條件較好。

豬場2現(xiàn)存欄經(jīng)產(chǎn)母豬1 000頭，主要飼養(yǎng)純種大白、長白、杜洛克。飼養(yǎng)模式和豬場1相同，隨機(jī)抽取50頭母豬，采樣檢測結(jié)果顯示偽狂犬gE抗體陽性豬有38頭，偽狂犬野毒抗體陽性率達(dá)76%。

兩個(gè)豬場主要疫苗的免疫程序相同。其中母豬：高致病性藍(lán)耳病活疫苗（JX株）在空懷期跟胎免疫；豬瘟高效細(xì)胞疫苗普免，3次/年；某國產(chǎn)豬偽狂犬弱毒疫苗普免，4次/年。仔豬：14日齡免疫高致病性藍(lán)耳病活疫苗（JX株）；28日齡、63日齡免疫豬瘟高效細(xì)胞疫苗；55日齡、90日齡免疫豬偽狂犬基因缺失疫苗（Bartha-K61株，某國產(chǎn)公司）。

1.2分組和采樣方案

在豬場1中將同一單元產(chǎn)房的豬群隨機(jī)分為3組，第一組仔豬出生后3天內(nèi)使用某進(jìn)口偽狂犬gE基因缺失疫苗滴鼻；第二組仔豬出生后3天內(nèi)使用某國產(chǎn)偽狂犬gE基因缺失疫苗滴鼻；第三組仔豬出生后不做滴鼻免疫，作為對照組。仔豬轉(zhuǎn)入保育舍、轉(zhuǎn)入育肥舍時(shí)均按照一對一轉(zhuǎn)欄，并保證3組豬群飼養(yǎng)環(huán)境相同。仔豬在50日齡、90日齡均肌肉注射免疫某國產(chǎn)偽狂犬gE基因缺失疫苗，母豬也注射免疫該國產(chǎn)偽狂犬gE基因缺失疫苗，所用疫苗均為Bartha-K61株。

試驗(yàn)過程中，抽取55日齡、85日齡、145日齡豬群血液，分離血清，送合作實(shí)驗(yàn)室檢測。

在豬場2中，按照同樣的試驗(yàn)設(shè)計(jì)做重復(fù)試驗(yàn)。

1.3 gE-ELISA操作方法

檢測試劑盒均為美國IDEXX公司生產(chǎn)，操作方法以及結(jié)果判定參照試劑盒說明書進(jìn)行。S/N值≤0.6時(shí)，為陽性(+)；S/N值＞0.7時(shí)，為陰性(-)；0.6＜S/N值≤0.7時(shí)，為可疑(±)。在進(jìn)行豬場結(jié)果判定和統(tǒng)計(jì)時(shí)，只要豬場有一個(gè)樣品為陽性，則該場判定為偽狂犬病野毒陽性場。

2結(jié)果

豬偽狂犬gE抗體檢測結(jié)果詳見表1、表2、圖1、圖2。

圖1豬場1 gE抗體檢測結(jié)果

gE抗體陽性率

對檢測結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)對比，發(fā)現(xiàn)在母豬、商品豬群按照相同的免疫程序肌肉注射相同的偽狂犬疫苗情況下，如果增加滴鼻免疫，可降低商品豬群偽狂犬gE抗體陽性率。與對照組及滴鼻免疫國產(chǎn)偽狂犬疫苗組相比，使用某進(jìn)口偽狂犬疫苗滴鼻免疫后，商品豬群的gE抗體陽性率最低。重復(fù)試驗(yàn)也均驗(yàn)證了試驗(yàn)的結(jié)果。

3討論

近年來，由于生豬引種、頻繁調(diào)運(yùn)以及其他疾病的暴發(fā)，給豬偽狂犬病的控制帶來了一定困難，加上引種時(shí)的隔離檢疫措施抓得不嚴(yán)，豬偽狂犬病病毒的變異等導(dǎo)致豬偽狂犬病的傳播很快。據(jù)有關(guān)資料統(tǒng)計(jì)，該病已在某些地區(qū)的一些規(guī)?；i場流行，種豬的gE抗體陽性率達(dá)30%～60%，有的甚至超過90%；某些豬場的仔豬死亡率相當(dāng)高，給生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。從該病流行的特點(diǎn)分析，豬群健康帶毒的情況尤其值得重視，雖然經(jīng)過免疫接種，但健康帶毒的豬只仍可排毒，并引發(fā)下一輪感染，且難以清除病原，偽狂犬病毒的隱性感染是造成此現(xiàn)象的主要原因之一。病毒感染后，可在豬的神經(jīng)系統(tǒng)中定植，造成豬只的終生潛伏感染。當(dāng)豬只處于應(yīng)激狀況下，潛伏感染的偽狂犬病病毒會被激活，病毒大量復(fù)制，并導(dǎo)致豬只發(fā)病。

表1豬場1 gE抗體檢測結(jié)果

表2豬場2 gE抗體檢測結(jié)果

在控制豬偽狂犬病病毒的潛伏感染時(shí)，滴鼻免疫高質(zhì)量的豬偽狂犬弱毒疫苗是最有效的防制方法之一。仔豬在出生后3日齡內(nèi)滴鼻免疫豬偽狂犬弱毒疫苗，2小時(shí)即可建立起豬只的黏膜免疫，保護(hù)豬只不受偽狂犬野毒的感染。同時(shí)，疫苗毒通過鼻黏膜在豬只的神經(jīng)系統(tǒng)尤其在三叉神經(jīng)節(jié)中占位，阻止野毒感染后進(jìn)入神經(jīng)系統(tǒng)，從而起到預(yù)防豬只潛伏感染的目的。

滴鼻免疫在豬場凈化偽狂犬野毒方面有著重要作用。據(jù)《豬病學(xué)》描述，母源抗體保護(hù)和基因缺失疫苗的應(yīng)用，增加了感染所需病毒的劑量，但是不能有效阻止偽狂犬野毒在豬體內(nèi)的脫衣殼和潛伏感染?？梢姡瑑艋岸镜牡谝徊?，也是最重要的一步就是制止入侵，而滴鼻免疫是制止入侵的最佳手段之一。滴鼻免疫不受母源抗體干擾，刺激機(jī)體的黏膜免疫系統(tǒng)產(chǎn)生保護(hù)力。因?yàn)槟冈纯贵w主要游離于組織液、血清、淋巴液中，在黏膜表面只存在少量的分泌性抗體IgA，這些抗體中和不了疫苗毒，不會影響疫苗發(fā)揮作用。

滴鼻免疫時(shí)，疫苗需要滿足以下幾個(gè)方面的要求，否則會對疫苗滴鼻免疫效果產(chǎn)生不良影響。

⑴疫苗的佐劑類型：油性佐劑的偽狂犬疫苗會嚴(yán)重影響仔豬滴鼻免疫的效果；

⑵毒株的類型：豬偽狂犬疫苗的TK基因是嗜神經(jīng)基因，如果TK基因缺失，會影響疫苗毒在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的占位能力，從而影響滴鼻免疫的效果，不能有效阻止野毒在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的占位潛伏感染；

⑶滴鼻免疫的方法：專用稀釋液稀釋疫苗后，使用專用滴鼻頭，用連續(xù)注射器滴鼻，保證在足夠的壓力下疫苗均勻噴灑在仔豬鼻黏膜內(nèi)；

⑷環(huán)境的穩(wěn)定性：滴鼻免疫時(shí)，疫苗需均勻噴灑在鼻黏膜上，所以疫苗對環(huán)境的穩(wěn)定性有較高的要求。

通過上述試驗(yàn)可以得出：在豬偽狂犬野毒陽性豬場內(nèi)，使用高質(zhì)量的豬偽狂犬弱毒疫苗滴鼻免疫，可以減輕商品豬群偽狂犬病毒的感染壓力，降低感染比例，推遲野毒感染時(shí)間。

中圖分類號：S858.28

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4645(2015)12-0047-03

收稿日期：2015-08-26