重組血管內(nèi)皮抑素對晚期食管胃交接部腺癌患者外周血Treg、CD8+T細(xì)胞、TSGF影響及療效觀察

郭宇，任志麗，張瑞新

(唐山工人醫(yī)院 胸外科，河北 唐山 063000)

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重組血管內(nèi)皮抑素對晚期食管胃交接部腺癌患者外周血Treg、CD8+T細(xì)胞、TSGF影響及療效觀察

郭宇，任志麗，張瑞新

(唐山工人醫(yī)院 胸外科，河北 唐山 063000)

目的 探討重組血管內(nèi)皮抑素對晚期食管胃交接部腺癌患者外周血Treg、CD8+T細(xì)胞、惡性腫瘤特異生長因子(tumor specific growth factor，TSGF)的影響及臨床療效觀察。方法 收集唐山工人醫(yī)院收治的晚期食管胃交接部腺癌患者52例，隨機(jī)分為對照組和實驗組，每組各26例，對照組給予OLF化療方案，實驗組給予OLF化療方案聯(lián)合重組血管內(nèi)皮抑素治療。每21 d為1個周期，共治療4個周期。治療結(jié)束后，對所有患者的外周血Treg、CD8+T細(xì)胞水平、血清TSGF含量及臨床療效進(jìn)行檢測。結(jié)果 治療后，與對照組比較，實驗組患者的外周血Treg水平較低(P<0.05)；外周血CD8+T細(xì)胞水平較高(P<0.05)；血清TSGF含量較低(P<0.05)；有效率較高(P<0.05)。結(jié)論 重組血管內(nèi)皮抑素能夠明顯降低晚期食管胃交接部腺癌患者外周血Treg水平和血清TSGF含量，提高CD8+T細(xì)胞水平，提高治療的有效率，對臨床有指導(dǎo)意義。

重組血管內(nèi)皮抑素；晚期食管胃交接部腺癌；Treg；CD8+T細(xì)胞；惡性腫瘤特異生長因子；臨床療效

食管胃交界部腺癌(adenocarcinoma of the esophagogastric junction，AEG)是指發(fā)生于賁門附近的食管下端，賁門及賁門下方近胃端的惡性腫瘤，多可侵蝕胃-食管交接部。因此，食管-胃交接部腺癌泛稱為 “賁門癌”[1]。20世紀(jì)80年代以來，世界許多地區(qū)和國家均出現(xiàn)胃遠(yuǎn)側(cè)端腫瘤發(fā)病率降低，而賁門癌和食管末端腺癌的發(fā)病率升高。在一些國家，腺癌在食管癌構(gòu)成比中已超過鱗癌[2]。對于AEG，手術(shù)是目前最常用的治療方式，但是單純術(shù)后5年生存率僅為34.0%～52.3%之間[3]，尤其是很多晚期AEG患者已經(jīng)不適合手術(shù)治療。因此，采取合適的化療方案對于延長患者生存期尤為重要。研究發(fā)現(xiàn)[4]，重組血管內(nèi)皮抑素是新出現(xiàn)的血管抑制類藥物，具有抑制腫瘤新生血管形成、妨礙腫瘤增殖轉(zhuǎn)移的效果，已有研究表明[5]，應(yīng)用重組血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合OLF化療方案治療晚期胃癌的有效率較單純OLF化療方案要高。但是，目前關(guān)于重組血管內(nèi)皮抑素對晚期AEG治療作用的相關(guān)研究較少，因此，本研究通過對患者外周血Treg、CD8+T細(xì)胞及惡性腫瘤特異生長因子(tumor speicfic growth factor，TSGF)水平的檢測分析，來探討重組血管內(nèi)皮抑素對晚期AEG的影響及其臨床療效。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集唐山工人醫(yī)院2014年5月～2015年5月的確診為AEG的患者52例。按照隨機(jī)數(shù)字表法分為實驗組和對照組，每組26例患者，實驗組男15例，女11例，年齡40～75歲，平均年齡(58.5±8.2)歲；對照組男16例，女10例，年齡45～81歲，平均年齡(62.0±8.1)歲。2組患者的年齡、性別一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 診斷及排除標(biāo)準(zhǔn) 診斷依據(jù)根據(jù)2008年《歐洲癌癥研究與治療組織胃腸腫瘤專業(yè)組胃及食管結(jié)合部腺癌診療專家共識》[6]關(guān)于AEG的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)超聲內(nèi)鏡和病理學(xué)確診；分期根據(jù)2010年國際抗癌聯(lián)盟/美國癌癥聯(lián)合委員會(UICC/AJCC)的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[7]。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往經(jīng)過手術(shù)、放化療再復(fù)發(fā)的患者；預(yù)計生存期<3個月；合并其他惡性腫瘤；嚴(yán)重的心腦血管疾病、肝腎功能衰竭等其他內(nèi)科疾??；對試驗中所涉及藥物過敏。

1.3 方法

1.3.1 治療方法：對照組給予OLF化療方案：奧沙利鉑135 mg/m2，d1；亞葉酸鈣200 mg/m2，d1～d5；5-氟尿嘧啶500 mg/m2，d1～d5。實驗組在對照組基礎(chǔ)上聯(lián)合重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液(山東先聲麥得津生物制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字S20050088)75 mg/m2，d1～d14。每21d為1個周期，2組均治療4個周期。

1.3.2 血清指標(biāo)采集：所有研究對象均于治療前后采集空腹12 h后靜脈血5 mL，然后分離血清，采用臨床檢驗科全自動酶聯(lián)免疫分析儀(SS228BEPIII)，嚴(yán)格按照人腫瘤特異性生長因子(TSGF)檢測試劑盒(上海酶聯(lián)生物技術(shù)有限公司)的說明書操作，檢測血清中TSGF的含量。

1.3.3 細(xì)胞學(xué)指標(biāo)檢測：治療前后抽取空腹靜脈血5 mL，加入EDTA-K2抗凝，采用CytoFLEX流式細(xì)胞儀(美國貝克曼)，檢測外周血中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)、CD8+T細(xì)胞水平。

1.3.4 臨床療效評估：根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)關(guān)于實體瘤的評價標(biāo)準(zhǔn)：緩解：腫瘤縮小在50%以上，且維持時間大于1個月；穩(wěn)定：25%<腫瘤縮小<50%，同時無新病灶；進(jìn)展：腫瘤增大或轉(zhuǎn)移。有效率=緩解率+穩(wěn)定率。

2 結(jié)果

2.1 治療前后2組患者外周血Treg水平比較 治療后，2組患者的外周血Treg水平較治療前顯著降低(P<0.05)；與對照組比較，實驗組患者的外周血Treg水平顯著降低(P<0.05)。見表1。

表1 治療前后2組患者外周血Treg水平比較±s)Tab.1 Comparison of Treg between two groups pre-and post- ±s)

*P<0.05，與治療前比較，compared with pre-treatment；#P<0.05，治療后與對照組比較，compared with control group post-tretment

2.2 治療前后2組患者外周血CD8+T細(xì)胞水平比較 治療后，2組患者的外周血CD8+T細(xì)胞水平較治療前顯著升高(P<0.05)；與對照組比較，實驗組患者的外周血CD8+T細(xì)胞水平顯著升高(P<0.05)。見表2。

表2 治療前后2組患者外周血CD8+T細(xì)胞水平比較±s)Tab.2 Comparison of CD8+T between two groups pre-and post- treatment ±s)

*P<0.05，與治療前比較，compared with pre-treatment；#P<0.05，治療后與對照組比較，compared with control group post-tretment

2.3 治療前后2組患者血清TSGF含量比較 治療后，2組患者的血清TSGF含量與較治療前顯著降低(P<0.05)；與對照組比較，實驗組患者的血清TSGF含量顯著降低(P<0.05)。見表3。

表3 治療前后2組患者血清TSGF含量比較±s)Tab.3 Comparison of TSGF between two groups before and after the ±s)

*P<0.05，與治療前比較，compared with pre-treatment；#P<0.05，治療后與對照組比較，compared with control group post-tretment

2.4 2組患者的臨床療效比較 治療后，實驗組患者的有效率為84.62%，顯著高于對照組的53.85%(χ2=5.78，P<0.05)。見表4。

表4 2組患者的臨床療效比較[n(%)]Tab.4 Comparison of clinical effect between two groups[n(%)]

#P<0.05，與對照組比較，compared with control group

3 討論

AEG的發(fā)病率不斷上升，逐漸受到醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。AEG的定義與病理分型尚未統(tǒng)一，目前多認(rèn)為AEG相關(guān)的危險因素為胃食管反流病、Barrett’s 食管與食管裂孔、腸上皮化生、幽門螺桿菌感染、肥胖等[8]。研究認(rèn)為，胃食管反流物的刺激會導(dǎo)致食管上皮細(xì)胞損傷，引起細(xì)胞上皮異常分化成柱狀上皮來適應(yīng)環(huán)境變化，出現(xiàn)腸化生和不典型增生，引起癌變。由于解剖位置特殊，早期AEG多無明顯癥狀[9]，發(fā)現(xiàn)時多已進(jìn)展為晚期AEG，化療是晚期AEG主要的治療手段。重組血管內(nèi)皮抑素是新研發(fā)的一種抗腫瘤藥物，能夠作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，對VEGF等促進(jìn)血管生成的細(xì)胞因子有抑制作用[10]。惡性腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)是新生血管的形成，重組血管內(nèi)皮抑素抑制VEGF表達(dá)，妨礙新生血管的形成，阻斷了腫瘤的營養(yǎng)供給，從而起到抑制腫瘤發(fā)展的作用。重組血管內(nèi)皮抑素功能廣泛，與其他化療藥物聯(lián)合使用還能增強(qiáng)其療效，已有研究表明重組血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合化療在非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、骨和軟組織肉瘤、胃癌等的治療中，均取得了一定的臨床療效[11]。在本實驗中，通過檢測患者治療前后患者外周血Treg、CD8+T細(xì)胞和血清TSGF水平，以及臨床療效的評估，來探討重組血管內(nèi)皮抑素對晚期AEG患者的治療效果。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實驗組患者的外周血Treg水平與對照組比較顯著降低(P<0.05)，證實了重組血管內(nèi)皮抑素對晚期AEG患者的免疫功能具有調(diào)節(jié)作用。惡性腫瘤的發(fā)生，不只與外來刺激導(dǎo)致細(xì)胞異常分化有關(guān)，還與機(jī)體的免疫功能關(guān)系密切。機(jī)體免疫功能正常，可以行使免疫監(jiān)視和防御功能，及時清除分化異常的細(xì)胞，防止腫瘤發(fā)生；而免疫功能低下，分化異常的細(xì)胞不受控制的增殖，最終導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。Treg是具有調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群，能夠抑制免疫反應(yīng)，正常情況下可以維持自身免疫功能的穩(wěn)定。曾有研究報道[12]，胃癌患者外周血中Treg水平高于健康對照組，異常升高的Treg水平導(dǎo)致機(jī)體免疫抑制，腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，使得機(jī)體殺傷腫瘤細(xì)胞的功能減弱，導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展。

CD8+T細(xì)胞是T淋巴細(xì)胞亞群的一員，屬于細(xì)胞毒性T細(xì)胞，對腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用。CD8+T細(xì)胞能夠識別腫瘤細(xì)胞并與之接觸，釋放穿孔素蛋白，使大量的離子和水進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞溶解，同時釋放細(xì)胞毒素，破壞腫瘤細(xì)胞核內(nèi)的DNA，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。有研究顯示[13]，胃腸道癌患者外周血CD8+T細(xì)胞水平低于正常對照組，表明CD8+T細(xì)胞的形成受抑制，機(jī)體促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用減弱，這可能與Treg水平異常有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，實驗組患者的外周血CD8+T細(xì)胞水平與對照組比較顯著升高(P<0.05)，表明重組血管內(nèi)皮抑素能夠影響晚期AEG患者的免疫功能，加強(qiáng)抗腫瘤作用。

TSGF是一種可溶性肽類物質(zhì)，由惡性腫瘤細(xì)胞分泌，是腫瘤特異性的生長因子。TSGF具有具有促進(jìn)腫瘤新生血管生成增殖的作用，增加腫瘤的血液供應(yīng)，促進(jìn)腫瘤組織的生長和轉(zhuǎn)移。在正常情況下，TSGF的分泌量極少，而在惡性腫瘤發(fā)生時，TSGF的含量隨之增高，研究表明[14]，晚期上消化道惡性腫瘤患者血清TSGF水平明顯高于正常人，且隨治療效果變動，可以作為腫瘤治療效果評估的特異敏感性指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，實驗組患者的血清TSGF含量與對照組比較顯著降低(P<0.05)，表明重組血管內(nèi)皮抑素能夠降低晚期AEG患者血清TSGF水平，對腫瘤的治療效果較好。

2組患者的臨床療效比較結(jié)果顯示，實驗組患者的有效率明顯高于對照組(P<0.05)，證實了重組血管內(nèi)皮抑素聯(lián)合其他化療方案具有協(xié)同作用，對晚期AEG患者的治療效果明顯。這可能與重組血管內(nèi)皮抑素抑制腫瘤血管生成相關(guān)因子分泌，阻斷腫瘤組織營養(yǎng)供應(yīng)，調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能，提高促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用有關(guān)。

本實驗通過對52例晚期AEG患者外周血Treg、CD8+T細(xì)胞水平、血清TSGF含量及臨床療效檢測結(jié)果進(jìn)行分析，證實了重組血管內(nèi)皮抑素能夠明顯降低晚期食管胃交接部腺癌患者外周血Treg水平和血清TSGF含量, 提高CD8+T細(xì)胞水平，提高治療的有效率。本實驗將進(jìn)行分子機(jī)制方面研究，并對此結(jié)果做出進(jìn)一步論證和分析。

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(編校：王冬梅)

Effect of recombinant endostatin on Treg, CD8+T cells ,TSGF in peripheral blood of patients with advance desophageal gastric junction adenocarcinoma and clinical observation

GUO Yu, REN Zhi-li, ZAHNG Rui-xin

(Department of Thoracic Surgery, Tangshan Gongren Hospital, Tangshan 063000, China)

ObjectiveTo analyse the effect of recombinant endostatin on Treg, CD8+T cells, tumor specific growth factor (TSGF) in peripheral blood of patients with advanced esophageal gastric junction adenocarcinoma and clinical efficacy observation.Methods52 patients who were diagnosed with acute cerebral infarction in our hospital were collected. All patients were randomly divided into experimental group and control group, 26 cases in each group. The control group was given OLF chemotherapy, the experimental group was treated with OLF chemotherapy regimen combined with recombinant endostatin. 21 days was 1 cycle, a total of 4 cycles.After treatment, the levels of Treg, CD8+T cells, serum TSGF and clinical efficacy were detected in all patients.ResultsAfter treatment, compared with control group,the peripheral blood Treg was significantly lower in the experimental group (P<0.05); the peripheral blood CD8+T cells level in the experimental group was significantly higher (P<0.05);the serum TSGF level in the experimental group was significantly lower (P<0.05);the effective of patients in the experimental group was higher (P<0.05).ConclusionRecombinant endostatin can significantly reduce the levels of Treg and serum TSGF in patients with advanced esophageal gastric junction adenocarcinoma, improve the level of CD8+T cells, and improve the efficiency of treatment, have guiding significance to clinical.

recombinant endostatin; advanced adenocarcinoma of esophagogastric junction; Treg; CD8+T cells; tumor specific growth factor; clinical efficacy

郭宇，女，本科，副主任護(hù)師，研究方向：食管癌，肺癌，E-mail：jgjdgfg@21cn.com。

R735.1

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1005-1678(2015)08-0158-03