自體造血干細(xì)胞移植對(duì)惡性淋巴瘤患者血清微量元素及乳酸脫氫酶活性的影響研究

蔡坤，王昭前，龐海云

(海南省人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，海南 ?？?570311)

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自體造血干細(xì)胞移植對(duì)惡性淋巴瘤患者血清微量元素及乳酸脫氫酶活性的影響研究

蔡坤，王昭前，龐海云

(海南省人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，海南 海口 570311)

目的 探討自體造血干細(xì)胞(autologous peripheral blood stem cell，APBSC)移植對(duì)惡性淋巴瘤患者血清微量元素及乳酸脫氫酶活性影響的研究。方法 收集海南省人民醫(yī)院2013年5月～2014年5月收治的惡性淋巴瘤患者80例，隨機(jī)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組各40例，2組霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)患者采用ABVD(多柔比星、博來(lái)霉素、長(zhǎng)春新堿、達(dá)卡巴嗪)方案為主的化療；非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma，NHL)患者多采用標(biāo)準(zhǔn)CHOP(環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春新堿、表柔比星、地塞米松)方案為基礎(chǔ)的化療，采用化療藥物聯(lián)合粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)開(kāi)始APBSC動(dòng)員，化療后骨髓抑制期應(yīng)用10 μg/(kg·d)的G-CSF 5，檢測(cè)白細(xì)胞升至3.0×109/L，血小板升至50×109/L時(shí)，采集APBSC,加入細(xì)胞凍存保護(hù)液凍存。預(yù)處理結(jié)束24 h后，將凍存的外周血造血干細(xì)胞鎖骨下靜脈回輸給實(shí)驗(yàn)組患者，接受自體造血干細(xì)胞移植治療。對(duì)照組患者繼續(xù)接受化療治療。治療結(jié)束后，對(duì)所有患者的Cu水平、Zn水平及乳酸脫氫酶活性進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 治療后，2組患者的Zn水平上升(P<0.05)，Cu與Cu/Zn水平下降(P<0.05)；與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組治療后Zn水平較高(P<0.05)，Cu與Cu/Zn水平較低(P<0.05)；治療后，2組患者乳酸脫氫酶活性降低(P<0.05)，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組治療后乳酸脫氫酶活性較低(P<0.05)。結(jié)論 自體造血干細(xì)胞移植可以顯著降低惡性淋巴瘤患者的Cu水平、升高Zn水平及降低乳酸脫氫酶活性，對(duì)臨床有指導(dǎo)意義。

自體造血干細(xì)胞移植；惡性淋巴瘤；Cu；Zn；乳酸脫氫酶

惡性淋巴瘤(malignant lymphoma，ML)簡(jiǎn)稱淋巴瘤，是一組起源于淋巴造血組織的惡性腫瘤[1]。分為霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma，NHL)兩大類(lèi)。近年來(lái)非霍奇金淋巴瘤發(fā)病率逐年升高，而霍奇金淋巴瘤則有下降的現(xiàn)象，絕大部分霍奇金淋巴瘤可治愈，大多數(shù)非霍奇金淋巴瘤多為慢性、難治性惡性腫瘤，易復(fù)發(fā)，治療困難[2]。非霍奇金淋巴瘤為臨床最常見(jiàn)的侵襲性淋巴瘤，常規(guī)治療存活率為3成，但復(fù)發(fā)難治的NHL的預(yù)后不良且長(zhǎng)期生存改善不明顯。自體造血干細(xì)胞移植(autologous hematopoietic stem cell transplantation，AHSCT)是一種新技術(shù)，目前應(yīng)用于鞏固淋巴瘤大劑量化療療效的最佳方法[3]，可以提高淋巴瘤患者存活率，本項(xiàng)技術(shù)不受供者來(lái)源的限制，因而已經(jīng)成為治療淋巴瘤的一種重要手段[4]。目前自體造血干細(xì)胞移植方法主要為外周血干細(xì)胞移植，此外還有骨髓干細(xì)胞移植和臍血干細(xì)胞移植等。本文通過(guò)觀察自體造血干細(xì)胞移植對(duì)惡性淋巴瘤患者血清微量元素及乳酸脫氫酶活性的影響，以探究自體造血干細(xì)胞移植對(duì)惡性淋巴瘤患者的療效。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集海南省人民醫(yī)院2013年5月～2014年5月收治的惡性淋巴瘤患者80例，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組40例。實(shí)驗(yàn)組男19例，女21例，年齡18～45歲，平均年齡(28.6±4.9)歲；NHL18例，HL22例，臨床分期Ⅱ期13例，Ⅲ期14例，Ⅳ期13例。對(duì)照組男22例，女18例，18～46歲，平均年齡(29.2±4.7)歲，NHL20例，HL20例，臨床分期Ⅱ期12例，Ⅲ期13例，Ⅳ期15例。2組患者在性別、年齡、病程分期比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

患者符合2010《中國(guó)版NCCN惡性淋巴瘤治療指南》[5]的國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)明確診斷為淋巴瘤；患者年齡≤60歲；連續(xù)完成2個(gè)或以上化療；根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例》，患者簽署知情同意書(shū)。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 排除不符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)和納入標(biāo)準(zhǔn)者；患有嚴(yán)重心、肺、肝、腎等臟器并發(fā)癥的患者；各種急慢性感染患者；妊娠患者；不能耐受超大劑量化療、放療的患者；常規(guī)化療未緩解的復(fù)發(fā)難治性淋巴瘤。

1.3 方法

1.3.1 造血干細(xì)胞動(dòng)員前治療：2組HL患者采用ABVD(多柔比星、博來(lái)霉素、長(zhǎng)春新堿、達(dá)卡巴嗪)方案為主的化療；NHL患者多采用標(biāo)準(zhǔn)CHOP(環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春新堿、表柔比星、地塞米松)方案為基礎(chǔ)的化療。

1.3.2 造血干細(xì)胞動(dòng)員及凍存：在誘導(dǎo)治療結(jié)束后，患者心、肺、肝、腎功能正常，骨髓造血功能恢復(fù)正常，多數(shù)動(dòng)員采用化療藥物聯(lián)合粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)開(kāi)始APBSC 動(dòng)員?；熀蠊撬枰种破趹?yīng)用G-CSF 5，劑量為10 μg/(kg·d)，檢測(cè)白細(xì)胞及血小板水平，白細(xì)胞升至3.0×109/L，血小板升至50×109/L時(shí)，開(kāi)始使用外周血細(xì)胞分離機(jī)采集APBSC 1～2次。自體干細(xì)胞采集后加入細(xì)胞凍存保護(hù)液，并于-80 ℃冰箱中凍存。

1.3.3 造血干細(xì)胞回輸：預(yù)處理結(jié)束24 h后，將凍存的外周血造血干細(xì)胞鎖骨下靜脈回輸給實(shí)驗(yàn)組患者，接受自體造血干細(xì)胞移植治療。對(duì)照組患者繼續(xù)接受化療治療。

1.3.4 鋅(Zn)和銅(Cu)的含量測(cè)定：2組患者晨起空腹取靜脈血3～4 mL，經(jīng)去離子水清潔處理后的試管中。離心取上清液2 mL。用原子吸收光譜法測(cè)定血清中Zn和Cu的含量并計(jì)算出銅/鋅比值。儀器采用北京普析通用儀器有限公司生產(chǎn)的MBS血液五元素分析儀，所需試劑均購(gòu)于北京普析通用儀器有限公司生產(chǎn)的配套試劑。

1.3.5 乳酸脫氫酶活性的測(cè)定：用比色法檢測(cè)乳酸脫氫酶活性，采用羅氏公司生產(chǎn)的cobasc501全自動(dòng)生化分析儀及其配套試劑進(jìn)行檢測(cè)：2組患者清晨空腹抽取靜脈血10 mL，放入抗凝管中，-4 ℃保存。采用干式化學(xué)法法檢測(cè)LDH，首先采血前用毛細(xì)吸管采取血30 μL，滴加在測(cè)試條加樣區(qū)中央，打開(kāi)分析儀檢測(cè)艙蓋，將待測(cè)測(cè)試條置于測(cè)試槽內(nèi)，測(cè)試條上的空位孔套在測(cè)試槽中的空位桿上，關(guān)閉檢測(cè)艙蓋，儀器自動(dòng)檢測(cè)，120 s結(jié)束測(cè)試，屏幕顯示乳酸脫氫酶的測(cè)定值，試劑盒購(gòu)自四川邁克科技有限公司提供。

1.3.6 支持治療：移植期間患者于無(wú)菌層流病房中居住，進(jìn)無(wú)菌食物，根據(jù)患者當(dāng)時(shí)營(yíng)養(yǎng)情況酌情給予腸外營(yíng)養(yǎng)。若患者出現(xiàn)貧血癥狀，則給予患者適當(dāng)輸全血及血小板。

2 結(jié)果

2.1 治療前后患者Zn和Cu的水平比較 治療后，2組患者的Zn水平上升(P<0.05)，Cu與Cu/Zn水平下降(P<0.05)；與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組治療后Zn水平較高(P<0.05)，Cu與Cu/Zn水平較低(P<0.05)。見(jiàn)表1。

組別 例數(shù)時(shí)間Zn(mg/L)Cu(mg/L)Cu/Zn對(duì)照組40治療前0.72±0.101.49±0.152.21±0.30治療后0.94±0.10*1.05±0.13*1.75±0.22*實(shí)驗(yàn)組40治療前0.74±0.111.51±0.222.15±0.26治療后1.32±0.13*#0.79±0.14*#0.84±0.11*#

*P<0.05，與同組治療前相比，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后相比，compared with control group post-treatment

2.2 治療前后2組乳酸脫氫酶活性比較 與治療前比較，治療后2組患者乳酸脫氫酶活性降低(P<0.05)，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組治療后乳酸脫氫酶活性較低(P<0.05)。見(jiàn)表2。

組別 例數(shù)時(shí)間乳酸脫氫酶活性對(duì)照組40治療前278.72±31.38治療后210.6±32.11*實(shí)驗(yàn)組40治療前283.37±36.75治療后156.48±20.26*#

*P<0.05，與同組治療前相比，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后相比，compared with control group post-treatment

3 討論

造血干細(xì)胞移植這項(xiàng)技術(shù)的出現(xiàn)，為惡性淋巴瘤患者的長(zhǎng)期存活帶來(lái)了希望。造血干細(xì)胞移植的自體造血干細(xì)胞移植應(yīng)用廣泛，它具有適用人群廣、并發(fā)癥少、無(wú)排斥反應(yīng)和安全經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，因此該療法不但是復(fù)發(fā)難治性淋巴瘤及預(yù)后不良的侵襲性淋巴瘤的首選治療，已發(fā)展為惡性淋巴瘤患者的最佳治療。盡管AHSCT在NHL的治療中取得一定效果，但40%～70%的NHL患者在接受AHSCT治療后仍難免復(fù)發(fā)[7]。為了明確復(fù)發(fā)原因，首先必須明確自體干細(xì)胞抑制治療血液病的機(jī)制，本文就此問(wèn)題進(jìn)行了深入研究。

銅是血、肝、腦等銅蛋白的組成部分[8]，30種以上的蛋白和酶中均含有銅，正常人體內(nèi)銅基本以銅藍(lán)蛋白形式存在，只有少數(shù)與其他蛋白質(zhì)結(jié)合。研究證實(shí)乳腺癌、白血病、女性生殖器官腫瘤、肺癌及胃腸道腫瘤等多種惡性腫瘤患者血清銅含量均升高[9]。有研究顯示，鋅與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，并可作為某些腫瘤的診斷、療效檢測(cè)指標(biāo)。鋅缺乏導(dǎo)致人體α-干擾素降低致TH/TS下降并抑制粒細(xì)胞、NK細(xì)胞的功能，機(jī)體免疫功能低下，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[10]。本研究結(jié)果也證實(shí)，惡性淋巴瘤患者的血清銅顯著升高。血清銅上升常伴有血清鋅下降，有學(xué)者推測(cè)為Zn是通過(guò)鋅α2-糖蛋白對(duì)腫瘤進(jìn)行調(diào)控，鋅α2-糖蛋白是一種分布于多種體液中且功能復(fù)雜的蛋白質(zhì)，在腫瘤惡病質(zhì)中高表達(dá)，它的特點(diǎn)即為大量消耗人體內(nèi)的脂肪[11]，但其具體發(fā)生機(jī)制尚不明確。銅/鋅比值比單項(xiàng)銅含量或鋅含量更能精確地反映癌腫的病情變化，可作為臨床診斷的標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，惡性淋巴瘤患者血清治療后，2組患者的Zn水平上升(P<0.05)，Cu與Cu/Zn水平下降(P<0.05)；與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組治療后Zn水平較高(P<0.05)，Cu與Cu/Zn水平較低(P<0.05)，提示經(jīng)治療2組患者的淋巴瘤得到控制，實(shí)驗(yàn)組療效更優(yōu)，顯示出造血干細(xì)胞的治療優(yōu)勢(shì)。

乳酸脫氫酶(LDH)為糖酵解酶，體現(xiàn)了腫瘤的增生活性。研究顯示，惡性淋巴瘤患者的LDH水平會(huì)顯著升高[12]，且LDH水平與腫瘤大小和臨床分期等因素有密切關(guān)系，LDH為對(duì)腫瘤疾病的預(yù)后、療效等具有重要意義。本研究結(jié)果顯示，惡性淋巴瘤患者的LDH水平顯著升高，經(jīng)自體造血干細(xì)胞移植治療后，2組患者的乳酸脫氫酶活性均顯著降低，與對(duì)照組水平相比，實(shí)驗(yàn)組患者的乳酸脫氫酶活性降低較明顯(P<0.05)，說(shuō)明LDH可以更好的指導(dǎo)ML分期、預(yù)后、治療。腫瘤細(xì)胞最根本的生物學(xué)特征是分化停滯和無(wú)限增殖。

本研究通過(guò)探究自體造血干細(xì)胞移植對(duì)惡性淋巴瘤患者血清微量元素及乳酸脫氫酶活性的影響，證實(shí)了自體造血干細(xì)胞移植能夠顯著降低惡性淋巴瘤患者的Cu水平、升高Zn水平及降低乳酸脫氫酶活性，本實(shí)驗(yàn)所反映的現(xiàn)象將在進(jìn)一步的研究中做出論證，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

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(編校：王冬梅)

Effect of autologous hematopoietic stem cell transplantation on serum trace elements and lactate dehydrogenase activity in patients with malignant lymphoma

CAI Kun, WANG Zhao-qian, PANG Hai-yun

(Department of Laboratory, Hainan Provincial People’s Hospital, Haikou 570311, China)

ObjectiveTo investigate effect of autologous hematopoietic stem cell transplantation on serum trace elements and lactate dehydrogenase activity in patients with malignant lymphoma.Methods80 patients with malignant lymphoma collected in our hospital from May 2013 to May 2014，40 cases in each group, Hodgkin lymphoma (HL) patients were treated with ABVD (doxorubicin, bleomycin, vincristine, dacarbazine) regimen of chemotherapy; Non-Hodgkin’s lymphoma (NHL) patients were treated with standard CHOP (cyclophosphamide, vincristine, epirubicin, dexamethasone) regimen of chemotherapy of two group.Chemotherapy drugs combined with granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) was used to mobilize APBSC.Application of 10 μg/(kg·d)G-CSF 5 in bone marrow suppression after chemotherapy, detected white cell increased 3.0×109/L ,platelets rose to 50×109/L, collected APBSC,The frozen stock solution of cell was joined and frozen.24 h after pre-treatment, the frozen peripheral blood hematopoietic stem cells of the subclavian vein was transfused for patients in experimental group. Control group continued to receive chemotherapy.After treatment, the Cu level, Zn level and lactate dehydrogenase activity were detected in all patients.ResultsAfter treatment, Zn levels of two groups increased (P<0.05), Cu and Cu/Zn levels decreased (P<0.05).Compared with control group, the level of Zn was higher in experimental group (P<0.05), and the level of Cu and Cu/Zn was lower (P<0.05).After treatment, the lactate dehydrogenase activity of two groups decreased (P<0.05), and experimental group was more lower than control groupy (P<0.05).ConclusionAutologous hematopoietic stem cell transplantation can significantly reduce the level of Cu in patients with malignant lymphoma, elevate Zn level and decrease the activity of lactate dehydrogenase, which has guiding significance for clinical.

autologous hematopoietic stem cell transplantation; malignant lymphoma; Cu; Zn; lactate dehydrogenase

蔡坤，男，大專(zhuān)，主管技師，研究方向：臨床檢驗(yàn)，E-mail：caikunhainan@126.com。

R733

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1005-1678(2015)08-0083-03