甲強(qiáng)龍對(duì)神經(jīng)元機(jī)械損傷后相關(guān)凋亡因子表達(dá)的影響

姚年偉，徐峰，康輝，施立奇，蔡賢華*

(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北 武漢 430065；2.廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院骨科，湖北 武漢 430070；3.余姚市中醫(yī)醫(yī)院骨傷科，浙江 寧波 315400)

實(shí)驗(yàn)研究

甲強(qiáng)龍對(duì)神經(jīng)元機(jī)械損傷后相關(guān)凋亡因子表達(dá)的影響

姚年偉1，2，徐峰2，康輝2，施立奇3，蔡賢華2*

(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北 武漢 430065；2.廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院骨科，湖北 武漢 430070；3.余姚市中醫(yī)醫(yī)院骨傷科，浙江 寧波 315400)

目的 研究甲強(qiáng)龍對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠脊髓神經(jīng)元損傷后的相關(guān)凋亡因子表達(dá)的影響。方法 通過星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元共培養(yǎng)的方法建立神經(jīng)元體外培養(yǎng)模型，將模型分為對(duì)照組：正常的神經(jīng)元培養(yǎng)，損傷組：用機(jī)械切割的方法造成神經(jīng)元的損傷模型，甲強(qiáng)龍組：運(yùn)用1 μM的甲強(qiáng)龍藥物干預(yù)神經(jīng)元機(jī)械損傷模型，對(duì)比各組24 h后凋亡相關(guān)因子的表達(dá)變化。結(jié)果 與空白對(duì)照組相比較，神經(jīng)元損傷組caspase-3、caspase-3mRNA和Bax表達(dá)升高，Bcl-2/Bax的比率和Bcl-2的表達(dá)降低(P<0.05)；與損傷對(duì)照組相比較，甲強(qiáng)龍組caspase-3、caspase-3mRNA和Bax表達(dá)降低(P<0.05)，Bcl-2的表達(dá)和Bcl-2/Bax的比率升高(P<0.05)。結(jié)論 甲強(qiáng)龍能降低神經(jīng)元機(jī)械性損傷后caspase-3凋亡因子的表達(dá)，升高Bcl-2/Bax的比例，抑制神經(jīng)元的凋亡過程，保護(hù)神經(jīng)元。

急性脊髓損傷；甲強(qiáng)龍；神經(jīng)元；機(jī)械損傷；凋亡因子

急性脊髓損傷(acute spinal cord injury，ASCI)是一種高能量、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷嚴(yán)重的疾病，損傷后易導(dǎo)致肢體癱瘓，嚴(yán)重影響患者及家庭的生活質(zhì)量。中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和疾病后修復(fù)的失敗包括多個(gè)因素：神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，軸突再生障礙和缺血再灌注損傷等。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[1]研究證實(shí)脊髓損傷后局部組織內(nèi)的凋亡因子caspase-3、Bax和Bcl-2的表達(dá)量發(fā)生變化。caspase-3的表達(dá)量升高意味著神經(jīng)細(xì)胞凋亡增多，而Bcl-2/Bax的比例也調(diào)控著細(xì)胞的凋亡過程。我們運(yùn)用星形膠質(zhì)細(xì)胞作為滋養(yǎng)層，獲取體外培養(yǎng)的神經(jīng)元，從細(xì)胞水平研究神經(jīng)元機(jī)械性損傷后神經(jīng)元相關(guān)凋亡因子的表達(dá)，觀察甲強(qiáng)龍對(duì)相關(guān)凋亡因子表達(dá)的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和器材試劑 新生1 d的SD大鼠(購于武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)、解剖顯微鏡、離心機(jī)、倒置熒光顯微鏡、DMEM/F12培養(yǎng)液(Hyclone，美國)、PBS緩沖液、胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)(四季青，杭州)、多聚賴氨酸(poly-L-Lysine，PLL)(sigma，美國)、DNaseI酶、雙抗、0.25%胰酶(Hyclone，美國)、谷氨酰胺、B27神經(jīng)生長因子(Gibco，美國)、Neurobasal培養(yǎng)液(Gibco，美國)、甲強(qiáng)龍(輝瑞公司，美國)等。

1.2 溶液的配制 組織緩沖液100 mL：10 mL D-Hank′s+1 mL HEPES溶液+1 mL雙抗+88 mL DMEM/F12培養(yǎng)液，膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液100 mL：10 mL FBS+1 mL雙抗+89 mL DMEM/F12培養(yǎng)液，神經(jīng)元培養(yǎng)液：2 mL B27神經(jīng)生長因子+1 mL 5 mmol/L谷氨酰胺溶液+97 mL Neurobasal培養(yǎng)液。

1.3 PLL包被培養(yǎng)器皿和圓形蓋玻片 于使用前1天向培養(yǎng)板內(nèi)或圓形蓋玻片表面滴加入0.01 mg/mL濃度的PLL，使其覆蓋容器底部，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)過夜，第2天回收多聚賴氨酸溶液，PBS緩沖液沖洗培養(yǎng)瓶底3 次，晾干備用。

1.4 脊髓神經(jīng)元與星形膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)體系的建立

1.4.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞的分離與培養(yǎng) 取2只新生24 h內(nèi)的SD大鼠，在冰塊上無菌條件下取出大腦并放置于培養(yǎng)皿內(nèi)，加入3 mL含預(yù)冷的膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液，在解剖顯微鏡下仔細(xì)剔除皮質(zhì)表面的腦膜及血管。取大腦皮質(zhì)放入另一培養(yǎng)皿內(nèi)，將其剪成1 mm3左右大小的碎塊，向培養(yǎng)皿內(nèi)滴加2 mL 0.25%的胰酶溶液和200 μL DNaseI酶?；蝿蚝蠓湃?7℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，消化15～20 min，期間每5 min左右震蕩搖晃1次。后將消化液及未消化的皮質(zhì)組織移至15 mL離心管內(nèi)，用巴斯吸管緩慢吹打8～10 次，200 g離心5 min，棄上清，加入膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液3 mL，用巴斯吸管吹打15～20次后靜置1 min，將上清液移至另一15 mL離心管內(nèi)，再向剩余未消化的皮質(zhì)組織內(nèi)加入3 mL膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液，重復(fù)上述操作，直至離心管內(nèi)無肉眼可見的組織塊。將細(xì)胞懸液經(jīng)200目濾網(wǎng)過濾后，200 g離心5 min，棄上清，加入10 mL膠質(zhì)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后以3×106/瓶密度接種于多聚賴氨酸包被的T75培養(yǎng)瓶內(nèi)，補(bǔ)充培養(yǎng)液至15 mL。12 h后換液，以后每3天換液一次。在細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)瓶底約80%面積時(shí)進(jìn)行傳代操作，傳代3 次后以1×105/瓶的密度接種于多聚賴氨酸包被的6 孔培養(yǎng)板內(nèi)，在與神經(jīng)元共培養(yǎng)前1天將培養(yǎng)液換成神經(jīng)元培養(yǎng)液。

1.4.2 脊髓神經(jīng)元的分離與培養(yǎng) 取2 只新生SD大鼠，同取星形膠質(zhì)細(xì)胞處理相同，將大鼠全脊柱取出放入預(yù)冷組織緩沖液的培養(yǎng)皿內(nèi)，解剖顯微鏡下剪斷椎板，后將脊髓完整取出放入預(yù)冷的組織緩沖液的培養(yǎng)皿內(nèi)。小心地將硬脊膜剝離，將脊髓組織剪成1 mm3大小的組織塊，消化方法同星形膠質(zhì)細(xì)胞。將收集的脊髓神經(jīng)細(xì)胞懸液接種于PLL包被的T75培養(yǎng)皿內(nèi)30 min，讓膠質(zhì)細(xì)胞和成纖維細(xì)胞貼壁，后重新收集未貼壁的細(xì)胞，再次200 g離心5 min后重新懸浮細(xì)胞計(jì)數(shù)，接種于PLL包被的直徑22 mm的蓋玻片上。

1.4.3 共培養(yǎng)體系的建立 待神經(jīng)元牢固貼壁于圓形蓋玻片后將圓形蓋玻片覆蓋于星形膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)孔內(nèi)的支架上，并換用神經(jīng)元培養(yǎng)液，每天用倒置顯微鏡觀察神經(jīng)細(xì)胞的生長狀況。

1.5 損傷模型制作與實(shí)驗(yàn)的分組

損傷模型的制作參考Boomkamp等[2]的方法，運(yùn)用15號(hào)手術(shù)刀片作為工具，在鋪有神經(jīng)元的蓋玻片上做劃痕損傷，間距均為1 mm，縱橫方向均做劃痕損傷。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組：神經(jīng)元不損傷也不加藥物干預(yù)，其余的培養(yǎng)條件與以下各組相同；損傷對(duì)照組：神經(jīng)元只作損傷不加藥物干預(yù)；甲強(qiáng)龍組：在損傷的同時(shí)給予1 uM的甲強(qiáng)龍藥物干預(yù)。在損傷及藥物干預(yù)24 h后進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的檢測。

1.6 脊髓神經(jīng)神經(jīng)元的βⅢ-tubulin抗體熒光染色法

在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的玻片用PBS浸洗3 次，每次3 min；用4%的多聚甲醛固定爬片15 min，PBS浸洗玻片3 次，每次3 min；在爬片上滴加正常山羊血清，室溫封閉30 min；吸水紙吸掉封閉液，每張爬片滴加足夠量的稀釋好的一抗(βⅢ-Tubulin)并放入濕盒，4℃孵育過夜；過夜后PBST緩沖液(phosphate buffered saline with tween-20)浸洗爬片3次，每次3 min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光(Cy3)標(biāo)記羊抗小鼠IgG，濕盒中20～37℃孵育1 h，PBST浸洗爬片3 次，每次3 min。用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。

1.7 定量RT-PCR檢測Caspase-3mRNA的表達(dá)

收集細(xì)胞，加入1 mL Trizol裂解液和200 μL氯仿，顛倒數(shù)次混勻，室溫放置5 min。4℃下12 000 rpm離心15 min，轉(zhuǎn)上層水相于新的1.5 mL EP管中，加入等量的異丙醇混勻，室溫靜置10 min。4℃下12 000 rpm再次離心15 min，棄上清，沉淀用預(yù)冷的70%無水乙醇洗3次，空氣干燥5～10 min，溶于20 μL DEPC水中，然后將dNTP加入其中，于42℃溫箱內(nèi)孵育60 min，最后將上述樣品置于70℃溫箱內(nèi)處理5 min滅活逆轉(zhuǎn)錄酶，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：起始溫度為50℃，持續(xù)2 min，后95℃持續(xù)10 min，循環(huán)1次；變性溫度95℃，持續(xù)30 s；退火溫度60℃，持續(xù)30 s，循環(huán)40 次。然后進(jìn)行解離程序，分別在95℃持續(xù)15 s，60℃持續(xù)1 min，95℃持續(xù)15 s，循環(huán)1 次。引物設(shè)計(jì)如下：β-actin上游：5′-CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC-3′，下游：5′-TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT-3′，擴(kuò)增片段長度為240bP；Rat caspase-3上游：5′-TGGAATGTCAGCTCGCAATG-3′，下游：5′-AGGTCCGTTCGTTCCAAAA-3′，擴(kuò)增片段長度為224 bP。目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)量=2-ΔΔCt。

1.8 Western Blot檢測Caspase-3、Bcl-2和Bax的表達(dá)

取適量已加PMSF的RIPA裂解液勻漿細(xì)胞，測蛋白濃度后，各樣品取35 μg總蛋白上樣電泳，根據(jù)蛋白分子量配制10%的PAGE膠電泳。根據(jù)預(yù)染marker顯示，判斷目的蛋白得到充分分離后，停止電泳。轉(zhuǎn)膜后用含5%脫脂奶粉的TBST(封閉液)浸泡PVDF膜，室溫?fù)u床封閉2 h。用封閉液稀釋相應(yīng)的一抗，使PVDF膜浸泡于一抗孵育液中，4℃孵育過夜。TBST充分洗滌PVDF膜5～6 次，5 min/次。用封閉液稀釋相應(yīng)的HRP標(biāo)記二抗(1︰50 000稀釋)，使PVDF膜浸泡于二抗孵育液中，室溫?fù)u床孵育2 h。TBST充分洗滌PVDF膜5～6 次，5 min/次。每張膜滴加適量的ECL底物液，孵育數(shù)分鐘。待熒光帶明顯后，用濾紙吸去多余的底物液，覆上保鮮膜，X線膠片壓片后依次放入顯影液顯影，定影液定影，顯色曝光。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)的一般觀察 原代星形膠質(zhì)細(xì)胞在接種后約4 h即可貼壁，胞體呈圓形，1 d后換液可見細(xì)胞貼壁較緊密，胞核不清晰，細(xì)胞胞體向周圍伸展，突起粗大，胞體扁平，呈“碎布?jí)K”樣，形態(tài)不規(guī)則，表面附有神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞等。經(jīng)傳代、純化后，貼壁的星形膠質(zhì)細(xì)胞在融合約70%時(shí)可用于接種神經(jīng)元。消化后的神經(jīng)元?jiǎng)偝蕡A形，透光性強(qiáng)，體積較小，多數(shù)神經(jīng)元在接種后1 d貼附于圓形蓋玻片上，貼壁后的神經(jīng)元呈圓形或橢圓形，胞體突起，可見部分神經(jīng)突起形成。貼壁后神經(jīng)元的突起逐漸增多、延長，相互之間交織成網(wǎng)狀。體外培養(yǎng)的神經(jīng)元在5～7 d時(shí)生長旺盛，胞體豐滿，胞核清晰可見，細(xì)胞透光性強(qiáng)，呈圓形或橢圓形亮點(diǎn)，突起之間接觸密切。培養(yǎng)10 d后神經(jīng)元狀態(tài)逐漸變差，胞體內(nèi)褐色顆粒增多，突起變細(xì)、消失。

2.2 甲強(qiáng)龍對(duì)神經(jīng)元機(jī)械損傷后凋亡因子表達(dá)的影響 24 h后Western Blot檢測的各項(xiàng)指標(biāo)情況見表1。與空白對(duì)照組相比，神經(jīng)元機(jī)械性損傷24 h后細(xì)胞內(nèi)Bcl-2和Bcl-2/Bax的比例降低，Caspase-3、Bax蛋白及Caspase-3mRNA的表達(dá)升高(P<0.05)；與損傷對(duì)照組相比，甲強(qiáng)龍干預(yù)后機(jī)械損傷的神經(jīng)元內(nèi)Bcl-2和Bcl-2/Bax的比例升高，Caspase-3、Bax蛋白及Caspase-3mRNA的表達(dá)降低(P<0.05)(見圖1～5)。

表1 各組凋亡相關(guān)蛋白的相對(duì)表達(dá)量

圖1 三組BCL-2水平比較

圖2 三組BAX水平比較

圖3 三組Caspase-3水平比較

圖4 三組Bcl-2/Bax水平比較

圖5 三組Caspase-3mRNA水平比較

3 討 論

ASCI的治療及神經(jīng)功能的恢復(fù)一直是醫(yī)學(xué)難題，脊髓損傷后局部發(fā)生復(fù)雜的細(xì)胞和分子間的相互作用來修復(fù)原始的損傷。神經(jīng)細(xì)胞功能的恢復(fù)涉及到損傷后炎性細(xì)胞的作用，膠質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的促進(jìn)和抑制神經(jīng)功能恢復(fù)因子的表達(dá)等。越來越多的證據(jù)表明中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后繼發(fā)的代謝毒素的生產(chǎn)，如活性氧、炎性因子和興奮性氨基酸等通過激活凋亡信號(hào)[3]和自噬作用[4]加重神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。神經(jīng)細(xì)胞的凋亡過程嚴(yán)重影響著神經(jīng)功能的恢復(fù)，抑制脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡過程已成為急性脊髓損傷的一個(gè)治療策略。

甲強(qiáng)龍是一種人工合成的糖皮質(zhì)激素，目前廣泛用于治療各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括白質(zhì)損傷、多發(fā)性硬化癥、急性播散性腦脊髓炎和急性脊髓損傷。其作用機(jī)理可能歸因于抗炎或抗氧化等性能。甲強(qiáng)龍用于急性脊髓損傷患者，可以減少脊髓組織的氧化應(yīng)激反應(yīng)和炎性因子的表達(dá)。有研究還認(rèn)為甲強(qiáng)龍能夠抑制ASCI后自噬相關(guān)蛋白LC3的表達(dá)，抑制脊髓組織內(nèi)自噬細(xì)胞的激活，減少對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷[4]。在馬尾神經(jīng)壓迫的模型內(nèi)，甲強(qiáng)龍能抑制壓迫局部的神經(jīng)組織內(nèi)的促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表達(dá)，p53上調(diào)凋亡調(diào)控因子和p53的表達(dá)也受到抑制[5]。蔡賢華等[1]用螺釘壓迫法建立家兔頸髓損傷模型，通過甲強(qiáng)龍的沖擊治療后發(fā)現(xiàn)甲強(qiáng)龍能夠抑制損傷后caspase-3的表達(dá)和升高Bcl-2/Bax mRNA比例，同時(shí)能上調(diào)超氧化物歧化酶(SOD)的表達(dá)，抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，保護(hù)脊髓神經(jīng)組織。

甲強(qiáng)龍治療急性脊髓損傷的基礎(chǔ)和臨床研究較多，也有報(bào)道研究將其聯(lián)合其他技術(shù)治療急性脊髓損傷[6]，但對(duì)于其治療效果有著不同的學(xué)術(shù)爭論[7]。Caspase-3是細(xì)胞凋亡過程中的標(biāo)志性蛋白，是細(xì)胞凋亡過程中最主要的終末剪切酶。有研究[8]通過不同時(shí)間檢測脊髓損傷模型大鼠的損傷段脊髓組織內(nèi)的caspase-3陽性染色細(xì)胞的比例發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比較甲強(qiáng)龍組的caspase-3陽性細(xì)胞更多，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為甲強(qiáng)龍發(fā)揮其保護(hù)神經(jīng)組織的作用機(jī)制可能并不包括抗凋亡作用。Lee JM等[9]從體內(nèi)和體外的實(shí)驗(yàn)中均發(fā)現(xiàn)，甲強(qiáng)龍保護(hù)的是脊髓損傷后少突膠質(zhì)細(xì)胞，而不是神經(jīng)元。甲強(qiáng)龍能逆轉(zhuǎn)氨甲基磷酸誘導(dǎo)的少突膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)抗凋亡作用的Bcl-x(L)表達(dá)的減少和caspase-3激活過程減少少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡，而相同劑量的甲強(qiáng)龍不會(huì)提高神經(jīng)元的存活率。

在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)甲強(qiáng)龍對(duì)機(jī)械性損傷的神經(jīng)元有保護(hù)作用。我們利用星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元分層培養(yǎng)技術(shù)，建立神經(jīng)元體外培養(yǎng)模型，此模型模擬了體內(nèi)神經(jīng)元的狀態(tài)，即在膠質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)層的作用下對(duì)神經(jīng)元的狀態(tài)進(jìn)行研究，分層培養(yǎng)技術(shù)同時(shí)也降低了非神經(jīng)元細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。在本研究中，神經(jīng)元機(jī)械性損傷后其細(xì)胞內(nèi)的caspase-3水平和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)明顯發(fā)生改變，與空白對(duì)照組比較caspase-3和Bax的水平顯著升高，而Bcl-2的水平則明顯降低，從而促進(jìn)機(jī)械性損傷誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡過程，這一現(xiàn)象與馬尾損傷模型和頸髓壓迫模型中的表現(xiàn)相似[1-5]。同時(shí)神經(jīng)元內(nèi)Bcl-2/Bax蛋白的比例也調(diào)節(jié)著細(xì)胞的凋亡過程[10]，機(jī)械損傷的神經(jīng)元內(nèi)Bcl-2/Bax蛋白的比例顯著降低，意味著機(jī)械損傷后神經(jīng)元內(nèi)以促凋亡因子的表達(dá)為主。使用甲強(qiáng)龍藥物干預(yù)機(jī)械性損傷的神經(jīng)元后，上述結(jié)果發(fā)生逆轉(zhuǎn)，Bcl-2蛋白的表達(dá)和Bcl-2/Bax蛋白的比例較損傷組明顯提高，caspase-3的水平顯著降低，提示甲強(qiáng)龍能夠在細(xì)胞水平顯著抑制神經(jīng)元機(jī)械性損傷后的凋亡過程，從而發(fā)揮對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用。

綜上所述，我們認(rèn)為甲強(qiáng)龍能夠從細(xì)胞分子水平發(fā)揮對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)元的保護(hù)作用，為臨床治療急性脊髓損傷提供理論基礎(chǔ)。

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The Influence of Methylprednisolone on the Expression of Apoptosis Cytokine of Neuron after Acute Mechanical Injury

Yao Nianwei1，2，Xu Feng2，Kang Hui2，etal

(1.Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China；2.Department of Orthpedics，Wuhan General Hosptial of Guangzhou Military District，Wuhan 430070，China)

Objective To research the influence of methylprednisolone on the expression of apoptosis cytokine in the cultured rat spinal neuron after actue mechanical injury.Methods Co-culture astrocytes and neurons were prepared in vitro.The astrocytes and neurons were co-cultured in the control group.And we used the scalpel to cut the neuron in order to make the damage model in the injury group：1uM methylprednisolone was mixed in culture solution in the mechanical damage model in the methylprednisolone group.The apoptosis related factors were tested.Compare expression of apoptosis related factor in 3 groups after cells were cultured 24 h.Results In injury control group，compared with sham control group，caspase-3，caspase-3 mRNA and Bax expression significantly increases(P<0.05)，while the ratio of the Bcl-2/Bax and the expression of Bcl-2 lower(P<0.05).The expression of caspase-3，caspase-3 mRNA and Bax were less in methylprednisolone group compared with the injury control group (P<0.05)，while the Bcl-2 expression and the ratio of the Bcl-2/Bax elevated(P<0.05).Conclusion Methylprednisolone can reduce the expression of apoptosis cytokine after neurons mechanical injury，and increase the rate of the Bcl-2/Bax，inhibit the apoptosis process of neurons.

acute spinal cord injury；methylprednisolone；neuron culture；mechanical damage；apoptosis cytokine

全軍醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究“十一五”計(jì)劃攻關(guān)課題(08G031)；*本文通訊作者：蔡賢華

1008-5572(2015)06-0516-05

R322.7+1

A

2014-11-28

姚年偉(1987- )，男，醫(yī)師，湖北中醫(yī)藥大學(xué)，430065。