eIF4E和Ki67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義

夏偉蘭，沈丹婷，麥慧芬，孫靜，張廣亮

(1深圳市寶安婦幼保健院，廣東深圳518100；2南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院)

·基礎(chǔ)研究·

eIF4E和Ki67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義

夏偉蘭1，沈丹婷1，麥慧芬1，孫靜1，張廣亮2

(1深圳市寶安婦幼保健院，廣東深圳518100；2南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院)

目的 探討eIF4E和Ki67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及意義。方法 采用免疫組化SP法檢測(cè)eIF4E和Ki67在36例Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌、9例Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌及30例正常子宮內(nèi)膜組織中表達(dá)情況，分析兩者與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系以及兩者表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果 eIF4E、Ki67在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)均高于正常子宮內(nèi)膜(P均<0.01)。eIF4E和Ki67的表達(dá)均與子宮內(nèi)膜癌組織病理分級(jí)、手術(shù)臨床分期、肌層浸潤(rùn)程度及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P均<0.05)，二者在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.763，P<0.01)。結(jié)論 eIF4E和Ki67與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān),聯(lián)合檢測(cè)eIF4E和Ki67可能有助于判斷子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后。

子宮腫瘤；eIF4E；Ki67

子宮內(nèi)膜癌(EC)的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，大量原癌基因、抑癌基因、凋亡基因、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子等基因表達(dá)發(fā)生改變，對(duì)EC的發(fā)生發(fā)展具有重要作用[1]。本研究采用SP免疫組化法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織中eIF4E和Ki67的表達(dá)情況，探討二者在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 45例子宮內(nèi)膜癌石蠟包埋標(biāo)本取自2009～2012年南方醫(yī)院病理科手術(shù)切除標(biāo)本，均經(jīng)病理學(xué)檢查確診?；颊吣挲g32～70歲、平均53歲。依照FIGO1988年標(biāo)準(zhǔn)，組織學(xué)病理分級(jí)G1級(jí)13例、G2級(jí)24例、G3級(jí)8例，手術(shù)分期Ⅰ期21例、Ⅱ期17例、Ⅲ期7例。無(wú)肌層浸潤(rùn)8例、淺肌層浸潤(rùn)27例、深肌層浸潤(rùn)10例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移8例。選擇同期因子宮肌瘤行子宮全切患者的子宮內(nèi)膜標(biāo)本30例作為對(duì)照組。所有患者月經(jīng)規(guī)律，無(wú)合并癥及并發(fā)癥，無(wú)婦科內(nèi)分泌疾，術(shù)前半年未使用激素類藥物治療。兩組臨床資料具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法 采用SP染色法，eIF4E一抗工作濃度按1∶300稀釋，Ki67一抗工作濃度按1∶150稀釋，DAB顯色。以PBS代替一抗作為空白對(duì)照，以乳腺癌為陽(yáng)性對(duì)照。采用OLYMPUS-BX51正置熒光顯微鏡觀察染色結(jié)果,eIF4E陽(yáng)性為腺上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒，Ki67陽(yáng)性為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒。每張切片先在低倍鏡(10×10)下篩選出陽(yáng)性表達(dá)較強(qiáng)的區(qū)域，然后在高倍鏡(10×40)下隨機(jī)選擇5個(gè)不連續(xù)視野進(jìn)行拍照，經(jīng)全自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行彩色圖像的采集與存儲(chǔ)。用Imagepro-plus6.0專業(yè)圖像分析軟件對(duì)蛋白表達(dá)情況進(jìn)行半定量分析，計(jì)算光密度值(MOD)。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)分布的正態(tài)性檢驗(yàn)采用Shapiro-wilk正態(tài)性分析；正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，進(jìn)一步檢驗(yàn)樣本總體方差是否齊性。方差齊者M(jìn)OD值的比較采用t檢驗(yàn)或One-way ANOVA方差分析；偏態(tài)分布及方差不齊數(shù)據(jù)，MOD值的比較采用樣本的非參數(shù)檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 eIF4E及Ki67在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá) eIF4E和Ki67陽(yáng)性均呈棕黃色或棕褐色，eIF4E主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，少部分低分化的癌組織細(xì)胞核中亦可見(jiàn)棕黃色顆粒，間質(zhì)未見(jiàn)表達(dá)；Ki67主要定位于細(xì)胞核。eIF4E及Ki67在Ⅰ和Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)的MOD值均顯著高于正常子宮內(nèi)膜(P=0.000),eIF4E和Ki67表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌分型無(wú)明顯相關(guān)(P1=0.244,P2=0.267)。見(jiàn)表1。

表1 eIF4E與Ki67在正常內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜癌組織中 的表達(dá)比較

注：與正常子宮內(nèi)膜比較，*P<0.01。

2.2 eIF4E及Ki67與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的相關(guān)性 見(jiàn)表2。

2.3 eIF4E和Ki67在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)的相關(guān)性 Pearson積差相關(guān)分析顯示，eIF4E與Ki67在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.763，P<0.01)。

表2 eIF4E及Ki67表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系±s)

3 討論

eIF4E是一種新的原癌基因，是帽依賴性mRNA翻譯過(guò)程中的限速因子，在蛋白質(zhì)翻譯合成過(guò)程中起重要調(diào)控作用[2]，其過(guò)度表達(dá)選擇性地增加一些基因產(chǎn)物的表達(dá)，如原癌蛋白、腫瘤浸潤(rùn)相關(guān)基因產(chǎn)物等[3]。已有研究表明，正常組織中eIF4E水平較低，而在多種腫瘤組織中過(guò)表達(dá)，其過(guò)表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，而且這種過(guò)表達(dá)與腫瘤的形成、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4]。近年研究發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)eIF4E過(guò)度表達(dá)并與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)，抑制eIF4E的表達(dá)可以減少腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)[5～8]。本研究顯示，Ⅰ、Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中eIF4E的表達(dá)均顯著高于正常子宮內(nèi)膜組，而Ⅰ型與Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌中eIF4E表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示eIF4E過(guò)度表達(dá)可能導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌的改變，然而不能作為鑒別兩型的標(biāo)志物。進(jìn)一步分析表明，eIF4E表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌FIGO分期、組織學(xué)分級(jí)、肌層浸潤(rùn)深度及淋巴轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，提示eIF4E表達(dá)上調(diào)可能與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，并隨著其惡化程度的增加而持續(xù)增加，其表達(dá)水平對(duì)判斷子宮內(nèi)膜癌的惡性程度有一定價(jià)值，且其可作為預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)。

Ki67是一種與細(xì)胞增殖有關(guān)在核抗原，它的合成、表達(dá)與增殖細(xì)胞的增殖周期有關(guān),其在G0期和G1早期不表達(dá)，G1期中期后開始表達(dá)，在S期及G2期表達(dá)逐漸增加，至M期達(dá)高峰[9]。Ki67能客觀反映細(xì)胞的增殖活性，是臨床上應(yīng)用比較廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)記物[10]，并與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)。其表達(dá)與腫瘤的臨床病理學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)[11]，因此可以用作判斷腫瘤侵襲力和預(yù)后的標(biāo)志。本研究顯示, Ki67表達(dá)與組織學(xué)病理分級(jí)、手術(shù)臨床分期、肌層浸潤(rùn)深度和有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),并隨組織學(xué)病理分級(jí)的增加、手術(shù)臨床分期進(jìn)展、肌層浸潤(rùn)越深及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,其表達(dá)增強(qiáng)，說(shuō)明Ki67在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,提示Ki67過(guò)表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的不良預(yù)后有關(guān)。

本研究對(duì)eIF4E和Ki67的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析后發(fā)現(xiàn)，在子宮內(nèi)膜癌組織中，二者表達(dá)呈顯著正性相關(guān)，其具體機(jī)制可能與mTOR信號(hào)通路有關(guān)。mTOR信號(hào)通路為細(xì)胞啟動(dòng)翻譯信號(hào)及細(xì)胞由G0/G1期進(jìn)入S期所必需，并與蛋白合成、細(xì)胞周期的調(diào)控相關(guān)[12]。正常情況下，eIF4E和其抑制物4E-BPs的結(jié)合形成復(fù)合物，一般不能觸發(fā)翻譯，然而當(dāng)外界刺激激活了mTOR信號(hào)通路，激活的mTOR使其下游引物4E-BP1磷酸化，導(dǎo)致eIF4E與其解離并活化，解離出來(lái)的eIF4E可以激活位于5′2UTR區(qū)的特殊的調(diào)控元件，促使翻譯起始復(fù)合物形成，從而促使翻譯的進(jìn)行，引起腫瘤形成，然后腫瘤細(xì)胞由G1期進(jìn)入S、G2、M期，Ki67的表達(dá)亦隨之增強(qiáng)。

綜上所述，eIF4E、Ki67表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展、分化和侵襲有密切關(guān)系。聯(lián)合檢測(cè)兩者的表達(dá)對(duì)評(píng)價(jià)子宮內(nèi)膜癌生物學(xué)行為、指導(dǎo)選擇治療方案及腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究具有重要意義，可作為子宮內(nèi)膜癌早期診斷、判斷預(yù)后及隨訪的生物學(xué)指標(biāo)，也有可能成為子宮內(nèi)膜癌患者基因治療的選擇。

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