不同時(shí)間去除卵丘細(xì)胞對(duì)短時(shí)受精結(jié)果的影響

李國(guó)臻，鄭波，郭鈺英，楊志偉，陶林林

(邢臺(tái)不孕不育?？漆t(yī)院，河北邢臺(tái)054000)

不同時(shí)間去除卵丘細(xì)胞對(duì)短時(shí)受精結(jié)果的影響

李國(guó)臻，鄭波，郭鈺英，楊志偉，陶林林

(邢臺(tái)不孕不育?？漆t(yī)院，河北邢臺(tái)054000)

目的 探討短時(shí)受精技術(shù)進(jìn)行體外受精(IVF)時(shí)，不同時(shí)間去除卵丘細(xì)胞對(duì)短時(shí)受精結(jié)果的影響。方法 選擇行IVF助孕的原發(fā)不孕且取卵后本周期移植的患者226例，隨機(jī)分為A組119例和 B組107例，A組移植精卵結(jié)合4～6 h后去除卵丘細(xì)胞發(fā)育來的胚胎，B組移植精卵結(jié)合4～6 h后保留卵丘細(xì)胞發(fā)育來的胚胎。比較兩組的胚胎種植率和妊娠率。結(jié)果 A、B組胚胎種植率分別為36.51%和52.09%，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；妊娠率分別為52.94%和66.35%，兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論 短時(shí)受精過程中，在保證患者受精的情況下，將剩余的卵母細(xì)胞保留卵丘細(xì)胞可以提高胚胎的種植率。

體外受精；去除卵丘細(xì)胞時(shí)間；種植率

使用短時(shí)受精技術(shù)進(jìn)行體外受精(IVF)時(shí)，卵子脫顆粒時(shí)間何時(shí)為最佳存在爭(zhēng)議。早脫顆粒可能會(huì)增加多精受精率，影響胚胎基因表達(dá)與甲基化修飾，影響胚胎質(zhì)量；晚脫顆?？赡軐?dǎo)致少數(shù)患者受精失敗，失去補(bǔ)救單精子卵胞漿顯微注射(ICSI)的最佳時(shí)機(jī)[1]。本研究觀察了IVF去除卵丘細(xì)胞和保留卵丘細(xì)胞發(fā)育來的胚胎的種植率和妊娠率，為短時(shí)受精及短時(shí)受精早補(bǔ)救ICSI周期移植胚胎的選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年6月～2013年11月在我院行IVF短時(shí)受精第三天移植的原發(fā)性不孕患者226例，年齡25～35歲，獲卵數(shù)大于10枚。病因?yàn)榕皆l(fā)不孕并男方精液正常或輕度少弱精子癥。將患者隨機(jī)分為A組119例和B組107例，A組年齡(28.26±4.34)歲，基礎(chǔ)卵泡刺激素(FSH)(5.23±1.65)IU/L；B組年齡(27.85±4.85)歲，基礎(chǔ)FSH(4.95±2.07)IU/L。兩組年齡、基礎(chǔ)FSH具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 受精方法及分組 患者超促排卵，肌注人絨毛膜促性腺激素(hCG)6 000～10 000 U后36～37 h經(jīng)陰道B超取卵，取卵后常規(guī)給予黃體酮(P)肌肉注射80～100 mg/d。取卵后3～4 h進(jìn)行微滴法授精。每微滴為30～50 μL含5%血清白蛋白的G-IVF，加入10 000～20 000條精子(精液處理均為密度梯度法)，加卵1～2枚。精卵共孵育4～6 h后用巴氏德吸管隨機(jī)取出5～10枚卵母細(xì)胞，輕輕吹打去除卵丘細(xì)胞，置于新鮮培養(yǎng)液微滴中(含5% HSA的G-IVF)中觀察第二極體出現(xiàn)情況(無卵丘細(xì)胞)；若>50%的卵母細(xì)胞出現(xiàn)第二極體判定受精成功。將剩余的卵母細(xì)胞保留卵丘細(xì)胞自微滴移出，放入另一新鮮的培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)(含5% HSA的G-IVF)。受精后18～20 h(D1天)全部去除卵丘細(xì)胞，觀察受精情況，并進(jìn)行原核評(píng)分。根據(jù)移植胚胎來源分組：A組為移植受精后4～6 h去除卵丘細(xì)胞發(fā)育來胚胎的患者，B組為移植受精后4～6 h保留卵丘細(xì)胞(18～20 h去除卵丘細(xì)胞)發(fā)育來胚胎的患者。

1.2.2 胚胎培養(yǎng) 受精卵繼續(xù)培養(yǎng)至72 h觀察發(fā)育情況，并進(jìn)行胚胎分級(jí)。以胚胎細(xì)胞數(shù)≥6枚，卵裂球大小較為均勻，碎片≤10%為可用胚胎。于取卵后72 h移植。移植胚胎數(shù)目1～3枚，胚胎移植后給予黃體酮支持黃體。移植后14 d測(cè)血hCG，移植28～35 d行B超檢查，發(fā)現(xiàn)孕囊即為臨床妊娠，種植率為B超下可見孕囊數(shù)/移植胚胎數(shù)×100%。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，組間均數(shù)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組平均獲卵數(shù)、平均移植數(shù)、移植日內(nèi)膜、妊娠率比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均>0.05)，兩組種植率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

表1 兩組發(fā)育胚胎移植后的結(jié)局比較

注：與B組比較，*P<0.05。

3 討論

Chen等[2]提出，在常規(guī)IVF短時(shí)受精后6 h通過剝除卵丘細(xì)胞觀察第二極體是否排出可預(yù)測(cè)受精與否。此后，許多研究表明早補(bǔ)救ICSI能有效預(yù)防受精失敗，提高妊娠率，獲得良好的臨床結(jié)局[3～6]。也有學(xué)者報(bào)道，早期脫顆粒多精受精的比例偏高。其原因可能是：在受精早期，過早脫卵丘細(xì)胞的機(jī)械操作很可能對(duì)卵母細(xì)胞造成損傷，特別是透明帶的損傷[4]，可能影響皮質(zhì)反應(yīng)和透明帶反應(yīng)，如果造成透明帶上的微小缺口，也會(huì)增加多精入卵的機(jī)會(huì)；卵丘顆粒細(xì)胞上的特有成分可降低多精受精率，受精早期去除卵丘細(xì)胞會(huì)使其微環(huán)境發(fā)生改變，也可能造成增加多精受精的機(jī)會(huì)。我們?cè)趯?shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，短時(shí)受精過程中4～6 h全部去除卵丘細(xì)胞多精受精的比例偏高，所以采取部分剝除法(5～10枚)去除卵丘細(xì)胞，若大于50%就不再去除卵丘細(xì)胞，避免了多精受精的概率，也可以達(dá)到早判斷受精結(jié)果的目的，與文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致。關(guān)于顆粒細(xì)胞對(duì)后續(xù)胚胎的發(fā)育潛能的影響，以及短時(shí)受精早去除卵丘細(xì)胞對(duì)胚胎基因表達(dá)與甲基化修飾的影響、對(duì)胚胎發(fā)育潛能和種植率的影響，目前尚無定論。李蕾等[8，9]研究認(rèn)為，顆粒細(xì)胞可以分泌一些對(duì)早期胚胎發(fā)育有利的物質(zhì)，如生長(zhǎng)因子、糖蛋白等，其可作為共培養(yǎng)細(xì)胞促進(jìn)胚胎的發(fā)育。而且顆粒細(xì)胞也可以通過代謝去除胚胎體外微環(huán)境中的不利于胚胎發(fā)育的物質(zhì)，如重金屬二價(jià)離子等。Raman等[10]研究認(rèn)為，卵丘細(xì)胞與卵母細(xì)胞之間存在的包括縫隙連接在內(nèi)的細(xì)胞間復(fù)雜的連接機(jī)制，對(duì)卵泡的發(fā)育及胚胎的質(zhì)量都至關(guān)重要。有研究對(duì)常規(guī)IVF(精卵共孵育16～18 h)與短時(shí)受精的情況進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)短時(shí)受精不能提高胚胎利用率和臨床妊娠率[11]，另外一些研究的結(jié)論則相反[10，12]。本研究只比較了短時(shí)受精后去除卵丘細(xì)胞與保留卵丘細(xì)胞所發(fā)育來胚胎的移植后結(jié)局。結(jié)果顯示，移植選擇短時(shí)受精后全部為4～6 h去除卵丘細(xì)胞發(fā)育來的胚胎與受精后18～20 h去除卵丘細(xì)胞發(fā)育來的胚胎的種植率比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示卵母細(xì)胞周圍的顆粒細(xì)胞不僅與受精有重要關(guān)系，而且對(duì)胚胎之后的發(fā)育潛能也具有重要意義，為移植時(shí)的胚胎選擇(胚胎評(píng)分同等級(jí)別的情況下首選保留卵丘細(xì)胞的胚胎移植)提供了一個(gè)參考。由于例數(shù)所限，本文數(shù)據(jù)顯示雖然保留卵丘細(xì)胞組的妊娠率高于無卵丘細(xì)胞組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

綜上所述，在短時(shí)受精去除卵丘細(xì)胞判斷受精情況時(shí)，在能保證正確判斷受精的前提下要盡可能減少數(shù)目。在新鮮移植過程中優(yōu)先選擇沒有去除卵丘細(xì)胞發(fā)育來的胚胎，有助于改善輔助生殖的結(jié)局，安全性更高。

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郭鈺英

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.01.031

R711.6

B

1002-266X(2015)01-0074-02

2014-01-08)