冠心病患者可溶性低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1的表達(dá)變化及臨床意義

王韶屏，廖 瑋，王 健，李世英，李 芳，程姝娟

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院心內(nèi)科28病區(qū)，北京市心肺血管疾病研究所，北京 100029；2.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院，四川 成都 610072)

冠心病患者可溶性低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1的表達(dá)變化及臨床意義

王韶屏1，廖 瑋2，王 健1，李世英1，李 芳1，程姝娟1

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院心內(nèi)科28病區(qū)，北京市心肺血管疾病研究所，北京 100029；2.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院，四川 成都 610072)

目的 觀察冠心病患者血漿可溶性低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(sLRP1)濃度的變化，并分析其與基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)和高敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)濃度變化的相關(guān)性。方法 選取2013年8～10月北京安貞醫(yī)院心內(nèi)科住院的12例穩(wěn)定型心絞痛(SAP)、32例急性冠脈綜合征(ACS)，同期冠脈造影陰性的患者8例為對(duì)照組。于介入術(shù)前空腹檢測(cè)血漿sLRP1、MMP-9和hsCRP的濃度，比較三組之間差異。介入術(shù)后第一天空腹檢測(cè)患者血漿sLRP1，并與術(shù)前相比較，分析冠心病患者sLRP1與MMP-9、hsCRP的相關(guān)性。結(jié)果 術(shù)前ACS組sLRP1、MMP-9和hsCRP濃度顯著高于SAP組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P< 0.01)，而SAP組和對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。ACS組患者介入術(shù)前和術(shù)后sLRP1差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。ACS患者sLRP1與hsCRP濃度顯著正相關(guān)(r=0.713，P= 0.000)，與MMP-9濃度無(wú)相關(guān)性。結(jié)論 sLRP1可能是反映ACS炎癥狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)。

急性冠脈綜合征；炎癥；可溶性低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1；基質(zhì)金屬蛋白酶9；C反應(yīng)蛋白

冠狀動(dòng)脈內(nèi)不穩(wěn)定粥樣斑塊破裂后導(dǎo)致急性血栓形成是急性冠脈綜合征(ACS)的病理基礎(chǔ)，常伴隨著大量的單核-巨噬細(xì)胞的激活，炎癥因子的釋放，如C反應(yīng)蛋白(CRP)[1]和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)[2]。低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白(LRP1)是低密度脂蛋白受體(LDLR)家族的成員之一，具有抗炎作用，可保護(hù)血管的完整性[3]。除了錨定于細(xì)胞膜的LRP1外，在人的血漿和腦脊液中還發(fā)現(xiàn)有可溶性的LRP1(sLRP1)[4]。研究顯示，sLRP1是一種與炎癥相關(guān)的蛋白，可在慢性炎癥性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血漿中顯著增高，而sLPR1本身也可能具有一定的炎癥調(diào)控作用[5]。目前尚不清楚sLRP1是否和冠心病，尤其是ACS具有相關(guān)性。本研究觀察了冠心病患者血漿sLRP1濃度的變化，探討sLRP1與MMP-9和CRP的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年8～10月北京安貞醫(yī)院心內(nèi)科28病房收治的12例穩(wěn)定型心絞痛(SAP)和32例ACS組。診斷均符合2012年中國(guó)經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療指南[6]，所有患者均接受了介入治療。對(duì)照組8例為冠脈造影陰性，排查冠心病的患者。所有入選患者均排除2周內(nèi)急慢性感染、風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病史、惡性腫瘤、嚴(yán)重肝臟疾病、嚴(yán)重腎臟疾病、心肌炎、心肌病、嚴(yán)重的心力衰竭(紐約心臟病協(xié)會(huì)分級(jí)IV級(jí))以及近一個(gè)月內(nèi)他汀類藥物服用史者。三組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。本試驗(yàn)符合倫理委員會(huì)相關(guān)規(guī)定，入選患者均簽署知情同意書。

表1 三組患者一般資料比較

BMI：體重指數(shù)；SBP：收縮壓；DBP：舒張壓；FBS：空腹血糖；eGFR()：腎小球?yàn)V過率。

1.2 方法 ①常規(guī)術(shù)前檢查，術(shù)前生化指標(biāo)包括高敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)(免疫比濁法)。②術(shù)前以及介入術(shù)后第一天空腹抽取肘靜脈血，置于含肝素抗凝劑的離心管中，離心(3000 r/min，10 min)，取血漿分裝至EP管中，-80 ℃保持備用。sLRP1 96孔檢測(cè)試劑盒(Corning Inc.，Corning，NY，USA)包埋有0.5 μg/孔的GST-RAP，5%BSA孵育1小時(shí)阻斷非特異性結(jié)合位點(diǎn)。每孔加入不同濃度的sLRP1(1～500 ng)，4 ℃孵育1小時(shí)后，20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，pH 7.4，and 0.1%Tween-20洗滌5次，加入LRP1特異性抗體8 g1，4 ℃孵育1小時(shí)，再次洗滌5次后，與HRP標(biāo)記的二抗4 ℃孵育1小時(shí)，徹底洗滌后加入底物顯色。酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)讀取OD值。標(biāo)準(zhǔn)曲線在20～500ng呈線性(r2>0.95)?；颊哐獫{樣本稀釋后進(jìn)行檢測(cè)分析。③術(shù)前空腹采血檢測(cè)MMP-9，操作步驟按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，符合正態(tài)分布的兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較選用方差分析及SNK法；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)。相關(guān)分析時(shí)，服從雙變量正態(tài)分布的計(jì)量資料采用Pearson方法，不服從雙變量正態(tài)分布資料采用Spearman法。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組sLRP1、hsCRP及MM-9比較 ACS組術(shù)前MMP-9、hsCRP及血漿sLRP1濃度顯著高于SAP組和對(duì)照組，術(shù)后sLRP1濃度顯著高于SAP組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.01)。SAP組和對(duì)照組血漿sLRP1、MMP-9和hsCRP濃度差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，見表2。

2.2 ACS患者sLRP1與MMP-9、hsCRP的相關(guān)性 ACS組患者血漿sLRP1與MMP-9濃度無(wú)相關(guān)性 (r=-0.317，P= 0.077)，見圖1a；而與hsCRP顯著正相關(guān) (r=0.713，P= 0.000)，見圖1b。

表2 三組sLRP1、hsCRP及MMP-9比較

*與ACS組比較，P< 0.01

圖1 ACS組介入術(shù)前血漿sLRP1與MMP-9、hsCRP的相關(guān)性分析

3 討論

sLRP1被發(fā)現(xiàn)于20世紀(jì)末，其生物學(xué)意義一直備受關(guān)注。近年的研究表明，sLRP1可能是急慢性炎癥性疾病的一個(gè)生物標(biāo)記物。如Wygrecka等[7]發(fā)現(xiàn)，在急性呼吸窘迫征患者的支氣管肺泡灌洗液中有sLRP1濃度的顯著增高，并與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。Gorvoy等[5]也證實(shí)，與正常對(duì)照和骨性關(guān)節(jié)炎患者相比，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的血漿sLRP1濃度顯著增高。ACS的病理機(jī)制涉及不穩(wěn)定斑塊的破裂、血栓形成和大量炎癥因子的釋放。已有多個(gè)炎癥因子已被證實(shí)與其密切相關(guān)。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果首次證實(shí)，sLRP1濃度也與ACS密切相關(guān)，但與SAP無(wú)關(guān)聯(lián)。但是在SAP和ACS患者行經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈血管成形術(shù)后sLRP1水平較術(shù)前無(wú)顯著增高，說(shuō)明斑塊破裂本身并不能引起sLRP1增高，而提示sLRP1的增高可能是觸發(fā)斑塊破裂的原因。

與對(duì)照組和SAP患者相比，ACS患者血漿hsCRP和MMP-9濃度顯著升高，該結(jié)果與之前的研究報(bào)道一致。CRP是一種急性期蛋白，可反應(yīng)患者體內(nèi)炎癥的活動(dòng)程度，包括動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的急性炎癥過程，是預(yù)測(cè)未來(lái)急性心血管事件發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，是ACS預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)[1]。MMP-9是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的一個(gè)蛋白分子，可降解斑塊處的纖維帽，促使斑塊破裂發(fā)生。MMP-9水平反映了斑塊的穩(wěn)定性，是冠心病患者危險(xiǎn)分層的一個(gè)指標(biāo)[2]。既往的研究發(fā)現(xiàn)，ACS患者M(jìn)MP-9的升高水平與發(fā)病當(dāng)時(shí)hsCRP的升高水平無(wú)相關(guān)性，與之后的hsCRP峰值水平也無(wú)相關(guān)性[2]。hsCRP和MMP-9可能是與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊發(fā)生、發(fā)展及破裂有著不同關(guān)系兩個(gè)蛋白分子。進(jìn)一步分析ACS患者sLRP1與hsCRP和MMP-9濃度的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，sLRP1和hsCRP具有顯著的相關(guān)性，而與MMP-9無(wú)關(guān)。該結(jié)果提示sLRP1的生物學(xué)意義可能與hsCRP類似，是反映機(jī)體炎癥狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)。由于研究樣本量有限，尚不明確sLRP1對(duì)冠心病患者遠(yuǎn)期預(yù)后的影響。

綜上，本研究提示sLRP1可能是反映ACS患者炎癥水平的一個(gè)指標(biāo)，其與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展以及斑塊的穩(wěn)定性有待進(jìn)一步研究。

[1] Cheng JM，Oemrawsingh RM，Garcia-Garcia HM，et al.Relation of C-reactive protein to coronary plaque characteristics on grayscale，radiofrequency intravascular ultrasound，and cardiovascular outcome in patients with acute coronary syndrome or stable angina pectoris (from the ATHEROREMO-IVUS study)[J].Am J Cardiol，2014，114(10)：1497-1503.

[2] 張清隊(duì)，蔡力，陶劍虹，等.急性冠脈綜合征患者白介素-18及基質(zhì)金屬蛋白酶-9檢測(cè)的意義[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2008，5(3)：39-40.

[3] Wang S，Subramanian V，Lu H，et al.Deficiency of recepto-associated protein attenuates angiotensin II-induced atherosclerosis in hypercholesterolemic mice without influencing abdominal aortic aneurysms[J].Atherosclerosis，2012，220(2)：375-380.

[4] Liang F，Jia J，Wang S，et al.Decreased plasma levels of soluble low density lipoprotein receptor-related protein-1(sLRP) and the soluble form of the receptor for advanced glycation end products(sRAGE) in the clinical diagnosis of Alzheimer’s disease[J].J Clin Neurosci，2013，20(3)：357-361.

[5] Gorovoy M，Gaultier A，Campana WM，et al.Inflammatory mediators promote production of shed LRP1/CD91，which regulates cell signaling and cytokine expression by macrophages[J].J Leukoc Biol，2010，88：769-778.

[6] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)介入心臟病學(xué)組，中華心血管病雜志編輯委員會(huì).中國(guó)經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療指南2012(簡(jiǎn)本)[J].中華心血管病雜志，2012，40(4)：271-277.

[7] Wygrecka M，Wilhelm J，Jablonska E，et al.Shedding of low-density lipoprotein receptor-related protein-1 in acute respiratory distress syndrome[J].Am J Respir Crit Care Med，2011，184(4)：438-448.

Expression and clinical significance of soluble low density lipoprotein receptor related protein 1 in patients with coronary artery disease

WANG Shao-ping1，LIAO Wei2，LI Shi-ying1，WANG Jian1，LI Fang1，CHENG Shu-juan1

(1.The 28thWard，Department of Cardiology，Beijing Anzhen Hospital，Capital Medical University & Beijing Institute of Heart，Lung and Blood Vessel Diseases，Beijing 100029，China.2.Sichuan Academy of Medical Sciences & Sichuan Provincial People’s Hospital，Chengdu 610072，China)

CHENGShu-juan

Objective To observe the changes of soluble low density lipoprotein receptor related protein 1(sLRP1) concentration in coronary artery disease and its association with matrix metalloproteases-9 (MMP-9) and C reactive protein (CRP).Methods Patients with stable angina pectoris (SAP，n=12)，acute coronary syndrome (ACS，n=32) and control subjects (n=8) from August to October，2013 in Beijing Anzhen Hospital were enrolled in the study.The plasma concentration of sLRP1，MMP-9 and hsCRP was tested by specific ELISA analysis.Differences in these three markers were compared among the three groups.Furthermore，sLRP1 in fasting plasma was detected on the first day after intervention and compared to before intervention，and explore the correlation between the SLRP1 and MMP-9、hsCRP.Results The plasma concentration of sLRP1 was increased in patients with ACS when compared to patients with SAP (P<0.01) and the control group (P<0.01).However，no significant difference was found between the SAP group and control group.The concentration of MMP-9 and hsCRP were increased in the ACS group compared to the SAP and control groups.However，there is no significant difference between the SAP and control groups.The concentration of sLRP1 was correlated to hsCRP significantly (P= 0.000) but not MMP-9.Conclusion sLRP1 may reflex inflammatory status of patients with acute coronary syndrome.

Acute coronary syndrome；Inflammation；Soluble low density lipoprotein receptor related protein 1；Matrix metalloproteases-9；C reactive protein

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：81000131)；北京市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：7122058)

程姝娟

R541.4

A

1672-6170(2015)04-0030-03

2015-04-25；

2015-05-12)