黃芪中黃芪皂甙成分的提取分離與純化工藝研究

胡菊

摘 要 通過4步驟實(shí)現(xiàn)黃芪中黃芪皂甙的提取分離和純化，4步驟分別為索氏醇提、回流醇提、萃取純化、樹脂吸附純化法對(duì)黃芪皂甙進(jìn)行了提取分離。利用紅外光譜分析儀對(duì)提取和純化產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)分析。

關(guān)鍵詞 黃芪皂甙；黃芪；提取分離；純化；工藝研究

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1673-890X（2015）09-124-02

黃芪為豆科植物蒙古黃芪或莢膜黃芪的干燥根，是我國(guó)常用的補(bǔ)氣藥材，其味甘、性微溫，具有增強(qiáng)機(jī)體非特異性、改善心功能、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、利尿消腫、益衛(wèi)固表、托瘡生肌、抗菌、抗病毒、抗疲勞、抗衰老、促進(jìn)造血功能、保護(hù)肝臟之功效[1]。黃芪皂甙是其主要藥效成分，常被作為黃芪質(zhì)量判斷的重要指標(biāo)[2]。筆者采用紅外光光譜儀和紫外分光光度計(jì)測(cè)定提取純化產(chǎn)物的純度和含量，比較了2種黃芪皂甙的提取方法和兩種純化方法的優(yōu)缺點(diǎn)，為黃芪提取工藝的優(yōu)化提供參考，以期提高黃芪的藥用價(jià)值。

1 材料、儀器與試劑

1.1 材料

研究中所用黃芪均為莢膜黃芪，產(chǎn)地為寧夏回族自治區(qū)金山地區(qū)。

1.2 儀器

研究中使用的儀器有：紅外光譜分析儀PE-580、722型可見分光光度計(jì)、30～400 mm砂芯層析儀、索氏提取器、水浴鍋、粉碎機(jī)FW-100型等。

1.3 試劑

黃芪甲甙標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，AB-8樹脂購(gòu)自拿開大學(xué)化工廠，溴化鉀（KBr）為優(yōu)級(jí)純?cè)噭?，其余試劑均為?guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

2 實(shí)驗(yàn)

2.1 提取

2.1.1 索氏提取[3]

對(duì)黃芪進(jìn)行粉碎，完全過30目標(biāo)準(zhǔn)篩后充分混勻。取3 g黃芪粉碎物置于含有50 mL甲醇的索氏提取器中，過夜。79 ℃水浴浸提6 h后，徹底回收甲醇，少量蒸餾水溶解浸提產(chǎn)物，轉(zhuǎn)至分液漏斗中采用乙醚進(jìn)行脫脂，直至無(wú)色，揮發(fā)盡乙醚后，采用樹脂吸附法純化產(chǎn)物。

2.1.2 回流提取

對(duì)黃芪進(jìn)行粉碎，完全過30目標(biāo)準(zhǔn)篩后充分混勻。取8 g黃芪粉碎物，74℃下用甲醇回流提取3次，3次提取的中的甲醇用量和提取時(shí)間分別為：第一次甲醇，黃芪（v∶m）=10∶1，過夜浸泡后回流提取2 h；第二、三次方法相同，甲醇：黃芪（v∶m）=8∶1，回流提取1.5 h，合并第二、三次的提取液，徹底回收甲醇，少量蒸餾水溶解浸提產(chǎn)物，轉(zhuǎn)至分液漏斗中采用乙醚進(jìn)行脫脂3次，乙醚用量分別為20、20、10 mL，揮發(fā)盡乙醚后，分別采用萃取法和樹脂吸附法純化產(chǎn)物。

2.2 純化

2.2.1 萃取法

用飽和的正丁醇在分液漏斗中萃取提取液，共3次，正丁醇用量分別為20、20、15 mL，合并3次萃取的溶液，徹底回收正丁醇，即得黃芪皂甙粗品。

2.2.2 樹脂吸附法

將提取液通過樹脂柱，采用蒸餾水沖洗樹脂柱，再采用80%乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫溶液收集并徹底揮發(fā)乙醇，即得黃芪皂甙粗品。

3 紅外光譜分析

采用紅外光譜分析儀對(duì)得到的粗品進(jìn)行檢測(cè)，具體方法為：用優(yōu)級(jí)純溴化鉀（KBr）試劑將提取到的黃芪皂甙粗品和黃芪甲甙標(biāo)準(zhǔn)品分別壓制成片狀，用紅外光譜分析儀對(duì)壓片進(jìn)行分析，檢測(cè)粗品中黃芪皂甙的含量。結(jié)果顯示，通過樹脂吸附獲得的黃芪皂甙粗品的紅外光譜吸收峰與黃芪甲甙標(biāo)準(zhǔn)品的吸收峰更為接近，這也說明提取得到的產(chǎn)物是黃芪皂甙，同時(shí)樹脂吸附法的提取純化效果更好。

4 黃芪皂甙分析方法

4.1 制備黃芪甲甙標(biāo)準(zhǔn)曲線

于1/100 000天平上稱取黃芪甲甙標(biāo)準(zhǔn)品，精確到0.005 1 g，無(wú)損失轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，無(wú)水乙醇溶解并定容。向帶塞的反應(yīng)管中分別加入0.00、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75 mL黃芪甲甙無(wú)水乙醇溶液，補(bǔ)充無(wú)水乙醇到0.75 mL，加入0.75 mL 8%香蘭素（w/v），冰浴狀態(tài)下加入7.50 mL 72%（v/v）硫酸，混勻后62 ℃水浴20 min，冷卻并混勻后在分光光度計(jì)上進(jìn)行測(cè)定。取不含黃芪甲甙的試管作參比，在λ=544 nm下測(cè)定吸光值，得濃度與吸光值的回歸方程，A=2.1389×C-0.0015，R2=0.9998，所有測(cè)定需在30 min內(nèi)完成。

4.2 皂甙含量的測(cè)定

取黃芪皂甙粗品于250 mL容量瓶中，無(wú)水乙醇溶解并定容，混勻后吸取0.05 mL于具塞刻度試管中，加入0.75 mL的8%香蘭素（w/v），冰浴狀態(tài)下加入7.50 mL 72%（v/v）硫酸，混勻后62 ℃水浴20 min，冷卻并混勻后在分光光度計(jì)上進(jìn)行測(cè)定。取不含黃芪甲甙的試管作參比，在λ=544nm下測(cè)定吸光值，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算黃芪皂甙含量。索氏提取聯(lián)合樹脂吸附法得到的黃芪皂甙的含量為1.25%，回流法提取聯(lián)合正丁醇萃取得到的黃芪皂甙的含量為1.46%，回流法提取聯(lián)合樹脂吸附法得到的黃芪皂甙的含量為1.17%，三者差異不大。

5 結(jié)語(yǔ)

目前，使用的黃芪皂甙方法有很多，主要應(yīng)用的有水浸提取法和醇提取法，后者較前者更為有效。本研究發(fā)現(xiàn)，索氏提取法和回流提取法2種方法對(duì)黃芪皂甙的提取差異不大，可按需選擇。樹脂吸附法較萃取法的純化效果更佳，另外樹脂具有再生能力，可經(jīng)適當(dāng)處理后再次使用。因此，建議提取黃芪皂甙時(shí)可先采用索氏提取法進(jìn)行粗提取，再通過樹脂吸附純化，這樣可以得到純度較高的黃芪皂甙且節(jié)約成本。

參考文獻(xiàn)

[1]姚美村，齊瑩，畢開順，等.黃芪藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究[J].中國(guó)野生植物資源，2000，19（2）： 33-36.

[2]閻巧娟，韓魯佳，江正強(qiáng)，等. 黃芪皂甙的提取方法[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，5（6）：61-65.

[3]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：211.

（責(zé)任編輯：劉昀）